一种用于检测样品中γ-羟丁酸成分的方法与流程

一种用于检测样品中
γ
‑
羟丁酸成分的方法
技术领域
1.本发明涉及化学检测技术领域，具体涉及一种用于检测样品中γ
‑
羟丁酸成分的方法。


背景技术：

2.γ
‑
羟丁酸，简称ghb，其是一种无色、无味、无臭的液体。它是一种神经药物，在许多国家被认定为毒品。由于ghb为无色无味的药物，而且会混合水来服用，吸食者服用后可出现性欲增强的症状并快速产生兴奋，苏醒后会出现短暂性记忆缺失，即对昏迷期间发生的任何事件无记忆。正常人体脑部通常会透过合成一种叫做gaba神经传递质的方式产生ghb，一般人体自身 ghb在血液及尿液中的含量小于10μg/ml。ghb在人体内的代谢很快，一般 5
‑
6小时即恢复为人体正常值。因此对怀疑服食ghb的人员，需要尽快提取其尿液及血液，以供检测证实服用ghb的事实。γ
‑
丁内酯(ghl)也在正常人体内自然存在，且会体内代谢转化为ghb。在体外，酸性条件下会部分转化为ghb，在弱碱性并且加热时，会快速转化为ghb。因此，在检测体内、体外的ghb成分时，必须考虑gbl的影响。
3.有关体内、体外ghb检验的报道，主要采用gc
‑
ms法或hplc
‑
ms方法。gc
‑
ms仪是国内理化检测部门最主要的分析设备，因此建立一个快速有效的gc
‑
ms检验方法十分重要。
4.目前，常规的gc
‑
ms法检验，通常均需先将ghb用溶剂萃取浓缩后进行衍生化反应，而且衍生化反应一般均需在无水条件下进行；也有将ghb在酸性溶液中转化为gbl再提取浓缩后进行gc
‑
ms分析的，但是没有考虑对检材本身是否含有gbl的问题，且ghb与gbl是动态平衡，定量困难；目前的gc
‑
ms检测ghb的方法，操作繁琐，重现性差，效果均不甚理想。


