1.本发明涉及生物化学检测技术领域，尤其涉及一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法及其应用。
背景技术：
2.多胺是一种含有至少2个氨基的化合物分子，广泛存在于生物细胞中随着细胞的增殖、分化而变化，是调节机体生理活动和病理过程的重要因素；探究生物体的生理多胺水平是探究人体dna表达、新陈代谢活动的有效途径。近些年的研究发现多胺代谢在肿瘤的形成机制中发挥着重要的作用，作为生物合成多胺的关键酶，鸟氨酸脱羧酶和s-腺苷甲硫氨酸脱羧酶的基因表达在治疗肿瘤的体外实验研究中已得到印证，为肿瘤研究提供了新的思路。对生物体(尤其人体)多胺代谢的研究成为生命科学领域的热门课题。
3.为了有效获取生物体内的多胺代谢信息，多胺的测定分析方法也随着生命科学的进步飞速发展。现有多胺及相关代谢物的分析方法主要有生物学方法和化学方法；生物学方法又分为酶测定和免疫学测定方法，其中酶测定通过特定酶催化底物实现待测物的定量，免疫学方法将多胺与大分子蛋白质结合用于放射免疫分析。化学方法分为非衍生法和衍生法，其中非衍生法有薄层层析和纸电泳方法，由于多胺的结构特性不够显著，非衍生法的灵敏度较低，衍生法是现有多胺测定分析的主流方法。现有衍生法分为柱前衍生和柱后衍生，柱前衍生在分离前通过衍生化试剂与目标待测物反应得到紫外或荧光衍生物，例如中国公开专利cn103575826公开了一种鹅组织中多胺含量的高效液相色谱检测方法，采用苯甲酰氯和氢氧化钠混合，对鹅组织匀浆液进行水浴衍生，之后将衍生液过c18小柱进行固相萃取，萃取后进行液相色谱检测；中国公开专利cn105424823公开了一种烟草根茎叶中多胺类物质的检测方法，采用3，5-二硝基苯甲酰氯对烟草样品进行衍生化，经过液相色谱-光电二极管阵列检测器进行检测。现有技术的衍生化操作较为繁琐，局限了其在多胺分析中的应用；柱后衍生的灵敏度高，但是需要在仪器中引入衍生试剂接入装置和反应器，对仪器的要求很高。质谱作为一种灵敏度高、特异性强的分析方法，其与液相色谱的联用是提升检测分析效率和数据质量的有效手段。在这一背景下，将液质联用应用于生物样本，探究一种测定结果准确可靠，便于实验操作，仪器响应度高，普适性强的生物样本中多胺及代谢物检测方法成为本领域亟待解决的问题。
技术实现要素：
4.本发明通过提供一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法，解决了现有技术中多胺及相关代谢物的检测结果精密度差，测试方法繁琐的缺陷，实现了一种测定结果准确可靠，便于实验操作，仪器响应度高，适用生物样本广泛的多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法。
5.本发明第一方面提供了一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法，具体步骤包括：
6.s1.对生物样本进行提取，得到提取液；
7.s2.对提取液进行衍生化处理，得到待测液；
8.s3.采用高效液相色谱-质谱联用仪对待测液中的多胺及相关代谢物进行测定。
9.在一种优选的实施方式中，所述多胺及相关代谢物包括腐胺，尸胺，鲱精胺，亚精胺，酪胺，组胺，苯乙胺，色胺，精氨酸，鸟氨酸，s-腺苷蛋氨酸，丙氨酸，谷氨酸，甘氨酸，色氨酸，苏氨酸，蛋氨酸，缬氨酸，赖氨酸，亮氨酸，异亮氨酸和苯丙氨酸中的一种或多种的组合。
10.在一种优选的实施方式中，当生物样本为固态时，所述s1步骤具体为：将生物样本加入离心管中，加入第一提取液，混合均匀，研磨，冰水浴下超声，离心，收集上清液即为提取液。
11.在一种优选的实施方式中，当生物样本为液态时，所述s1步骤具体为：将生物样本置于冰水浴中解冻，然后转移至离心管中，加入第二提取液，混合均匀，冰水浴下超声，离心，收集上清液即为提取液。
12.在一种优选的实施方式中，所述s2步骤具体为：取上清液于离心管中，加入衍生化试剂，涡旋均匀，在35-45℃条件下反应0.5-1.5h，加入0.0.5-0.2％vol有机酸水溶液，混合均匀，在2～10℃，11500-14000rpm条件下离心5-20min，得到待测液。
13.在一种优选的实施方式中，所述衍生化试剂包括邻苯二醛，丹磺酰氯，9-芴甲基氯甲酸酯，甲苯磺酰氯，苯甲酰氯中的一种或多种的组合。
14.在一种优选的实施方式中，所述高效液相色谱-质谱联用仪装备有色谱柱；色谱柱的规格为100
×
