一种采用离子色谱法检测环丙胺中氨水的方法与流程

1.本发明属于化学药物分析技术领域，具体涉及用于一种采用离子色谱法检测环丙胺中氨水的方法。


背景技术：

2.环丙胺为医药和农药的重要中间体，有机合成的基本化工原材料，也是医药含氟喹诺酮类抗菌药合成的重要中间体。其合成路线如下：其中，以氨水作为原料来生产环丙胺，在最终产品环丙胺中会产生残留，氨水的氨基为活泼的官能团，氨水残留在合成新化合物时易产生新的杂质，因此，氨水的含量控制对环丙胺质量控制有重要意义。
3.目前，尚没有报道检测环丙胺中的氨水残留的分析方法，但有检测铵离子的文献报道。
4.文献《三峡环境与生态》2008，许锋等采用离子谱法测定水中的铵离子，但经本发明人将该方法用于环丙胺中的氨水测试，发现分离效果差，专属性弱。试验结果见图1cn111458418a公开了一种伊诺肝素钠中铵离子检测方法，经试验测试，该方法用于环丙胺中氨水的测定产生了倒峰，干扰铵离子检测，专属性弱，试验结果见图2。
5.因此，针对特定的环丙胺中的氨水，需要寻找和研究灵敏度高，专属性强的检测方法。以便有利于对环丙胺的产品质量进行有效的控制。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种采用离子色谱法检测环丙胺中氨水的方法。该方法具有灵敏度高，专属性强的优点，可对环丙胺中氨水进行准确的定性和定量分析。
7.在一实施方案中，本发明的一种采用离子色谱法检测环丙胺中氨水的方法，包括以下过程：1）、对照品溶液配制：a) 取氯化铵标准品，精密称定适量，置于量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液1；b) 精密量取对照品贮备溶液1适量，置于量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液2；c) 精密量取对照品贮备溶液2适量，置于量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液； 2）、供试品溶液配制：精密称取环丙胺适量，置于量瓶中，用稀释剂溶解
并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液； 3)、将对照品溶液和供试品溶液分别注入离子色谱仪中检测，其特征在于：所述离子色谱法：色谱柱：阳离子交换色谱柱dionex ionpactm cs12a抑制器：阳离子抑制器
ꢀꢀꢀꢀ
dionexcers 500淋洗液：甲磺酸淋洗液检测器：电导检测器。
8.上述本发明的方法，所述离子色谱法，其检测条件为：柱温：30℃、池温：35℃、流速：1ml/min、进样量：25
µ
l，所述稀释剂为超纯水。
9.上述本发明的方法，对照品溶液的浓度为浓度为0.45μg/ml，供试品溶液的浓度为1mg/ml。
10.上述本发明的方法，采用浓度梯度洗脱，其梯度变化如下：在一具体实施方案中，本发明的一种采用离子色谱法检测环丙胺中氨水的方法，所用的色谱条件如下：仪器：离子色谱仪thermo(赛默飞世尔）（dionex ics-2100）色谱柱：阳离子交换色谱柱dionex ionpactm cs12a rfictm 4
×
250mm抑制器：阳离子抑制器
ꢀꢀꢀꢀ
dionexcers 500 4mm 082542抑制器类型：csrs_4mm淋洗液发生器：甲磺酸淋洗液发生器淋洗液浓度：msa 30mmol/l柱温：30℃检测器：电导检测器池温：35℃流速：1ml/min进样量：25
µ
l电流：88ma采集速率：50hz采用淋洗液浓度梯度洗脱，条件见表1：表1 淋洗液浓度梯度洗脱
包含以下过程：1、溶液配制1）、空白溶液（稀释剂）：超纯水。
11.2）、对照品溶液：取氯化铵标准品约0.3g，精密称定，置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液1；精密量取对照品贮备溶液1溶液1.0ml，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液2；精密量取对照品贮备溶液2溶液1.5ml，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（浓度为0.45μg/ml）。
12.3）、供试品溶液：精密称取本品100mg，置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液（浓度为1mg/ml）。
13.4）、系统适用性溶液：精密称取本品100mg，置100ml量瓶中，精密加入对照品贮备液2溶液1.5ml，再用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得系统适用性溶液（即环丙胺浓度为1mg/ml，氯化铵浓度为0.45μg/ml）。
