一种基于磁微粒发光法的肺炎支原体和衣原体抗体检测试剂盒的制作方法

文档序号:29075953发布日期:2022-03-01 22:45阅读:214来源:国知局

1.本发明涉及一种基于磁微粒发光法的肺炎支原体和衣原体抗体检测试剂盒,属于检测试剂技术领域,本发明是一种可以在一个微孔中,同时测定一个样本中的mp-igg、mp-igm、cp-igg、cp-igm四种蛋白的检测试剂盒。


背景技术:

2.mp-igg、mp-igm、cp-igg、cp-igm是肺炎支原体和衣原体中常见的抗体,然而随着医疗水平的进步,mp-igg、mp-igm、cp-igg、cp-igm都能通过现有的检测试剂进行检测,然后再做进一步的治疗,然而当检测一个样本中的mp-igg、mp-igm、cp-igg、cp-igm时,需要单独的用四种检测试剂分别对mp-igg、mp-igm、cp-igg、cp-igm进行检测,增加了检测时间,降低了检测效率。


技术实现要素:

3.本发明所要解决的技术问题在于:提供一种基于磁微粒发光法的肺炎支原体和衣原体抗体检测试剂盒,它解决了当检测一个样本中的mp-igg、mp-igm、cp-igg、cp-igm时,需要单独的用四种检测试剂分别对mp-igg、mp-igm、cp-igg、cp-igm进行检测的问题。
4.本发明所要解决的技术问题采取以下技术方案来实现:一种基于磁微粒发光法的肺炎支原体和衣原体抗体检测试剂盒,检测试剂盒包括捕获微球混合液、检测抗体、sa-pe、实验缓冲液、洗涤缓冲液和工作液,(1)捕获微球混合液:悬浮液中包含有可辨识的聚苯乙烯微珠,聚苯乙烯微珠分别包被有如下抗体:抗人mp-igg抗体、抗人mp-igm抗体、抗人cp-igg抗体、抗人cp-igm抗体;(2)检测抗体:原液浓度为0.5mg/ml的情况下用蛋白稳定液稀释62.5倍,使浓度为0.8μg/ml;(3)sa-pe:原液浓度为1mg/ml的情况下用蛋白稳定液稀释50倍,使浓度为2μg/ml;(4)工作液:原液浓度为40.6mg/ml的情况下用蛋白稳定液稀释6.7倍,使浓度为0.6mg/ml;(5)实验缓冲液:在1000ml的磷酸缓冲液中加入50gbsa,1ml tween-20,3ml proclin300和0.5ml rpe2520,搅拌30min分钟以上,待溶液澄清无杂质后,进行至少0.45μm的除菌过滤;(6)洗涤缓冲液:在1000ml的磷酸缓冲液中加入5ml tween-20,3ml proclin300和0.3ml rpe2520,搅拌30min分钟以上,待溶液澄清无杂质后,进行至少0.45μm的除菌过滤。
5.作为优选实例,试剂盒的生产工艺主要有以下几步:

