一种促卵泡激素的应用的制作方法

1.本发明涉及男性特发性肺动脉高压患者生存率预后的技术领域，尤其涉及一种促卵泡激素的应用。


背景技术：

2.特发性肺动脉高压(idiopathic pulmonary arterial hypertension，ipah)是一种罕见的血管疾病，其主要病理特征是肺血管壁重塑，导致肺血管阻力增加、右心室肥厚，最终导致右心衰竭甚至死亡。虽然流行病学数据表明pah更可能发生在女性身上，但是男性患者的预后更差。因此，关于性激素及相关代谢物质在ipah发病过程的变化及潜在作用已经引起了人们的广泛关注。在既往的研究中，人们对性激素及其调节激素在pah中的潜在作用进行了大量的研究，并取得了一定的进展。其中，wu等的研究对垂体-性腺轴激素在男性pah患者中进行了探索，发现较高的雌二醇/睾酮比例和较低的睾酮和孕激素与pah的发病率有关，但并未揭示调节性激素释放的激素，即促卵泡激素(follicle-stimulating hormone，fsh)在男性pah患者中的表达差异。fsh是一种由脑垂体合成并分泌的激素，属于糖基化蛋白质激素，因其对女性卵泡成熟的刺激作用而得名；其在男女两性体内都是很重要的激素之一，调控着发育、生长、青春期、性成熟以及生殖相关的一系列生理过程。并且近年来大量关于癌症的研究中发现fsh受体(fshr)在血管中具有很重要的调节作用。随后另一项研究对育龄期女性ipah患者的性激素表达水平进行了观察和分析，结果发现高水平表达的fsh可以提示育龄女性ipah患者的高发病风险和高死亡率，但关于fsh在男性ipah患者的变化水平及疾病进程中潜在影响尚不清楚。因此，本研究旨在探索男性ipah患者血浆中fsh水平的改变及对于男性ipah患者疾病严重程度和预后的影响。