14.5)将对照品溶液、供试品溶液、和系统适用性溶液分别注入离子色谱仪中检测。
15.2、结果计算：铵离子含量（%）：nh
4+
%=（m对
×
18/53.5
×a×
v）/(a对
×
m样
×
v对)
ꢀ×
100%式中：a对-对照品溶液的峰面积；a-供试品溶液的峰面积；v-供试品溶液的稀释体积，ml；v对-对照品溶液的稀释体积，ml；m对-对照品的称样量，mg；18-铵离子分子量；53.5-氯化铵分子量；m样-供试品的称样量，mg。
16.氨水含量（%）= （（m样
×
nh
4+
%）/18
×
35.045）/ m样
×
100%式中：m样-供试品的称样量，mg；nh
4+
%-铵离子含量，%；18-铵离子分子量；35.045-氨水分子量。
17.本发明的检测方法，优点在于：
1）、操作简便易行，方法可控，灵敏度高、专属性和准确度好，为控制环丙胺产品质量提供了一种稳定可靠的方法，从而提高产品的质量可控性。
18.2）、通过梯度洗脱，有效降低了色谱峰展宽行为和供试品溶液倒峰干扰，可获得较尖锐且对称的色谱峰，使各杂质检测的灵敏度提高，从而保证结果准确可靠。
附图说明
19.图1 对比例1的铵离子测试结色图谱；图2 对比例2测试结果色图谱；图3 为实施例3的样品测试的系统适用性溶液色谱图；图4为实施例3的样品测试的对照品溶液色谱图；图5 为实施例3的样品测试的供试品溶液色谱图。
具体实施方式
20.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明，以帮助理解本发明的实质，但不以任何方式限定本发明的范围。
21.对比例1按文献《三峡环境与生态》许锋等采用离子谱法测定水中的铵离子测试结果使用文献方法，将文献中的水更换成环丙胺，进行测试，结果见图1。
22.对比例2按中国cn111458418a说明书中优选的试验方法和测试条件（见[0020]-[0032]） ，将肝素钠更换为环丙胺进行测试，结果见图2。
[0023]
实施例1 测试条件的筛选主要仪器设备与试剂离子色谱仪（dionex ics-2100型）（美国戴安公司），阳离子交换色谱柱（dionex ionpactmcs12a rfic
tm 4mm
×
250mm），保护柱（cg12a ，4mm
×
250mm），甲磺酸淋洗液发生器，阳离子抑制器（dionex cers 500 4mm082542），梅特勒电子天平，变色龙色谱工作站等。
[0024]
环丙胺供试品(山东国邦药业股份有限公司)，氯化铵(重庆川东化工有限公司)，盐酸（ar级），去离子水等。
[0025]
检测条件：淋洗液浓度：msa 30mmol/l柱温：30℃检测器：电导检测器池温：35℃流速：1ml/min进样量：25
µ
l电流：88ma采集速率：50hz。
[0026]
检测溶液配制
1）、空白溶液（稀释剂）：超纯水。
[0027]
2）、对照品溶液：取氯化铵标准品约0.3g，精密称定，置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液1；精密量取1.0ml对照品贮备溶液1，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液2；精密量取1.5ml对照品贮备溶液2，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（浓度为0.45μg/ml）。
[0028]
3）、供试品溶液：精密称取本品100mg，置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液（浓度为1mg/ml）。
[0029]
1) 甲磺酸淋洗液初始浓度的筛选分别选用甲磺酸淋洗液浓度为20mmol/l、9mmol/l、5mmol/l进行等度试验,结果见表2。
[0030]
表2 甲磺酸（msa）淋洗液浓度选择结果表2结果表明，浓度等度洗脱时甲磺酸淋洗液浓度太高，倒峰干扰较大，当甲磺酸淋洗液浓度较低时，如5mmol/l时倒峰干扰很小，故选择5mmol/l作为梯度初始浓度比较适宜。
[0031]
2）甲磺酸淋洗液浓度梯度的筛选取系统适用性溶液在不同浓度梯度进行试验，梯度调整结果见表3。
[0032]
表3甲磺酸淋洗液浓度梯度选择结果表3结果表明，选择梯度条件2比较合适。
[0033]
3）供试品进样浓度的选择分别配制不同浓度（1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml）的供试品溶液，考察样品中铵离子保留时间与对照品溶液保留时间的差别及分离度。取对照品溶液及各浓度供试品溶液记录色谱图。结果见表4。
[0034]
