一种盐酸替罗非班注射液中枸橼酸含量测定方法与流程

：
1.本发明涉及化学检验领域和药物分析技术领域，特别是一种盐酸替罗非班注射液中枸橼酸含量测定方法。


背景技术：

2.枸橼酸是注射液中常用的辅料，临床上常用做ph调节剂，同时枸橼酸根离子可与血中钙离子生成难解离的可溶性络合物枸橼酸钙，此络合物易溶于水但不易解离，凝血过程受到抑制，从而阻止血液凝固。但当体内枸橼酸盐含量过高时，因枸橼酸盐不能及时被氧化，可致低钙血症，引起抽搐和心肌收缩抑制，在盐酸替罗非班注射液的处方中包含了枸橼酸钠，同时用到无水枸橼酸作为ph调节剂，因此必须应严格控制枸橼酸的含量。
3.《中国药典》2020版四部通则中枸橼酸的含量测定采用滴定法，酚酞作指示剂，氢氧化钠滴定液作滴定剂。该方法存在一定的人为误差不可避免，且枸橼酸的用量较大，而注射剂中枸橼酸的含量相对较小，方法不适用。
4.《中国药典》2020版四部通则中枸橼酸钠的含量测定采用高氯酸滴定法，过程中需要加热溶解，且高氯酸危险性较高，操作过程复杂，人为因素不可避免。
5.故本发明采用高效液相色谱法对盐酸替罗非班注射液中枸橼酸进行含量测定，本法简单可行，准确度高、精密度好、稳定性高。