2.1mm，1.8μm；色谱柱的温度为30-40℃。
15.在一种优选的实施方式中，所述高效液相色谱-质谱联用仪的进样温度为2-10℃，进样量为1-5μl。
16.在一种优选的实施方式中，所述高效液相色谱-质谱联用仪中质谱的工作参数为：毛细管电压：+4000/-3500v，喷嘴电压：+500/-500v，雾化气温度：200～350℃，雾化气流速：4～6.5l/min，鞘流气温度：200～350℃，鞘流气流速8～13l/min，喷雾器压强40～50psi。
17.本发明第二方面提供了一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法的应用，该检测方法应用于人体新陈代谢和癌症防治领域的研究。
18.有益效果：
19.本发明提供的生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法具有以下优点：
20.(1)本发明能够高效准确地检测生物样本(尤其是人体肝脏和血浆)的多胺及相关代谢物水平，检测结果准确可靠，平行样品的离散度小；
21.(2)本发明测试多种目标产物的可行性强，各色谱峰能够有效分离，且峰形好，色谱峰与目标化合物的相关系数高，能够满足靶向代谢组学分析的要求；
22.(3)本发明仪器响应程度高，能够对低含量样品进行测定，且测试步骤简便，仅需12min即可完成测试，检测效率高，易于在分析检测领域推广；
23.(4)本发明为人体新陈代谢和癌症防治领域的研究提供了新思路，对于生命科学的进步具有重要意义。
具体实施方式
24.参选以下本发明的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本发
明的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。
25.如本文所用术语“由
…
制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
26.连接词“由
…
组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由
…
组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
27.当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
28.单数形式包括复数讨论对象，除非上下文中另外清楚地指明。“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。
29.说明书和权利要求书中的近似用语用来修饰数量，表示本发明并不限定于该具体数量，还包括与该数量接近的可接受的而不会导致相关基本功能的改变的修正的部分。相应的，用“大约”、“约”等修饰一个数值，意为本发明不限于该精确数值。在某些例子中，近似用语可能对应于测量数值的仪器的精度。在本技术说明书和权利要求书中，范围限定可以组合和/或互换，如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。
30.此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。
31.为了解决上述问题，本发明第一方面提供了一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法，具体步骤包括：
32.s1.对生物样本进行提取，得到提取液；
33.s2.对提取液进行衍生化处理，得到待测液；
34.s3.采用高效液相色谱-质谱联用仪对待测液中的多胺及相关代谢物进行测定。
35.在一些优选的实施方式中，所述多胺及相关代谢物包括腐胺，尸胺，鲱精胺，亚精胺，酪胺，组胺，苯乙胺，色胺，精氨酸，鸟氨酸，s-腺苷蛋氨酸，丙氨酸，谷氨酸，甘氨酸，色氨酸，苏氨酸，蛋氨酸，缬氨酸，赖氨酸，亮氨酸，异亮氨酸和苯丙氨酸中的一种或多种的组合。
36.进一步优选，所述多胺及相关代谢物包括鲱精胺，精氨酸，腐胺，尸胺，鸟氨酸，亚精胺，精胺和s-腺苷蛋氨酸。
37.在一些优选的实施方式中，所述生物样本在分析前避光储存于-80℃冰箱中。
38.在一些优选的实施方式中，当生物样本为固态时，所述s1步骤具体为：将生物样本
加入离心管中，加入第一提取液，混合均匀，研磨，冰水浴下超声，离心，收集上清液即为提取液。
