技术特征：
1.生物样品中小分子物质检测的前处理试剂，其包括：磁珠悬液、活化液、重悬液、清洗液和洗脱液；所述磁珠悬液中磁珠为表面修饰十八烷基的磁珠；所述活化液为三氯乙酸的水溶液；所述洗脱液为甲酸、甲醇和水的混合液；所述重悬液为水，所述清洗液为水。2.根据权利要求1所述的前处理试剂，其特征在于，所述磁珠悬液中溶液为纯化水，其中磁珠的密度为10mg/ml。3.根据权利要求1所述的前处理试剂，其特征在于，所述活化液中三氯乙酸的体积分数为0.1％。4.根据权利要求1所述的前处理试剂，其特征在于，所述洗脱液中，甲酸、甲醇和水的体积比为0.1:90:10。5.根据权利要求1～4任一项所述的前处理试剂，其特征在于，其中还包括解离剂，所述解离剂中包括：1.5g/l十二烷基磺酸钠、100g/l二甲基亚砜、50g/l乙醇、0.05m/l tris
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hcl。6.根据权利要求1～4任一项所述的前处理试剂，其特征在于，其中还包括内标溶液，所述内标溶液为小分子物质的溶液，所述小分子物质包括泊沙康唑、25
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羟基维生素d2、25
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羟基维生素d3、维生素a、维生素e和/或免疫抑制剂；所述免疫抑制剂为他克莫司、西罗莫司、依维莫司、环孢霉素a、子囊霉素、西罗莫司
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d3、依维莫司
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d4和/或环孢霉素a
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d
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。7.生物样品中小分子物质检测的前处理方法，其特征在于，以权利要求1～6任一项所述的前处理试剂对生物样品进行处理。8.根据权利要求7所述的前处理方法，其特征在于，所述生物样品为血液；所述小分子物质为泊沙康唑、25
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羟基维生素d2、25
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羟基维生素d3、维生素a、维生素e和/或免疫抑制剂；所述免疫抑制剂为他克莫司、西罗莫司、依维莫司、环孢霉素a、子囊霉素、西罗莫司
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d3、依维莫司
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d4和/或环孢霉素a
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d
12
。9.根据权利要求8所述的前处理方法，其特征在于，包括：将所述磁珠以所述活化液活化后，以超纯水重悬，得到磁珠工作液；将血液与所述磁珠工作液混合，孵育后分离磁珠；磁珠经超纯水清洗后，以洗脱液洗脱，然后取上清液；所述磁珠工作液中.0.，磁珠的密度为10mg/ml；所述血液与磁珠工作液的体积比为(10～100):100；所述孵育为室温孵育2～5min；所述磁珠与洗脱液的质量
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体积比为1mg:100μl。10.根据权利要求9所述的前处理方法，其特征在于，还包括血液与磁珠混合前，将血液以所述解析剂进行解析；所述血液与解析剂的体积比为1:2；所述解析的条件为37℃，30min。11.一种血液中小分子物质的检测方法，其特征在于，包括：以权利要求6～9任一项所述的前处理方法对血液进行处理后，以lc
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ms/ms的液相色谱
进行检测。12.根据权利要求11所述的检测方法，其特征在于，所述小分子物质为泊沙康唑：所述lc
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ms/ms的液相色谱的条件包括：色谱柱为c18柱，柱温为50℃，流动相流速为0.4ml/min；流动相a为含2mm乙酸铵、0.1wt％甲酸的水溶液；流动相b为含2mm乙酸铵、0.1wt％甲酸的甲醇溶液；洗脱程序包括：0～1.2min，流动相a的体积分数由95％至10％，1.2～2.0min，流动相a的体积分数为10％，2.0～2.1min，流动相a的体积分数由10％至95％，2.1～3.0min，流动相a的体积分数为95％；所述lc