技术实现要素：

6.针对现有的枸橼酸含量测定存在的上述问题，现提供一种准确度高、精密度好、稳定性高的盐酸替罗非班注射液中枸橼酸含量测定方法。
7.本发明涉及的一种盐酸替罗非班注射液中枸橼酸含量测定方法采用高效液相色谱法测定，其操作步骤如下：
8.(1)色谱条件建立与系统适应性：采用耐水性的c18柱，以100％磷酸溶液，为流动相，检测波长为200～240nm，流速为每分钟1.0～1.5ml，柱温为25～42℃；
9.(2)对照品溶液的制备：取枸橼酸钠对照品，加水溶解，得对照品溶液；
10.(3)供试品溶液的制备：以盐酸替罗非班注射液作为供试品溶液；
11.(4)测定：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
12.优选的，前述步骤(1)所述对照品溶液每1ml含枸橼酸钠1.5mg。
13.优选的，前述步骤(2)所述供试品溶液每1ml含盐酸替罗非班0.05mg。
14.优选的，前述步骤(3)所述色谱柱为菲罗门titank c18，规格为4.6mm*250mm，5μm。
15.优选的，前述步骤(3)所述磷酸溶液用磷酸调水ph至2.1。
16.优选的，前述步骤(3)所述色谱条件中检测波长为220nm。
17.优选的，前述步骤(3)所述柱温为30℃。
18.优选的，前述步骤(3)所述柱温为40℃。
19.优选的，前述步骤(3)所述流速为每分钟1.2ml。
20.优选的，前述步骤(4)对照品溶液和供试品溶液进样量分别为5μl。
21.有益效果:
22.1、本发明提供的盐酸替罗非班注射液中枸橼酸含量测定方法，能够准确地检测盐酸替罗非班注射液中枸橼酸和枸橼酸钠，可使枸橼酸与注射液中的其他物质分开，实现枸橼酸的准确检测，从而更好地控制盐酸替罗非班注射液的产品质量。
23.2、本发明以水作为测试溶剂，实验步骤简洁，检测数据精准、稳定性好，安全性高，检测成本低。
24.3、枸橼酸的线性关系良好，线性相关系数能达到0.999以上。
附图说明:
25.图1氯化钠溶液色谱图
26.图2盐酸替罗非班溶液色谱图
27.图3对照品溶液色谱图
28.图4供试品溶液色谱图
29.图5线性溶液1色谱图
30.图6线性溶液2色谱图
31.图7线性溶液3色谱图
32.图8线性溶液4色谱图
33.图9线性溶液5色谱图
34.图10准确度溶液(低浓度)色谱图
35.图11准确度溶液(中浓度)色谱图
36.图12准确度溶液(高浓度)色谱图
具体实施方式
37.下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但本发明不被限制在所述的实施例中。
38.实施例1测定方法
39.采用高效液相色谱法测定，其操作步骤如下：
40.(1)色谱条件建立与系统适应性：采用耐水性的菲罗门titank c18 4.6mm*250mm，5μm，以100％磷酸溶液(ph2.1)为流动相，检测波长为200nm，流速为每分钟1.2ml，柱温为40℃；
41.(2)对照品溶液的制备：取枸橼酸钠对照品，加水溶解，制成每1ml含枸橼酸钠1.5mg的对照品溶液；
42.(3)供试品溶液的制备：以盐酸替罗非班注射液为供试品，制成每1ml含盐酸替罗非班0.05mg的供试品溶液；
43.(4)测定：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
44.实施例2测定方法
45.采用高效液相色谱法测定，其操作步骤如下：
46.(1)色谱条件建立与系统适应性：采用耐水性的菲罗门titank c18，规格为4.6mm*250mm，5μm，以100％磷酸溶液(ph2.1)为流动相，检测波长为200nm，流速为每分钟1.0ml，柱温为25℃；
47.(2)对照品溶液的制备：取枸橼酸钠对照品，加水溶解，制成每1ml含枸橼酸钠1.5mg的对照品溶液；
48.(3)供试品溶液的制备：以盐酸替罗非班注射液为供试品，制成每1ml含盐酸替罗非班0.05mg的供试品溶液；
49.(4)测定：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
50.实施例3测定方法
51.采用高效液相色谱法测定，其操作步骤如下：
52.(1)色谱条件建立与系统适应性：采用耐水性的菲罗门titank c18，规格为4.6mm*250mm，5μm，以100％磷酸溶液(ph2.1)为流动相，检测波长为240nm，流速为每分钟1.5ml，柱温为42℃；
53.(2)对照品溶液的制备：取枸橼酸钠对照品，加水溶解，制成每1ml含枸橼酸钠1.5mg的对照品溶液；
54.(3)供试品溶液的制备：以盐酸替罗非班注射液为供试品，制成每1ml含盐酸替罗非班0.05mg的供试品溶液；
55.(4)测定：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
56.实施例4测定方法
57.采用高效液相色谱法测定，其操作步骤如下：
58.(1)色谱条件建立与系统适应性：采用耐水性的菲罗门titank c18，规格为4.6mm*250mm，5μm，以100％磷酸溶液(ph2.1)为流动相，检测波长为240nm，流速为每分钟1.5ml，柱温为30℃；
59.(2)对照品溶液的制备：取枸橼酸钠对照品，加水溶解，制成每1ml含枸橼酸钠1.5mg的对照品溶液；
60.(3)供试品溶液的制备：以盐酸替罗非班注射液为供试品，制成每1ml含盐酸替罗非班0.05mg的供试品溶液；
61.(4)测定：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
62.为了进一步验证本发明的可行性，发明人进行了一系列的试验，具体如下：
63.一、盐酸替罗非班注射液中枸橼酸含量测定方法
64.(1)取枸橼酸钠对照品，用水溶解，得对照品溶液每1ml含枸橼酸钠1.5mg的对照品溶液；
65.(2)取盐酸替罗非班注射液作为供试品溶液，每1ml含盐酸替罗非班0.05mg。
66.(3)精密量取对照品溶液和供试品溶液注入色谱仪，色谱条件如下：
67.色谱柱：菲罗门titank c18 4.6mm*250mm 5μm
68.流动相：磷酸水溶液(ph2.1)
69.柱温：40℃
70.流速：1.2ml/min
71.检测波长：220nm
72.进样量：5μl
73.二、枸橼酸与其他物质的分离情况
74.精密称取氯化钠适量，加水溶解，得浓度为4mg/ml的氯化钠溶液。
75.精密称取盐酸替罗非班，加水溶解，得浓度为0.05mg/ml的盐酸替罗非班溶液。
76.取氯化钠溶液、盐酸替罗非班溶液、对照品溶液、供试品溶液，采用上述方法测定，hplc图谱见图1～图4，检测结果见表1。
77.表1枸橼酸与其他物质的分离情况
78.名称氯化钠盐酸替罗非班对照品溶液供试品溶液保留时间(min)2～3min无峰6.866.85
79.结果表明，枸橼酸与盐酸替罗非班注射液中其他物质分离效果良好，其他物质不会干扰枸橼酸的检测。
80.三、枸橼酸的线性情况
81.取枸橼酸钠对照品，加水溶解，得到浓度为0.75mg/ml、1.2mg/ml、1.5mg/ml、1.8mg/ml、2.25mg/ml的线性溶液。
82.取所述线性溶液，采用实施例1的方法检测，hplc图谱见图5～图9，检测结果见表2。
83.表2枸橼酸的线性情况
[0084][0085]
结果表明，枸橼酸的线性关系良好，线性相关系数能达到0.999以上。
[0086]
四、枸橼酸的准确度情况
[0087]
精密称取枸橼酸钠适量，加水溶解，得浓度为7.5mg/ml的对照品储备液。
[0088]
精密量取盐酸替罗非班注射液5ml置10ml容量瓶，平行制备9份，分别精密加入对照品贮备液0.8ml、1ml、1.2ml，用水稀释至刻度，得准确度溶液，各浓度平行制备3份。
[0089]
取所述线性溶液，采用实施例1的方法检测，hplc图谱见图10～图12，检测结果见表3。
[0090]
表3枸橼酸的准确度情况
[0091]
[0092][0093]
结果表明，枸橼酸的准确度高。
[0094]
综上，本发明提供的盐酸替罗非班注射液中枸橼酸含量测定方法，能够准确地测定盐酸替罗非班注射液中枸橼酸和枸橼酸钠，可使枸橼酸与注射液中的其他物质分开，实现枸橼酸的准确检测，从而更好地控制盐酸替罗非班注射液的产品质量。本发明以水作为测试溶剂，实验步骤简洁，检测数据精准、稳定性好，安全性高，检测成本低。
[0095]
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。