39.进一步优选，当生物样本为固态时，所述s1步骤具体为：将生物样本加入离心管中，加入第一提取液，涡旋10-30s混合均匀，在30-45hz条件下研磨2-5min，冰水浴下超声2-10min，在-20～-80℃静置0.5-2h，在-2～-5℃，11000-13000rpm条件下离心5-15min，收集上清液即为提取液。
40.进一步优选，所述第一提取液为70-100％vol乙腈水溶液。
41.更进一步优选，所述生物样本和第一提取液的固液比为(3-20)：1。
42.在一些优选的实施方式中，当生物样本为液态时，所述s1步骤具体为：将生物样本置于冰水浴中解冻，然后转移至离心管中，加入第二提取液，混合均匀，冰水浴下超声，离心，收集上清液即为提取液。
43.进一步优选，当生物样本为液态时，所述s1步骤具体为：将生物样本置于4℃冰水浴中解冻，然后转移至离心管中，加入第二提取液，涡旋10-30s混合均匀，冰水浴下超声5-20min，在-20～-80℃静置0.5-2h，在-2～-5℃，11500-14000rpm条件下离心5-30min，收集上清液即为提取液。
44.更进一步优选，所述生物样本和第二提取液的体积比为1：(3-5)。
45.所述第二提取液为甲醇，乙腈，乙醇，丙酮中的一种或多种的组合。
46.生物样本中多胺及相关代谢物具有含量低、容易发生降解等特性，在实际检测过程中需要快速、准确地进行分析；预处理和上机检测的时间过长往往得不到稳定有效的检测结果，而预处理时间过短往往不能有效提取生物样本中的目标化合物。与此同时不同的生物样本具有动态化、复杂化特点，现有的多胺分析方法难以有效、全面地对多种生物样本进行多胺水平的有效检测。本发明通过实验探究发现，当采用乙腈对生物样本进行提取，并以特定的涡旋-超声-静置-离心操作，能够促进生物样本中多胺及相关代谢物的浸出；设置超声、静置、离心的操作温度，能够显著抑制生物样本中多胺及相关代谢物在提取过程中的生理降解过程，生物样本中目标化合物的检测定量下限低，对于固态、液态生物样本均能有效检测。但是该提取方法在破坏细胞组织的同时，不仅将多胺等代谢物溶出到提取液中，同时也将生物体中的其它杂质分子卷携出来，引发内源性干扰较大，数据结果不够稳定的问题。
47.在一些优选的实施方式中，所述s2步骤具体为：取上清液于离心管中，加入衍生化试剂，涡旋均匀，在35-45℃条件下反应0.5-1.5h，加入0.0.5-0.2％vol有机酸水溶液，混合均匀，在2～10℃，11500-14000rpm条件下离心5-20min，得到待测液。
48.在一些优选的实施方式中，所述衍生化试剂包括邻苯二醛，丹磺酰氯，9-芴甲基氯甲酸酯，甲苯磺酰氯，苯甲酰氯中的一种或多种的组合。
49.进一步优选，所述衍生化试剂为丹磺酰氯。
50.在一些优选的实施方式中，所述提取液和衍生化试剂的体积比为(1-3)：1。
51.在一些优选的实施方式中，所述高效液相色谱-质谱联用仪装备有waters acquity uplc hss t3色谱柱；色谱柱的规格为100
×
2.1mm，1.8μm；色谱柱的温度为30-40℃。
52.在一些优选的实施方式中，所述高效液相色谱-质谱联用仪的进样温度为2-10℃，
进样量为1-5μl。
53.在一些优选的实施方式中，所述高效液相色谱-质谱联用仪的流动相分为流动a相和流动b相，具体流动条件为：
54.0～0.5min：流动相a相为75％
→
75％，流动b相为25％
→
25％；
55.0.5～5.9min：流动相a相为75％
→
2％，流动相b相为25％
→
98％；
56.5.9～9.4min：流动相a相为2％
→
2％，流动相b相为98％
→
98％；
57.9.4～9.5min：流动相a相为2％
→
75％，流动相b相为98％
→
25％；
58.9.5～12min：流动相a相为75％
→
75％，流动相b相为25％
→
25％。
59.所述流动相的流速为200-800μl/min。
60.在一些优选的实施方式中，所述流动a相为甲酸及其衍生物的水溶液；流动b相为甲酸，甲醇，乙腈，乙醇，丙酮中的一种或多种的组合。
61.进一步优选，所述流动a相为8-13mm的甲酸盐水溶液；流动b相为乙腈。
62.更进一步优选，所述流动a相还含有0.05-0.15％vol的甲酸。
63.所述流动a相为10mm的甲酸铵水溶液；且流动a相还含有0.1％vol的甲酸。