技术实现要素：

5.为此，本发明提供一种用于测定样品中γ
‑
羟丁酸浓度的方法。
6.为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
7.本发明提供一种用于检测样品中γ
‑
羟丁酸成分的方法，所述方法包括以下步骤：
8.向待测检材加入相转移催化剂、二氯甲烷、五氟苄基溴二氯甲烷溶液混合后，加热至80℃以上，离心分离，得到有机层溶液，将所述有机层溶液吹干得到γ
‑
羟丁酸衍生物，将所述γ
‑
羟丁酸衍生物用甲醇溶解后，进行气相色谱质谱联用进行定性分析。
9.本发明的一个实施例中，所述相转移催化剂为四丁基溴化铵。
10.本发明的一个实施例中，所述γ
‑
羟丁酸衍生物特征离子为m/z 87、m/z 161、m/z 181。
11.本发明的一个实施例中，所述加热方式为密闭加热。
12.本发明的一个实施例中，所述方法还包括利用气相色谱质谱联用分析空白检材以及γ
‑
羟丁酸标准品检材，并将所述待测检测值与待测样品中的γ
‑
羟丁酸检测量进行关联，进行定性分析，得到所述待测检材中γ
‑
羟丁酸的浓度值。
13.本发明的一个实施例中，所述空白检材中添加相近浓度的对照品，和待测检材同
时进行定量测定，所述待测检材中γ
‑
羟丁酸浓度浓度应在添加对照品浓度的
±
50％以内。
14.本发明的一个实施例中，对所述待测检材的双样相对相差d按照式(1) 及式(2)计算：
[0015][0016][0017]
其中，c1、c2为两份待测检材样品平行定量测定的数值。
[0018]
本发明的一个实施例中，以内标
‑
校准曲线法或按式(3)计算待测检材样品中γ
‑
羟丁酸的浓度：
[0019][0020]
其中，c为检材中目标物的浓度，单位为微克每毫升；a为检材中目标物的峰面积；a
′
为标准溶液中目标物的峰面积；ai
′
为标准溶液中内标物的峰面积；ai为检材中内标物的峰面积；c为标准溶液中目标物的浓度，单位为微克每毫升。
[0021]
本发明具有如下优点：
[0022]
本发明采用相转移催化技术，实现了将血液、尿液、酒水饮料等水相中的 ghb直接衍生化；利用相转移催化剂，实现了将水相中的衍生化产物自动萃取至有机相中，减少了萃取的步序。
[0023]
本发明的测定方法采用ghb标准品，按本方法制备了ghb衍生化产物，测得了其gc
‑
ms质谱图，采用m/z 87、161、181为其特征离子，将检材与ghb标准品的衍生化产物保留时间和质谱图或特征离子及丰度比进行比较定性。
[0024]
本发明采用相转移催化技术，以四丁基溴化铵为相转移催化剂，五氟苄基溴为衍生化试剂，在ph值8
‑
9加热时，将水液中的ghb直接衍生化，并将衍生化产物转移到有机相二氯甲烷中。
[0025]
本发明的测定方法中，gbl在弱碱性条件下加热时，会转化为ghb；但 ph值在8
‑
9加热时，gbl不会转化为ghb，从而排除了gbl对检测ghb的影响，检测结果更准确。
附图说明
[0026]
为了更清楚地说明本发明的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
[0027]
本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。
[0028]
图1为本发明提供的用于测定样品中γ
‑
羟丁酸浓度的方法的流程图；
[0029]
图2为本发明提供的ghb的五氟苄基溴衍生物质谱图；
[0030]
图3为本发明提供的为内标1,4
‑
二溴苯质谱图；
[0031]
图4为本发明提供的为ghb的五氟苄基溴衍生物特征选择离子质谱图。
具体实施方式
[0032]
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0033]
适用检材：ghb中毒的，可采用血液、尿液、胃液为待测检材；作为咖啡、啤酒等体外待测检材因含量较高，可以用去离子水稀释10
‑
100倍，高速离心后取上清液备用，由于因服用ghb要产生相应的效果，一般至少得服食 0.5克的ghb，即使服用500毫升的饮料，浓度也要达到1mg/ml以上。
[0034]
试剂和材料，除另有规定外，试剂均为分析纯，水为去离子水。需要的试剂和材料如下：a)ghb：以γ
‑
羟丁酸钠作为ghb检测的标准品，分析纯，含量99％以上；b)ghb系列工作液：精密称取γ
‑
羟丁酸钠对照品适量，用去离子水配制标准系列工作液；c)五氟苄基溴溶液：用二氯甲烷配制成10％(v/v)的溶液；d)1,4
‑
二溴苯(dbb)溶液：用二氯甲烷配制成100μg/ml 的溶液；e)ph8.4磷酸盐缓冲液；四丁基溴化铵；二氯甲烷；甲醇。
[0035]
仪器设备：a)气相色谱
‑