表4进样浓度的试验结果表4的结果表明：当供试品溶液浓度为1mg/ml时，分离度和保留时间与对照品溶液之差均是可接受的，高于这个浓度保留时间之差超过0.5min，分离度也随浓度增加而变差，故以1mg/ml浓度作为供试品溶液浓度。
[0035]
实验例2 方法学验证色谱条件同实施例1，其中浓度梯度洗脱如下检测溶液配制1）、空白溶液（稀释剂）：超纯水。
[0036]
2）、对照品溶液：取氯化铵标准品约0.3g，精密称定，置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液1；精密量取1.0ml对照品贮备溶液1，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液2；精密量取1.5ml对照品贮备溶液2，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（浓度为0.45μg/ml）。
[0037]
3）、供试品溶液：精密称取本品100mg，置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液（浓度为1mg/ml）。
[0038]
4）、系统适用性溶液：精密称取本品100mg，置100ml量瓶中，精密加入对照品贮备液2溶液1.5ml，再用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得系统适用性溶液（即环丙胺浓度为1mg/ml，氯化铵浓度为0.45μg/ml）。
[0039]
5)将对照品溶液、供试品溶液和系统适用性溶液分别注入离子色谱仪中检测。
[0040]
2.1专属性考察2.1.1空白溶液超纯水（即稀释剂），作为空白溶液。
[0041]
2.1.2对照品贮备液对照品贮备液1：取氯化铵标准品约0.3g，精密称定，置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液1（浓度为3mg/ml）。
[0042]
对照品贮备液2：精密量取对照品贮备液1溶液 1.0ml，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液2（浓度为30μg/ml）。
[0043]
2.1.3对照品溶液精密量取对照品贮备液2溶液 1.5ml，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（浓度为0.45μg/ml）。
[0044]
2.1.4系统适用性溶液精密称取本品100mg，置100ml量瓶中，加对照品贮备液2溶液1.5ml，再用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得系统适用性溶液（即环丙胺浓度为1mg/ml，氯化铵浓度为0.45μg/ml）。结果详见表5。
[0045]
表5 系统适用性试验结果表5 的结果表明，空白不干扰测定，系统适用性证明分离度良好，与前后峰能有效分离。
[0046]
2.2 系统精密度试验2.2.1取专属性项下对照品溶液，连续进样6次，记录色谱图，计算nh
4+
峰面积的相对标准偏差（rsd）。结果详见表6。
[0047]
表6 系统精密度试验结果结果表明，系统精密度良好。
[0048]
2.3 检测限与定限量试验2.3.1精密量取对照品溶液5.0ml，置50ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为定量限确认溶液。将定量限确认溶液精密吸取3.0ml，置10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为检测限确认溶液。结果详见表7。
[0049]
表7 检测限与定量限试验结果
结果表明，检测限与定量限远小于限度0.03%，满足定量测定灵敏度要求。
[0050]
2.4溶液稳定性考察2.4.1取专属性项下对照品溶液、供试品溶液，分别在0、2、4、8小时进样测定，记录色谱图。结果详见表8。
[0051]
表8 溶液稳定性考察结果结果表明，对照品溶液与供试品溶液在8小时内稳定。
[0052]
2.5 线性试验2.5.1取专属性项下对照品贮备液2，作为线性贮备液。
[0053]
线性溶液1：分别精密量取线性贮备液0.45ml、0.90ml、1.2ml、1.5ml、1.8ml、3.0ml，分别置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为系列线性溶液，分别依次进样测定，记录色谱图，标准溶液浓度经质量转换为氨水（nh3.h2o）计，以峰面积（a,
µ
m.min）-浓度（c，
µ
g/ml）计算回归方程，结果详见表9。
[0054]
表9 线性范围试验结果结果表明，氨水在0.0874~0.5828
µ
g/ml的浓度范围内线性关系良好（相当于拟下限度的30%~200%）。
[0055]