64.生物样本中多胺物质的分离测定方法多样，其中薄层色谱的灵敏度低、难以实现自动化，气相色谱的样品前处理步骤复杂，检测效率低，毛细管电泳检测的灵敏度高，但是仪器维护费用高昂，难以普及；高效液相色谱法因灵敏度高、方法便捷成为多胺物质分析检测的有效手段。多胺本身不具有紫外和荧光结构特性，无法直接进行上机检测结果；丹磺酰氯作为一种强荧光标记物，其检测灵敏度能够比紫外标记物高2-3个数量级；但是丹磺酰氯的衍生时间久、衍生化后的副产物较多，对多种多胺物质进行测试时难以实现各目标待测物的有效分离。本发明进一步研究发现，当采用丹磺酰氯对生物样本提取液进行衍生化处理，并通过waters acquity uplc hss t3色谱柱对衍生化产物进行进一步分离后，通过如上所述的特定洗脱程序，能够实现多胺通路靶标物质(尤其是鲱精胺，精氨酸，腐胺，尸胺，鸟氨酸，亚精胺，精胺和s-腺苷蛋氨酸)的有效分离，测试结果重现性好，数据质量明显提升。
65.在一些优选的实施方式中，所述高效液相色谱-质谱联用仪中质谱的工作参数为：毛细管电压：+4000/-3500v，喷嘴电压：+500/-500v，雾化气温度：200～350℃，雾化气流速：4～6.5l/min，鞘流气温度：200～350℃，鞘流气流速8～13l/min，喷雾器压强40～50psi。
66.进一步优选，所述质谱板块的工作参数为：毛细管电压：+4000/-3500v，喷嘴电压：+500/-500v，雾化气温度：300℃，雾化气流速：5l/min，鞘流气温度：250℃，鞘流气流速：11l/min，喷雾器压强：45psi。
67.更进一步优选，所述雾化气和鞘流气均为氮气。
68.本发明采用的高效液相色谱-质谱联用仪中液相为agilent 1290infinity ii series uhplc system；质谱为agilent6460 triple quadrupole mass spectrometer三重串联四极杆质谱仪；质谱配置有ajs-esi离子源。通过特定的工作参数设置，将待测物质离子化，测定各离子谱峰强度实现靶标物质的分析。经过大量实验探究发现，当雾化气温度为300℃、雾化气流速为5l/min时，生物样本(尤其是肝脏和血浆)中的目标代谢物分子更容易断裂形成碎片离子，避免了测样过程中的基底噪音，使人体特定组织的多胺靶标检测结果的离散度降低，提升了测试结果的准确可靠程度，对人体新陈代谢和癌症防治领域的研究
具有积极的推动作用。
69.在一些优选的实施方式中，对生物样品采用外标法进行定性和定量分析，即配制梯度浓度的标准溶液，将标准溶液同样进行衍生化处理并上机测试，得到标准溶液中多胺及相关代谢物的峰面积与浓度的关系，绘制标准曲线；将生物样本的测样结果代入标准曲线即得到生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测结果。
70.进一步优选，所述标准溶液的配置方法为：准确称取相应量的标准品(鲱精胺，精氨酸，腐胺，尸胺，鸟氨酸，亚精胺，精胺和s-腺苷蛋氨酸)于8个10ml容量瓶中，以乙腈为溶剂进行定容，分别配制成10mm的单标储备液。分别取相应量的单标储备液于同一个10ml容量瓶中，配制成一定浓度的混标母液；依次稀释该混标母液得一系列梯度标准溶液。
71.在一些优选的实施方式中，所述梯度标准溶液中各标准品的浓度梯度均为0，10μm，20μm，50μm，100μm。
72.在进行高效液相色谱-质谱分析之前，先将含目标化合物的混标溶液引入质谱中，针对每种目标化合物，选取信号响应情况最佳的离子对，对其mrm参数进行筛选调整，选取其中响应强度最高的离子对用于多胺及相关代谢物的定量分析，其它离子对用于多胺及相关代谢物的定性分析。
73.本发明第二方面提供了一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法的应用，该检测方法应用于人体新陈代谢和癌症防治领域的研究。
74.实施例
75.为了更好的理解上述技术方案，下面将结合具体的实施方式对上述技术方案进行详细的说明。有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明作进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的专业技术人员根据上述本发明的内容做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。另外，如果没有其它说明，所用原料都是市售的，所述提取物的提取方法均为常规的提取方法。
76.实施例1.