质谱联用仪:配有电子轰击离子源(ei)；b)分析天平：感量0.1mg；c)高速离心机；d)恒温电加热器(含氮吹)；e)精密移液器。
[0036]
实施例1
[0037]
如图1所示，本实施例提供的一种用于检测样品中γ
‑
羟丁酸成分的方法，其包括以下步骤：
[0038]
步骤一、样品处理
[0039]
取待测检材血液、尿液或咖啡、酒水等饮料稀释液，视情用去离子水将待测检材10
‑
100倍稀释，离心取上清液备用，其待测检材0.1ml，置于4ml 样品瓶中，加入0.5ml磷酸盐缓冲液与1.5ml去离子水，然后加入约20mg 四丁基溴化铵及1.0ml的二氯甲烷，加入10％(v/v)的五氟苄基溴二氯甲烷溶液20μl及50μl的1,4
‑
二溴苯溶液，加盖旋紧密封，置于80℃恒温电加热器中恒温30min,于转速8000r/min离心5min,分离出有机层，室温氮气吹至近干，甲醇溶解定容至50μl，取1.0μl进行气相色谱质谱联用分析。
[0040]
步骤二、气相色谱
‑
质谱联用仪检测
[0041]
1、气相色谱
‑
质谱联用仪测定参考条件
[0042]
气相色谱
‑
质谱联用仪测定参考条件如下：
[0043]
a)色谱柱：推荐使用hp
‑
5ms 30m
×
0.25mm
×
0.25μm高效毛细管色谱柱；也可以使用rtx
‑
5ms,rtx
‑
5 amine,db
‑
5ms,pte
‑
5等色谱柱；
[0044]
b)柱温：初始温度80℃，保持1min，以20℃/min升到280℃，保持3min；
[0045]
c)进样口温度：250℃；
[0046]
d)传输线温度：280℃；
[0047]
e)载气：氦气，纯度≥99.9999％，流速1.0ml/min；
[0048]
f)分流比：不分流进样，1min后分流比50：1；
[0049]
g)进样量：1.0μl；
[0050]
h)离子源：电子轰击离子源；
[0051]
i)检测方式：全扫描或选择离子扫描检测，ghb衍生物的特征离子为m/z 87,m/z 161,m/z 181；内标1,4
‑
二溴苯的特征离子为m/z 236,m/z 155,m/z 75。
[0052]
2、定性测定
[0053]
将空白检材、空白添加ghb标准品检材和样品待测检材按照步骤一处理后，在相同色谱条件下进行gc/ms分析，分别以空白添加ghb标准品的检材总离子流图中内标和ghb衍生物的保留时间和保留时间对应的特征离子峰作为参照，对样品检材进行定性分析，以m/z 87为定量离子，以空白检材进行方法的专属性测定。ghb衍生物的gc/ms分析参数参见图2
‑
图4。
[0054]
3、定量测定
[0055]
3.1精密度与检出限：定量测定采用内标法
‑
单点校正法或内标法
‑
标准曲线法定量测定。该方法精密度：cv＜15％；检出限：全扫描方式为10μg/ml 的ghb；选择离子扫描监测方式为0.5μg/ml的ghb。
[0056]
3.2内标法
‑
单点校正法：在空白检材中添加相近浓度的对照品，和待测检材按照以上步骤同时进行定量测定。检材浓度应在添加对照品浓度的
±
50％以内。
[0057]
3.3内标法
‑
校准曲线法：在空白检材中添加适量ghb对照品制得一系列校准样品，以ghb衍生化物与内标峰面积比对ghb浓度绘制标准曲线，用标准曲线法对待测检材进行定量，并且保证所测样品中ghb的浓度值在其线性范围内。
[0058]
步骤三、平行试验
[0059]
按照以上步骤对同一试样进行平行试验。
[0060]
平行试验中两份待测检材测定结果按两份待测检材的平均值计算，双样相对相差不得超过20％。
[0061]
双样相对相差d按照式(1)及式(2)计算：
[0062][0063][0064]
其中，式中：c1、c2‑
两份样品平行定量测定的结果。
[0065]
步骤四、空白试验
[0066]
除以相同基质空白替代待测检材外，均按上述步骤进行。
[0067]
步骤五、结果计算
[0068]
以内标
‑
校准曲线法或按式(3)计算待测检材样品中ghb的浓度：
[0069][0070]
式中：c
‑
待测检材中目标物的浓度，单位为微克每毫升(μg/ml)；a
‑
待测检材中目标物的峰面积；a
′‑
标准溶液中目标物的峰面积；ai
′‑
标准溶液中内标物的峰面积；ai
‑
检材
中内标物的峰面积；c
‑
标准溶液中目标物的浓度，单位为微克每毫升(μg/ml)。
[0071]
步骤五、ghb检材的gc/ms分析参考图谱
[0072]
如图2所示，为ghb的五氟苄基溴衍生物质谱图。如图3所示，为内标 1,4
‑
二溴苯质谱图；如图4所示，为ghb的五氟苄基溴衍生物特征选择离子质谱图。
[0073]
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。