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ms/ms的质谱检测条件包括：离子源为电喷雾电离离子源，正离子模式；毛细管电压0.8kv；脱溶剂气温度500℃；脱溶剂气流速1000l/h；反吹气流速50l/h；脱溶剂气和反吹气为纯度99.9％的氮气；碰撞气为氩气，其纯度99.999％；扫描方式为多反应监测模式。13.根据权利要求11所述的检测方法，其特征在于，所述小分子物质为25
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羟基维生素d2和/或25
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羟基维生素d3，所述lc
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ms/ms的液相色谱的条件包括：色谱柱为c18柱，柱温为45℃，流动相流速为0.4ml/min；流动相a为含0.1wt％甲酸的水溶液；流动相b为含0.1wt％甲酸的甲醇溶液；洗脱程序包括：0～1.0min，流动相a体积分数为20％，1.0～1.8min，流动相a体积分数由20％至10％，1.8～2.6min，流动相a体积分数由10％至2％，2.6～3.0min，流动相a体积分数为2％，3.0～4.0min，流动相a体积分数由2％至20％；所述lc
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ms/ms的质谱检测条件包括：离子源为电喷雾电离离子源，正离子模式；毛细管电压2.0kv；脱溶剂气温度400℃；脱溶剂气流速800l/h；反吹气流速50l/h；脱溶剂气和反吹气为纯度99.9％的氮气；碰撞气为氩气，其纯度99.999％；扫描方式为多反应监测模式。14.根据权利要求11所述的检测方法，其特征在于，所述小分子物质为维生素a和/或维生素e，所述lc
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ms/ms的液相色谱的条件包括：色谱柱为c18柱，柱温为45℃，进样温度为8℃，流动相流速为0.4ml/min；流动相a为含0.1wt％甲酸的水溶液；流动相b为含0.1wt％甲酸的甲醇溶液；洗脱程序包括：0～0.4min，流动相a体积分数由15％至5％，
0.4～2min，流动相a体积分数由5％至0％，2～2.7min，流动相a体积分数为0％，2.7～3.3min，流动相a体积分数由0％至15％；所述lc
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ms/ms的质谱检测条件包括：离子源为电喷雾电离离子源，正离子模式；毛细管电压3.0kv；脱溶剂气温度600℃；脱溶剂气流速1100l/h；反吹气流速50l/h；脱溶剂气和反吹气为纯度99.9％的氮气；碰撞气为氩气，其纯度99.999％；扫描方式为多反应监测模式。15.根据权利要求11所述的检测方法，其特征在于，所述小分子物质为免疫抑制剂；所述免疫抑制剂为他克莫司、西罗莫司、依维莫司、环孢霉素a、子囊霉素、西罗莫司
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d3、依维莫司
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d4和/或环孢霉素a
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d
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；所述lc
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ms/ms的液相色谱的条件包括：色谱柱为c18柱，柱温为50℃，进样温度为2～8℃，流动相流速为0.5ml/min；流动相a为含2mm乙酸铵、0.1wt％甲酸的水溶液；流动相b为含2mm乙酸铵、0.1wt％甲酸的甲醇溶液；洗脱程序包括：0～0.2min，流动相a体积分数为50％，0.2～1min，流动相a体积分数由50％至0％，1～2min，流动相a体积分数为0％，2～2.1min，流动相a体积分数由0％至50％，2.1～3min，流动相a体积分数为50％；所述lc
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ms/ms的质谱检测条件包括：离子源为电喷雾电离离子源，正离子模，扫描方式为多反应监测模式；离子源参数包括：离子化电压5.5kv，温度550℃、气帘气35psi、碰撞气7、喷雾气50psi、辅助加热气50psi，mrm离子通道采用氨加合离子。
技术总结
本发明涉及分析检测技术领域，尤其涉及生物样品中小分子物质检测的前处理试剂。本发明提供的试剂中，包括磁珠悬液、活化液和洗脱液。以该试剂对生物样品中待测物的提取效率高且提取回收率高，所需样本量少，能够高效、准确富集生物样品中待测物。相比于免疫生物磁珠试剂盒，开封后的有效期长，更稳定。并且，配套使用的仪器成本低，更有利于前处理流程的自动化。更有利于前处理流程的自动化。
技术研发人员：耿瑞 蔡克亚 刘亚娟 赵高岭 张学东 孙江彦 高培丽 李宾宾 申业明
受保护的技术使用者：郑州安图生物工程股份有限公司
技术研发日：2021.05.25
技术公布日：2021/9/21