77.本实施例提供了一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法，具体步骤包括：
78.s1.对生物样本进行提取，得到提取液；
79.s2.对提取液进行衍生化处理，得到待测液；
80.s3.采用高效液相色谱-质谱联用仪对待测液中的多胺及相关代谢物进行测定。
81.所述多胺及相关代谢物包括鲱精胺，精氨酸，腐胺，尸胺，鸟氨酸，亚精胺，精胺和s-腺苷蛋氨酸。
82.所述生物样本为肝脏组织，来源于上海阿趣生物科技有限公司。
83.所述s1步骤具体为：将生物样本加入离心管中，加入第一提取液，涡旋15s混合均匀，在40hz条件下研磨4min，冰水浴下超声5min，重复研磨、超声步骤3次；在-40℃静置1h，在-4℃，12000rpm条件下离心15min，收集上清液即为提取液。
84.所述生物样本和第一提取液的固液比为10：1。
85.所述第一提取液为80％vol乙腈水溶液。
86.所述s2步骤具体为：取100μl上清液于离心管中，加入50μlnahco3饱和水溶液和50μl衍生化试剂，涡旋均匀，在40℃条件下避光反应1h，取出加入50μl 0.1％vol甲酸水溶液，
混合均匀，在4℃，12000rpm条件下离心10min，取80μl上清液至进样瓶中，即为待测液。
87.所述衍生化试剂为20mg/ml的丹磺酰氯水溶液。
88.所述高效液相色谱-质谱联用仪装备有waters acquity uplc hss t3色谱柱；色谱柱的规格为100
×
2.1mm，1.8μm；色谱柱的温度为35℃。
89.所述高效液相色谱-质谱联用仪的进样温度为4℃，进样量为2μl。
90.所述高效液相色谱-质谱联用仪的流动相分为流动a相和流动b相，具体流动条件为：
91.0～0.5min：流动相a相为75％
→
75％，流动b相为25％
→
25％；
92.0.5～5.9min：流动相a相为75％
→
2％，流动相b相为25％
→
98％；
93.5.9～9.4min：流动相a相为2％
→
2％，流动相b相为98％
→
98％；
94.9.4～9.5min：流动相a相为2％
→
75％，流动相b相为98％
→
25％；
95.9.5～12min：流动相a相为75％
→
75％，流动相b相为25％
→
25％。
96.所述流动相的流速为400μl/min。
97.所述流动a相为10mm的甲酸铵水溶液；且流动a相还含有0.1％vol的甲酸。所述流动b相为乙腈。
98.所述质谱板块的工作参数为：毛细管电压：+4000/-3500v，喷嘴电压：+500/-500v，雾化气温度：300℃，雾化气流速：5l/min，鞘流气温度：250℃，鞘流气流速：11l/min，喷雾器压强：45psi。
99.所述雾化气和鞘流气均为氮气。
100.对生物样品采用外标法进行定性和定量分析，即配制梯度浓度的标准溶液，将标准溶液进行衍生化处理并上机测试(标准溶液的衍生化处理和上机测试操作均与生物样品保持一致)，得到标准溶液中多胺及相关代谢物的峰面积与浓度的关系，绘制标准曲线；将生物样本的测样结果代入标准曲线中即得到生物样本多胺及相关代谢物的定性和定量结果。
101.所述标准溶液的配置方法为：准确称取相应量的标准品(鲱精胺，精氨酸，腐胺，尸胺，鸟氨酸，亚精胺，精胺和s-腺苷蛋氨酸)于8个10ml容量瓶中，以乙腈为溶剂进行定容，分别配制成10mm的单标储备液。分别取相应量的单标储备液于同一个10ml容量瓶中，配制成一定浓度的混标母液；依次稀释该混标母液得一系列梯度标准溶液。
102.所述梯度标准溶液中各标准品的浓度梯度均为0，10μm，20μm，50μm，100μm。
103.实施例2.
