技术特征：
1.一种检测季铵盐肟类抗毒剂的方法，其包括：1)利用表面增强拉曼光谱仪，检测待测样本中季铵盐肟类抗毒剂的信号；2)基于检测获得的信号，确定待测样本中季铵盐肟类抗毒剂的种类和/或含量。2.权利要求1的方法，其中，所述方法具有以下特征的至少一种：(1)所述表面增强拉曼光谱的增强基底选自金纳米溶胶、银纳米溶胶、金磁纳米溶胶或其它形式的纳米检测基底；优选地，所述表面增强拉曼光谱的增强基底为有孔壳层隔绝金纳米粒子；(2)所述表面增强拉曼光谱的增强试剂选自kf、ki、nacl、mgso4、na2co3、na2so4、nabr、nahco3、na2so3；优选地，所述表面增强拉曼光谱的增强试剂为ki；优选地，所述增强试剂的浓度为50
‑
200mmol/l，优选为50
‑
150mmol/l，更优选为100mmol/l，其中，所述增强试剂的浓度指的是所述增强试剂与所述增强基底和所述待测样本混合后所述增强试剂的终浓度。3.权利要求1
‑
2任一项的方法，其中，步骤1)包括：1
‑
1)将增强基底进行离心，弃上清液；1
‑
2)将增强试剂与步骤1
‑
1)所得产物进行混合；优选地，将增强试剂缓慢加入到步骤1
‑
1)所得产物的底部；1
‑
3)将待测样本与步骤1
‑
2)所得产物进行混合；1
‑
4)利用表面增强拉曼光谱仪，对步骤1
‑
3)所得产物进行检测，获得待测样本中季铵盐肟类抗毒剂的信号。4.权利要求1
‑
3任一项的方法，其中，所述方法具有以下特征的至少一种：(1)所述表面增强拉曼光谱的激光功率为0
‑
300mw，优选为60
‑
180mw，更优选为60
‑
120mw；(2)所述检测的检测时间为8
‑
12s，优选为10s；(3)所述检测的检测波长为785nm；(4)所述表面增强拉曼光谱仪为便携式或手持式拉曼光谱仪。5.权利要求1
‑
4任一项的方法，其中，所述待测样本选自血液样本、组织样本(如脑组织样本)；优选地，所述血液样本预先经过离心处理以弃去红细胞，获得血浆样本；优选地，所述组织样本预先经过沉淀处理以去除蛋白和/或脂肪组织；优选地，所述沉淀处理中使用的沉淀剂选自三氟乙酸、甲酸、乙腈、氯化钠、硫酸锌、乙酸、乙醇、乙腈，优选为氯化钠；优选地，所述沉淀剂的浓度为0.5
‑
1.5mol/l，优选为1mol/l，其中，所述沉淀剂的浓度指的是所述沉淀剂与所述组织样本混合后所述沉淀剂的终浓度。6.权利要求1
‑
5任一项的方法，其中，所述季铵盐肟类抗毒剂选自tmb
‑
4、hi
‑
6、obi、mmb
‑
4、pam。7.权利要求2的方法，其中，所述有孔壳层隔绝金纳米粒子包括核芯和壳层，所述壳层包覆所述核芯，所述核芯为aunps，所述壳层为sio2壳层；优选地，所述aunps的粒径为50
‑
60nm，优选为55nm；
优选地，所述sio2壳层的厚度为1
‑
2nm；优选地，所述有孔壳层隔绝金纳米粒子是通过如下方法制备的：1)将aunps与3
‑
氨丙基三甲氧基硅烷进行第一混合；2)将第一混合产物与na2sio3进行第二混合，获得所述有孔壳层隔绝金纳米粒子；优选地，所述3
‑
氨丙基三甲氧基硅烷是以溶于水的形式提供的；更优选地，所述3
‑
氨丙基三甲氧基硅烷的水溶液中，所述3
‑
氨丙基三甲氧基硅烷的浓度为0.5
‑
1.5mm，优选为1mm；优选地，所述na2sio3是以溶于水的形式提供的；更优选地，所述na2sio3水溶液中，所述na2sio3的浓度(w/w)为0.5％
‑
0.6％，优选为0.54％；更优选地，所述na2sio3水溶液的ph大于11；优选地，所述第一混合的时间为10
‑
