一种半定量测定羟基红花黄色素A的快速检测方法

一种半定量测定羟基红花黄色素a的快速检测方法
技术领域
1.本发明涉及菊科红花羟基红花黄色素a成分检测技术领域，具体涉及一种半定量测定羟基红花黄色素a的快速检测方法。


背景技术：

2.红花(carthamus tinctorius l.)是菊科(compositae)红花属(carthamus)的一年生草本植物，是《中国药典》2020年版收载药物，属常用中药，具有活血化瘀，通经止痛的功效。红花的一种主要药用活性成分为羟基红花黄色素a(hydroxysafflor yellow a，hsya)，广泛应用于治疗血脉闭塞、心绞痛和冠心病等疾病。红花种质资源是药用红花研究、利用的珍贵材料，是培育高产、优质红花新品种的物质基础。云南某单位现已保存来源世界各地4700余份红花种质资源，数量还在不断增加。对于红花种质资源的药用标准是其中羟基红花黄色素a(c27h32o16)不得少于1.0％，这就要求对各红花种质资源中的羟基红花黄色素a进行测定。目前测定羟基红花黄色素a(hsya)含量依照《中国药典》高效液相色谱法(通则0512)测定，具体地，红花研磨过筛、精密称定，加甲醇再称定重量，超声处理滤过，取滤液上机，采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，用甲醇
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乙腈
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磷酸为流动相，按检测波长，测定峰面积，计算得到羟基红花黄色素a的重量。此种检测方法在用于大批量筛选药用资源时就显得力不从心，首先其需要购买专用仪器，仪器价格昂贵且需要经过培训后才能使用，其次分析操作繁琐，导致检验时间长、成本高，难以在基层单位推广和应用。因此，迫切需要研发一种快速检测红花种质资源中药用成分羟基红花黄色素a含量是否大于1.0％的方法，以供实验室和基层单位快速筛选出符合药用标准的种质资源。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于提供一种半定量测定羟基红花黄色素a的快速检测方法，解决现有测定方法所用仪器昂贵、操作繁琐导致的检测时间长成本高的问题。
4.为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：一种半定量测定羟基红花黄色素a的快速检测方法，其特征在于包括如下步骤：
5.s1.取红花植物进行前处理后，在100～105℃干燥4～5小时，粉碎后筛分得到粉末；
6.s2.取粉末置于离心管内，加入丙酮溶液，称重后超声处理后，离心取上层清液作为供试溶液，另取以80％丙酮溶液为溶剂定容、浓度为1.0％的羟基红花黄色素a标准溶液作为对照溶液；
7.s3.取供试溶液和对照溶液在同一块薄层板上点样品，再用以氯仿
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甲酸
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水
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甲醇为展开剂，展开高度为4～5cm，展开后取出晾干；
8.s4.采用浓度10％的硫酸乙醇溶液作为显色剂喷洒在薄层板上，加热至斑点清晰；
9.s5.对比供试溶液和对照溶液羟基红花黄色素a中r
f
值相同的位置，当出现与对照溶液色谱相应的位置上显示相同颜色的斑点，根据该斑点颜色深浅进行判定：当斑点颜色
明显比对照溶液颜色深，则判定供试溶液对应的红花植物中羟基红花黄色素a含量高于1.0％；当斑点颜色明显比对照溶液颜色浅，则判定供试溶液对应的红花植物中羟基红花黄色素a含量低于1.0％；当斑点颜色明显比对照溶液颜色接近时，则判定供试溶液对应的红花植物中羟基红花黄色素a含量近似于1.0％。
10.更进一步的技术方案是所述步骤s1中前处理具体为选取红花植物不带子房的干燥管状花，去除红花花瓣中叶子、子房、苞叶、种子和虫卵，确保杂质含量不超过2.0％，经干燥后含水量低于13％。
11.更进一步的技术方案是所述步骤s1中干燥后红花植物放冷30min，要求其总灰度不得过15.0％，酸性不溶性灰分不得过5.0％，紫外
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可见光光度法在518nm的波长处吸光度不得低于0.2，粉碎后过0.425mm筛分得到粉末。
12.更进一步的技术方案是所述步骤s2中供试溶液制取的具体步骤为先取本品粉末约0.1g，精密称定，置于带盖2ml离心管中，精密加入80％丙酮溶液1ml，称定重量在30℃超声处理30分钟，放冷再称定重量，用80％丙酮溶液补足减失的重量，室温下16000r/min离心5～10min，静置1h后，取上层清液作为供试溶液。