104.本实施例提供了一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法，具体步骤包括：
105.s1.对生物样本进行提取，得到提取液；
106.s2.对提取液进行衍生化处理，得到待测液；
107.s3.采用高效液相色谱-质谱联用仪对待测液中的多胺及相关代谢物进行测定。
108.所述多胺及相关代谢物包括鲱精胺，精氨酸，腐胺，尸胺，鸟氨酸，亚精胺，精胺和s-腺苷蛋氨酸。
109.所述生物样本为人体血浆，来源于上海阿趣生物科技有限公司。
110.所述s1步骤具体为：将生物样本置于4℃冰水浴中解冻，然后转移至离心管中，加
入第二提取液，涡旋30s混合均匀，冰水浴下超声15min，在-40℃静置1h，在-4℃，13000rpm条件下离心15min，收集上清液即为提取液。
111.所述生物样本和第二提取液的体积比为1：4。
112.所述第二提取液为乙腈。
113.所述s2步骤具体为：取100μl上清液于离心管中，加入50μl nahco3饱和水溶液和50μl衍生化试剂，涡旋均匀，在40℃条件下避光反应1h，取出加入50μl 0.1％vol甲酸水溶液，混合均匀，在4℃，12000rpm条件下离心10min，取80μl上清液至进样瓶中，即为待测液。
114.所述衍生化试剂为20mg/ml的丹磺酰氯水溶液。
115.所述高效液相色谱-质谱联用仪装备有waters acquity uplc hss t3色谱柱；色谱柱的规格为100
×
2.1mm，1.8μm；色谱柱的温度为35℃。
116.所述高效液相色谱-质谱联用仪的进样温度为4℃，进样量为2μl。
117.所述高效液相色谱-质谱联用仪的流动相分为流动a相和流动b相，具体流动条件为：
118.0～0.5min：流动相a相为75％
→
75％，流动b相为25％
→
25％；
119.0.5～5.9min：流动相a相为75％
→
2％，流动相b相为25％
→
98％；
120.5.9～9.4min：流动相a相为2％
→
2％，流动相b相为98％
→
98％；
121.9.4～9.5min：流动相a相为2％
→
75％，流动相b相为98％
→
25％；
122.9.5～12min：流动相a相为75％
→
75％，流动相b相为25％
→
25％。
123.所述流动相的流速为400μl/min。
124.所述流动a相为10mm的甲酸铵水溶液；且流动a相还含有0.1％vol的甲酸。所述流动b相为乙腈。
125.所述质谱板块的工作参数为：毛细管电压：+4000/-3500v，喷嘴电压：+500/-500v，雾化气温度：300℃，雾化气流速：5l/min，鞘流气温度：250℃，鞘流气流速：11l/min，喷雾器压强：45psi。
126.所述雾化气和鞘流气均为氮气。
127.对生物样品采用外标法进行定性和定量分析，即配制梯度浓度的标准溶液，将标准溶液进行衍生化处理并上机测试(标准溶液的衍生化处理和上机测试操作均与生物样品保持一致)，得到标准溶液中多胺及相关代谢物的峰面积与浓度的关系，绘制标准曲线；将生物样本的测样结果代入标准曲线中即得到生物样本多胺及相关代谢物的定性和定量结果。
128.所述标准溶液的配置方法为：准确称取相应量的标准品(鲱精胺，精氨酸，腐胺，尸胺，鸟氨酸，亚精胺，精胺和s-腺苷蛋氨酸)于8个10ml容量瓶中，以乙腈为溶剂进行定容，分别配制成10mm的单标储备液。分别取相应量的单标储备液于同一个10ml容量瓶中，配制成一定浓度的混标母液；依次稀释该混标母液得一系列梯度标准溶液。
129.所述梯度标准溶液中各标准品的浓度梯度均为0，10μm，20μm，50μm，100μm。
130.实施例3.