20min，优选为15min；优选地，所述第二混合的时间为2
‑
5min，优选为3min；优选地，所述aunps是采用frens的柠檬酸钠还原四氯金酸法制备的；更优选地，所述aunps是通过如下方法制备的：1)将三水合四氯金酸与水进行混合，获得母液；2)取部分母液加水进行稀释；3)将稀释后的母液加热至沸腾，待冷凝回流后向其中加入柠檬酸三钠水溶液，继续加热30
‑
50min(如40min)，获得所述aunps；优选地，所述母液中，所述三水合四氯金酸的浓度为0.5
‑
1.5mg/ml，优选为1mg/ml；优选地，取部分母液加水进行稀释时，稀释倍数为8
‑
12倍，优选为10倍；优选地，所述柠檬酸三钠水溶液中，所述柠檬酸三钠的浓度(w/w)为0.5
‑
1.5％，优选为1％；优选地，所述稀释后的母液与所述柠檬酸三钠水溶液的体积比为100：0.8
‑
0.9，优选为100：0.85。8.权利要求1
‑
7任一项的方法，其中，确定待测样本中季铵盐肟类抗毒剂的种类是通过如下步骤进行的：1)利用表面增强拉曼光谱仪，检测待测样本中季铵盐肟类抗毒剂的信号；2
‑1‑
a)将检测获得的信号与每种季铵盐肟类抗毒剂的特征指纹图谱进行比对；2
‑2‑
a)基于比对结果，确定待测样本中季铵盐肟类抗毒剂的种类。9.权利要求1
‑
7任一项的方法，其中，确定待测样本中季铵盐肟类抗毒剂的含量是通过如下步骤进行的：1)利用表面增强拉曼光谱仪，检测待测样本中季铵盐肟类抗毒剂的信号；2
‑1‑
b)利用表面增强拉曼光谱仪，检测预设的不同浓度(例如倍数稀释)的季铵盐肟类抗毒剂的信号；2
‑2‑
b)基于预设的季铵盐肟类抗毒剂的不同浓度，以及检测获得的预设的不同浓度的季铵盐肟类抗毒剂的信号强度，绘制信号强度
‑
浓度工作曲线；2
‑3‑
b)基于检测获得的待测样本中季铵盐肟类抗毒剂的信号，以及绘制的所述信号强度
‑
浓度工作曲线，确定待测样本中季铵盐肟类抗毒剂的含量；
优选地，步骤2
‑1‑
b)中，检测预设的不同浓度(例如倍数稀释)的季铵盐肟类抗毒剂的信号时，各浓度的增强基底是通过如下方法制备的：将第一预设体积(如1ml)的增强基底置于ep管中离心并弃去上清液后，将底部残留增强基底混合均匀，之后从所述底部残留增强基底中取第二预设体积(如10μl)的增强基底分装于ep管中待用。10.一种基于表面增强拉曼光谱的季铵盐肟类抗毒剂检测试剂盒，其包括：(1)增强基底，所述增强基底如权利要求2所限定；优选地，所述增强基底为有孔壳层隔绝金纳米粒子；更优选地，所述有孔壳层隔绝金纳米粒子如权利要求7所限定；(2)增强试剂，所述增强试剂如权利要求2所限定；任选地，所述试剂盒还包括：(3)待测样本前处理试剂；优选地，所述待测样本前处理试剂为沉淀剂；更优选地，所述沉淀剂如权利要求5所限定。
技术总结
本发明涉及用于生物样本中季铵盐肟类重活化剂快速检测的检测方法和试剂盒，具体涉及一种检测季铵盐肟类抗毒剂的方法，其包括：1)利用表面增强拉曼光谱仪，检测待测样本中季铵盐肟类抗毒剂的信号；2)基于检测获得的信号，确定待测样本中季铵盐肟类抗毒剂的种类和/或含量。该检测方法具有操作简便、检测速度快、灵敏度高等诸多优点，可用于生物样本中针对神经性毒剂中毒季铵盐肟类救治药物的快速检测。性毒剂中毒季铵盐肟类救治药物的快速检测。性毒剂中毒季铵盐肟类救治药物的快速检测。
技术研发人员：吴剑峰 谢剑炜 李楠楠 谢斯哲 刘玉龙
受保护的技术使用者：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
技术研发日：2021.08.10
技术公布日：2021/11/9