13.更进一步的技术方案是所述步骤s3中供试溶液和对照溶液各取1ul，展开剂中氯仿
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甲酸
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水
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甲醇质量比为7:2:3:0.4。
14.更进一步的技术方案是所述步骤s4中加热温度为105℃。
15.与现有技术相比，本发明的有益效果是：通过将红花植物样品经干燥后粉碎至细粉，经丙酮超声波提取制得供试溶液，再与对照溶液经点样、展开、显色后，通过观察供试溶液与对照溶液颜色的差异，快速判定供试溶液对应的红花植物样品中羟基红花黄色素a含量是否符合药用标准，上述方法具有快速、简单、易操作、检测成本低的特点，可供实验室和基层单位用于红花种质资源的快速筛查，容易掌握便于推广，具有良好的应用前景。
附图说明
16.图1为本发明的流程图。
17.图2本发明实施例1中检测结果对比图。
具体实施方式
18.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
19.实施例1
20.s1.选取红花植物(云红花七号)不带子房的干燥管状花，去除红花花瓣中叶子、子房、苞叶、种子和虫卵等，确保杂质含量不超过2.0％。将处理后的红花植物在100～105℃下干燥4小时，密封后放冷30分钟，称重使其含水量不超过13％，要求其总灰度不得过15.0％，酸性不溶性灰分不得过5.0％，紫外
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可见光光度法在518nm的波长处吸光度不得低于0.2，粉碎后过0.425mm筛分得到粉末。
21.s2.先取本品粉末0.1g，精密称定，置于带盖2ml离心管中，精密加入80％丙酮溶液1ml，称定重量在30℃超声处理30分钟，放冷再称定重量，用80％丙酮溶液补足减失的重量，
室温下16000r/min离心5～10min，静置1h后，取上层清液作为供试溶液。另取以80％丙酮溶液为溶剂定容、浓度为1.0％的羟基红花黄色素a标准溶液作为对照溶液。
22.s3.取供试溶液和对照溶液各1ul在同一块薄层板上点样品，再用以氯仿
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甲酸
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水
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甲醇为展开剂，展开剂中氯仿
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甲酸
‑
水
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甲醇质量比为7:2:3:0.4，展开高度为4～5cm，展开后取出晾干。
23.s4.采用浓度10％的硫酸乙醇溶液作为显色剂喷洒在薄层板上，于105℃加热至斑点清晰。
24.s5.对比供试溶液和对照溶液羟基红花黄色素a中r
f
值相同的位置，当出现与对照溶液色谱相应的位置上显示相同颜色的斑点，根据该斑点颜色深浅进行判定。检测结果如图1所示，供试溶液中斑点颜色明显比对照溶液颜色深，则判定红花植物中羟基红花黄色素a含量高于1.0％。
25.取不同红花品种植物样品38份，采用本发明所述的hsya快速半定量检测方法操作并做出判定，与hplc仪器定量分析结果比较，判定结果正确率为94.73％(如表1)。
26.表1不同红花品种植物样品hsya含量半定判定结果
[0027][0028][0029]
取同一红花品种不同植物样28份，采用本发明所述的hsya快速半定量检测方法操作并做出判定，与hplc仪器定量分析结果比较，判定结果正确率为92.86％(如表2)。
[0030]
表2同一红花品种不同植物样品hsya含量半定判定结果
[0031][0032]
由表1、表2可知，本发明所述的hsya快速半定量检测方法准确性高。
[0033]
尽管这里参照本发明的多个解释性实施例对本发明进行了描述，但是，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本技术公开的原则范围和精神之内。更具体地说，在本技术公开、附图和权利要求的范围内，可以对主题组合布局的组成部件或布局进行多种变形和改进。除了对组成部件或布局进行的变形和改进外，对于本领域技术人员来说，其他的用途也将是明显的。