技术实现要素：

3.本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种促卵泡激素的应用。
4.为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
5.提供一种检测促卵泡激素的制剂在制备预测男性特发性肺动脉高压患者生存率试剂盒中的应用。
6.优选地，促卵泡激素水平较高的患者具有较低的生存率。
7.优选地，促卵泡激素水平不低于5.94的患者具有较低的生存率。
8.优选地，所述预测的敏感性不低于78.7％。
9.优选地，所述预测的特异性不低于88.0％。
10.本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
11.本发明初步揭示了促卵泡激素水平与男性特发性肺动脉高压患者疾病严重程度显著相关，特别是促卵泡激素水平较高的患者具有较低的生存率。
附图说明
12.图1a为对照组与ipah患者fsh水平的比较图；图1b为ipah患者非幸存者与幸存者fsh水平的比较图；
13.图2为单变量和多变量cox回归分析图；
14.图3为基于患者fsh水平预测死亡的roc分析图；
15.图4为男性ipah患者的不同fsh水平下临床参数的比较图；
16.图5为不同fsh水平的患者kaplan-meier生存曲线图。
具体实施方式
17.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
18.需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
19.下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为本发明的限定。
20.实施例
21.①
研究样本
22.本专利回顾性地纳入了116例男性ipah患者，他们与2016年5月15日至2020年8月13日入住上海市肺科医院，年龄为42.3
±
18.9岁(平均值
±
标准差)。纳入标准基于欧洲pah指南的诊断标准，即右心导管插入术测量的平均肺动脉压》25mmhg，以及肺毛细血管楔形压≤15mmhg。
23.排除标准包括：病因明确的肺动脉高压(如结缔组织疾病和先天性心脏病)、门脉肺动脉高压、慢性肺阻塞、慢性肺血栓栓塞和左心疾病。我们还排除了可能影响激素代谢的急性或慢性疾病患者(例如，急性或慢性感染、慢性自身免疫疾病和先前确定的原发性内分泌疾病)以及在研究期间或过去接受任何激素(甲状腺激素、合成代谢类固醇、皮质类固醇)或显著抑制激素产生的药物治疗的患者。
24.同时纳入了53名在健康、年龄、性别和地理分布与患者组相匹配的、无ipah的男性作为对照组。进行心脏、妇科和泌尿科评估，以确认没有任何可能影响血浆性激素浓度的情况。上述方案经上海市肺科医院伦理委员会的批准(伦理编号：k12-089)。在进行任何与研究相关的操作之前，已获得每位患者和健康受试者的书面知情同意。
25.②
血液采集及化验
26.所有受试者均采集静脉血样本，并记录相关临床信息，为后续研究提供参考。血浆样品立即制备后，在-20℃冷冻，在-80℃保存，直到进一步分析。
27.③
检测指标
28.检测指标为对照组和患者组的心率、收缩压、舒张压以及fsh浓度。对于住院患者，测试指标还包括n末端b型利钠肽前体(nt-probnp)、6分钟步行距离(6mwd)、平均右心房压(mrap)、平均肺动脉压(mpap)、肺动脉楔形压、肺动脉血管阻力(pvr)、心脏指数(ci)、心输出量(co)和用于评估患者心脏功能的心功能分级(who-fc)。
29.④
检测指标的测量
30.ipah患者在采血后1周内接受右心导管插入术，测量基线血流动力学指标，包括心率，收缩压，舒张压，平均右心房压，平均肺动脉压，肺血管阻力和心输出量。在采血和右心导管插入术之间，患者的临床状态没有变化。通过冷等渗氯化钠溶液热稀释法测定三次心输出量。通过平均肺动脉压和平均肺动脉楔形压的差除以心输出量计算肺动脉血管阻力，并依据欧洲pah指南确定其心功能分级。基于elecsys 1010/2010系统的电化学发光免疫分析用于定量血浆fsh总浓度。
31.⑤
统计与分析
32.数据采用平均值
±
标准差、中位数和四分之一区间或者百分比表示。差异性比较采用独立样本t检验、mann-whitney u检验、χ2检验或适当的kruskal-wallis方差分析进行检验。相关性是通过person(适用于定量资料)和spearman(适用于定性资料)相关系数进行评估。预后价值是通过单因素和多因素cox比例风险回归分析进行检验。受试者工作特征(receiver operating characteristic，roc)曲线用于评估患者死亡风险增加的fsh水平的临界值。采用kaplan-meier法分析患者生存率，并与log-rank检验进行比较。p值小于0.05被认为是具有显著统计学差异。所有数据均使用spss 24统计软件进行分析。
33.⑥
临床特征
34.我们总结了ipah患者及正常对照组的一般临床资料和血流动力学指标。与对照组相比，ipah患者的心率较高，但收缩压和舒张压略低，(p＝0.005、p＝0.001和p＝0.030)(表1)。两组之间的年龄和体重指数未见显著差异(p＝0.076，p＝0.659)(表1)。对照组均为幸存者。ipah患者包括62名非幸存者和54名幸存者。对照组和患者之间的非幸存者人数有显著差异(p《0.0001)(表1)。
35.表1 ipah患者和正常对照组的一般临床资料
36.[0037][0038]
⑦
患者与对照组fsh水平的比较
[0039]
ipah患者的血浆fsh浓度显著高于对照组(p＝0.017)(图1a)。ipah的幸存者血浆fsh浓度显著低于非幸存者(p《0.0001)(图1b)。
[0040]
⑧
相关性分析
[0041]
我们发现所有患者的血浆fsh水平与6mwd、co、ci之间呈轻度到中度负相关(分别为p＝0.004、p＝0.01和p＝0.009)(表2)。患者的fsh水平与who-fc之间呈轻度正相关(p＝0.023)(表2)。我们也观察到患者的fsh水平与mpap、pvr之间呈中度正相关(p《0.0001和p《0.0001)(表2)。在这些患者中，血浆fsh水平与mrap和nt-probnp无显著相关性(p＝0.053和p＝0.104)(表2)。
[0042]
表2 ipah患者的fsh水平与各临床参数的相关性
[0043]
[0044][0045]
注：上表中的左下角为p值，右上角为相关系数r。
[0046]
⑨
单因素与多因素cox回归分析
[0047]
在单因素cox比例风险分析中，who-fc、6mwd、mrap、mpap、pvr、co和fsh水平与所有患者的死亡率显著相关(分别为p＝0.003、p《0.0001、p＝0.002、p＝0.007、p《0.0001、p《0.0001和p《0.0001)(图2)。多变量正向逐步cox比例风险分析显示，6mwd、co和fsh水平是所有患者生存率的独立预测因素(分别p＝0.006、p＝0.005和p《0.0001)(图2)。因此，6mwd、co和fsh在预测肺动脉高压预后方面发挥着重要作用。
[0048]
⑩
roc分析
[0049]
我们进行roc分析评估fsh、co和6mwd作为肺动脉高压死亡率预测因子的敏感性和特异性(图3)。fsh的曲线下面积为0.883，可预测肺动脉高压的死亡率(p《0.0001)(图3)。roc最佳临界值为5.94，敏感性为78.7％，特异性为88.0％。co也可以预测肺动脉高压的死亡率，预测死亡率的初始临界值为4.31，敏感性和特异性分别为62.0％和77.0％(曲线下面积为0.732；p《0.0001)(图3)。在进一步分析中，6mwd曲线下面积为0.715，可以预测肺动脉高压的死亡率(p《0.0001)(图3)。6mwd的roc最佳临界值为415，敏感性为64.0％，特异性为86.7％(图3)。
[0050]
表3基于患者fsh水平预测死亡的roc分析
[0051] 曲线下面积临界值敏感性特异性p值fsh0.8835.9478.7％88.0％《0.0001co0.7324.3162.0％77.0％《0.00016mwd0.71541564.0％80.3％《0.0001
[0052]
fsh低水平与高水平患者的临床特征的比较
[0053]
为了进一步验证fsh表达量的高低对ipah患者疾病严重程度的影响，我们根据fsh的临界值将ipah患者分为fsh低水平组(fsh《5.94miu/ml)和fsh高水平组(fsh≥5.94miu/ml)，并比较两组之间的各项临床参数差异。结果如图4a和4c所示，与高水平fsh组相比，低水平fsh组ipah患者的6mwd和co显著增加。相反，低fsh组的pvr显著降低(p＝0.042)(图4b)。
[0054]
kaplan-meier生存曲线
[0055]
使用kaplan-meier曲线分析fsh水平对生存率的预测价值，低水平fsh组的ipah患者生存率显著高于高水平fsh组的ipah患者。kaplan-meier分析表明，fsh相对水平低于5.94的ipah患者预后明显优于fsh相对水平不低于5.94的ipah患者预后(p《0.0001)(图5)。
[0056]
表4不同fsh水平的患者kaplan-meier生存曲线
[0057]
面临风险的人数(月)024487296120fsh≥5.94633825171311fsh《5.94534946434343
[0058]
以上所述仅为本发明较佳的实施例，并非因此限制本发明的实施方式及保护范围，对于本领域技术人员而言，应当能够意识到凡运用本发明说明书及图示内容所作出的等同替换和显而易见的变化所得到的方案，均应当包含在本发明的保护范围内。