制备活化缓冲液,活化缓冲液主要成分包括:即8.0g/l的nacl试剂,2.9g/l的na2hpo4
·
12h2o试剂,2.4g/l的kcl试剂,2.4g/l的kh2po4试剂,0.5g/l的tris试剂,0.5ml/l的tween20试剂,0.5g/l的sodiumazide试剂。
6.②
微球的活化与包被,取1ml特定编号微珠加入1.5ml离心管,加入5-50uledc(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)和5-50ulsulfo-nhs(n-羟基硫代琥珀酰亚胺),加入10-100ug特定抗体,涡旋混匀30秒,超声混匀30秒,2-8℃摇匀过夜。
7.③
制备检测抗体:原液浓度为0.5mg/ml的情况下用蛋白稳定液稀释62.5倍,使浓度为0.8μg/ml。
8.④
制备sa-pe:原液浓度为1mg/ml的情况下用蛋白稳定液稀释50倍,使浓度为2μg/ml。
9.⑤
制备工作液:原液浓度为40.6mg/ml的情况下用蛋白稳定液稀释6.7倍,使浓度为0.6mg/ml。
10.⑥
制备实验缓冲液:在1000ml的磷酸缓冲液中加入50gbsa,1ml tween-20,3ml proclin300和0.5ml rpe2520,搅拌30min分钟以上,待溶液澄清无杂质后,进行至少0.45μm的除菌过滤。
11.⑦
制备洗涤缓冲液:在1000ml的磷酸缓冲液中加入5ml tween-20,3ml proclin300和0.3ml rpe2520,搅拌30min分钟以上,待溶液澄清无杂质后,进行至少0.45μm的除菌过滤。
12.本发明的有益效果是:本发明包括捕获微球混合液、检测抗体、sa-pe、实验缓冲液、洗涤缓冲液和工作液,生产工艺按照制备活化缓冲液、微球的活化与包被、制备检测抗体、制备sa-pe、制备工作液、制备实验缓冲液和制备洗涤缓冲液进行生产,解决了当检测一个样本中的mp-igg、mp-igm、cp-igg、cp-igm时,需要单独的用四种检测试剂分别对mp-igg、mp-igm、cp-igg、cp-igm进行检测的问题,缩短了检测时间,从而提高了检测效率。
具体实施方式
13.为了对本发明的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解,下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。
14.一种基于磁微粒发光法的肺炎支原体和衣原体抗体检测试剂盒,检测试剂盒包括捕获微球混合液、检测抗体、sa-pe、实验缓冲液、洗涤缓冲液和工作液,(1)捕获微球混合液:悬浮液中包含有可辨识的聚苯乙烯微珠,聚苯乙烯微珠分别包被有如下抗体:抗人mp-igg抗体、抗人mp-igm抗体、抗人cp-igg抗体、抗人cp-igm抗体;(2)检测抗体:原液浓度为0.5mg/ml的情况下用蛋白稳定液稀释62.5倍,使浓度为0.8μg/ml;(3)sa-pe:原液浓度为1mg/ml的情况下用蛋白稳定液稀释50倍,使浓度为2μg/ml;(4)工作液:原液浓度为40.6mg/ml的情况下用蛋白稳定液稀释6.7倍,使浓度为0.6mg/ml;(5)实验缓冲液:在1000ml的磷酸缓冲液中加入50gbsa,1ml tween-20,3ml proclin300和0.5ml rpe2520,搅拌30min分钟以上,待溶液澄清无杂质后,进行至少0.45μm的除菌过滤;(6)洗涤缓冲液:在1000ml的磷酸缓冲液中加入5ml tween-20,3ml proclin300和0.3ml rpe2520,搅拌30min分钟以上,待溶液澄清无杂质后,进行至少0.45μm的除菌过滤。
15.试剂盒的生产工艺主要有以下几步:

制备活化缓冲液,活化缓冲液主要成分包括:即8.0g/l的nacl试剂,2.9g/l的na2hpo4
·
12h2o试剂,2.4g/l的kcl试剂,2.4g/l的kh2po4试剂,0.5g/l的tris试剂,0.5ml/l的tween20试剂,0.5g/l的sodiumazide试剂;

微球的活化与包被,取1ml特定编号微珠加入1.5ml离心管,加入5-50uledc(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)和5-50ulsulfo-nhs(n-羟基硫代琥珀酰亚胺),加入10-100ug特定抗体,涡旋混匀30秒,超声混匀30秒,2-8℃摇匀过夜。
16.生产检测试剂盒时,需要同时放置4种抗体瓶子的摇床,分别包被不同编号的微球,步骤如下:1)洗涤:使用抽滤洗涤,经洗涤后的微珠转移至活化缓冲液;2)质控:通过使用质控盘来验证质量;3)将多种已包被微珠混合,用少量活化缓冲液洗下瓶壁残留微珠,并混合,最后用活化缓冲液定容,检验合格后分装。
17.③
制备检测抗体:原液浓度为0.5mg/ml的情况下用蛋白稳定液稀释62.5倍,使浓度为0.8μg/ml。
18.④
制备sa-pe:原液浓度为1mg/ml的情况下用蛋白稳定液稀释50倍,使浓度为2μg/ml。
19.⑤
制备工作液:原液浓度为40.6mg/ml的情况下用蛋白稳定液稀释6.7倍,使浓度为0.6mg/ml。
20.⑥
制备实验缓冲液:在1000ml的磷酸缓冲液中加入50gbsa,1ml tween-20,3ml proclin300和0.5ml rpe2520,搅拌30min分钟以上,待溶液澄清无杂质后,进行至少0.45μm的除菌过滤。
21.⑦
制备洗涤缓冲液:在1000ml的磷酸缓冲液中加入5ml tween-20,3ml proclin300和0.3ml rpe2520,搅拌30min分钟以上,待溶液澄清无杂质后,进行至少0.45μm的除菌过滤。
22.以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
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