131.本实施例提供了一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法，具体实施方式同实施例1；不同点在于：所述生物样本和第一提取液的固液比为15：1。
132.实施例4.
133.本实施例提供了一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法，具体实施方式同实施例2；不同点在于：所述生物样本和第二提取液的体积比为1：7。
134.实施例5.
135.本实施例提供了一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法，具体实施方式同实施例1；不同点在于：所述第一提取液为90％vol乙腈水溶液。
136.实施例6.
137.本实施例提供了一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法，具体实施方式同实施例2；不同点在于：s1步骤中离心的速度为10000rpm，离心时间为20min。
138.实施例7.
139.本实施例提供了一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法，具体实施方式同实施例1；不同点在于：所述衍生化试剂为30mg/ml的丹磺酰氯水溶液。
140.实施例8.
141.本实施例提供了一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法，具体实施方式同实施例1；不同点在于：衍生化试剂的加入量为80μl。
142.实施例9.
143.本实施例提供了一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法，具体实施方式同实施例1；不同点在于：色谱柱的温度为40℃。
144.实施例10.
145.本实施例提供了一种生物样本多胺及相关代谢物的高通量靶标检测方法，具体实施方式同实施例1；不同点在于：所述流动相的流速为500μl/min。
146.性能测试方法
147.线性相关系数r2：
148.根据实施例1-10测定的梯度标准溶液的结果，绘制标准曲线，计算目标待测物鲱精胺，精氨酸，腐胺，尸胺，鸟氨酸，亚精胺，精胺和s-腺苷蛋氨酸与浓度的相关系数r2，计算各鲱精胺，精氨酸，腐胺，尸胺，鸟氨酸，亚精胺，精胺和s-腺苷蛋氨酸r2的平均值。
149.回收率e：
150.将50μm的标准溶液(鲱精胺，精氨酸，腐胺，尸胺，鸟氨酸，亚精胺，精胺和s-腺苷蛋氨酸的浓度之和为400μm)作为待测样品按照实施例1-10的分析方法进行检测，得到目标化合物中多胺及相关代谢物的测试结果c
total
(c
total
等于鲱精胺，精氨酸，腐胺，尸胺，鸟氨酸，亚精胺，精胺和s-腺苷蛋氨酸的浓度之和)，回收率e＝|400-c
x
|/400*100％。
151.定量下限l：
152.将milli q水作为待测样本，参照实施例1-10的高通量靶标检测方法进行前处理并上机检测，每个实施例分析方法平行测定20次，计算目标待测物鲱精胺，精氨酸，腐胺，尸胺，鸟氨酸，亚精胺，精胺和s-腺苷蛋氨酸的浓度之和的相对标准偏差rsdm，计算定量下限l＝3*rsdm。
153.样品质控rsd：
154.每组实施例平行测定10次，计算目标待测物鲱精胺，精氨酸，腐胺，尸胺，鸟氨酸，亚精胺，精胺和s-腺苷蛋氨酸的浓度之和，并计算平行测试结果的相对标准偏差rsd。
155.性能测试数据
156.表1.性能测试结果
[0157] r2e(％)l(nm)rsd(％)实施例10.99996.40.614.4实施例20.99997.61.222.6实施例30.99495.31.358.3实施例40.99292.72.686.5实施例50.99393.11.629.1实施例60.99396.51.855.3实施例70.99092.72.5312.4实施例80.98893.63.1214.1实施例90.99193.12.4510.6实施例100.98292.35.2715.2
[0158]
最后指出，前述的实例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其之内的子范围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。