2.6 回收率试验（准确度）2.6.1取专属性项下对照品贮备液2作为回收试验用对照品贮备液。
[0056]
对照品溶液：精密量取对照品贮备液2溶液 1.5ml，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
[0057]
供品溶液：精密称取本品约100mg，置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0058]
回收溶液（限度浓度100%）：精密称取本品约100mg，共6份，分别置100ml量瓶中，各精密加入上述对照品贮备液1.5ml，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为限度浓度100%的回收溶液。
[0059]
取上述对照品溶液、供试品溶液及6份回收溶液，分别进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，供试品溶液中测得nh
4+
离子的含量为0.00127%，回收率结果详见表10。
[0060]
表10 回收率试验结果
结果表明，回收率满足要求。
[0061]
2.7 重复性试验精密称取本品约100mg，共6份，分别置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，记录色谱图，计算供试品溶液中氨水含量，结果详见表11。表11重复性试验结果结果表明，重复性试验满足要求。
[0062]
2.8 耐用性试验改变流速、柱温，其它条件不变，考察方法耐用性。
[0063]
流速：0.9ml/min、1.0 ml/min（拟定条件）、1.1 ml/min条件柱温：30℃（拟定条件）、32℃（注：30℃为仪器允许设置的最低温度）结果见表12。
[0064]
表12耐用性试验结果结果表明，流速和柱温的细微变化，铵离子峰与相邻峰的分离度均大于1.5，不影响测定，拟定方法耐用性好。
[0065]
实施例3样品检测3.1空白溶液（稀释剂）：超纯水。
[0066]
3.2对照品溶液：取氯化铵标准品约0.3g，精密称定，置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，
摇匀，作为对照品贮备溶液1；精密量取1.0ml对照品贮备溶液1，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液2；精密量取1.5ml对照品贮备溶液2，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（浓度为0.45μg/ml）。
[0067]
3.3供试品溶液：精密称取本品100mg，置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液（浓度为1mg/ml）。
[0068]
3.4系统适用性溶液：精密称取本品100mg，置100ml量瓶中，精密加入对照品贮备液2溶液1.5ml，再用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得系统适用性溶液（即环丙胺浓度为1mg/ml，氯化铵浓度为0.45μg/ml）。
[0069]
3.5将对照品溶液、供试品溶液和系统适用性溶液分别注入色谱仪中检测。
[0070]
所用的色谱条件如下：仪器：离子色谱仪thermo(赛默飞世尔）（dionex ics-2100）色谱柱：阳离子交换色谱柱dionex ionpactm cs12a rfictm 4
×
250mm抑制器：阳离子抑制器
ꢀꢀꢀꢀ
dionexcers 500 4mm 082542抑制器类型：csrs_4mm淋洗液发生器：甲磺酸淋洗液发生器淋洗液浓度：msa 30mmol/l柱温：30℃检测器：电导检测器池温：35℃流速：1ml/min进样量：25
µ
l电流：88ma采集速率：50hz采用淋洗液浓度梯度洗脱，条件如下：结果见图3～5。图3 为系统适用性溶液色谱图，铵离子峰与相邻峰分离度均大于1.5，分离度符合要求，峰形较好，不对称度在0.8～1.2范围内。图4为对照品溶液色谱图；图5 为供试品溶液色谱图。
[0071]
以上结果表明，采用本发明提供的离子色谱法，可测定环丙胺中氨水含量，具有较高专属性、准确性及耐用性，可保证测得结果准确可靠，从而达到有效控制产品质量的目
的，以在保证产品质量的同时，确保产品的质量稳定性。
[0072]
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案的精神实质而非限制。
[0073]
尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作为各种各样的改变，而不偏离权利要求所限定的本发明的精神和范围。