技术特征：
1.一种快速检测血浆中甲状腺球蛋白浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)设计并合成tg特征性多肽lr12及lr12内标，将lr12与载体蛋白偶联制备半抗原，并得到抗lr12的多克隆抗体，抗lr12的多克隆抗体与磁微粒偶联得到可富集tg特征性多肽lr12的抗体偶联磁微粒；2)建立分析lr12和lr12内标的液相色谱和质谱方法，得到甲状腺球蛋白标准曲线；3)取血清样品，加入步骤1)得到的lr12内标，经变性，开键，烷基化酶解得到用于液相色谱串联质谱检测的酶解物；4)通过步骤1)得到的抗体偶联磁微粒富集步骤3)得到的酶解物，进质谱仪进行分析；5)步骤4)得到的分析数据通过标准曲线计算得到血清tg浓度。2.根据权利要求1所述的一种快速检测血浆中甲状腺球蛋白浓度的方法，其特征在于，步骤1)中tg特征性多肽lr12如seq id no.1所示。3.根据权利要求1所述的一种快速检测血浆中甲状腺球蛋白浓度的方法，其特征在于，步骤1)中，所述lr12内标为使用同位素标记合成，其中同位素为碳13与氮15。4.根据权利要求1所述的一种快速检测血浆中甲状腺球蛋白浓度的方法，其特征在于，步骤1)中，抗体偶联磁微粒的制备方法为：1)抗体溶液预处理：使抗体保存液置换为pbs缓冲液；2)磁珠预处理：取羧基磁微粒混合均匀，磁性分离去除上清液；加入去离子水，混合均匀，磁性分离去除上清液，再重复2次；加入pbs重悬磁微粒，磁性分离去除上清液，再重复2次；3)抗体与磁微粒偶联：加入步骤2)得到的pbs重悬磁微粒，加入步骤1)得到的抗体，室温旋转混合；加入碳化二亚胺溶液，补充pbs使体系到总体积为1000μl，室温涡旋偶联1～3hr，磁性分离去除上清液；加入淬灭缓冲液重悬磁微粒，涡旋混合，磁性分离去除上清液；加入pbs，混合重悬磁微粒，磁性分离去除上清液，再重复2次；并将抗体偶联磁微粒保存在10％甲醇90％水溶液中，使得抗体偶联磁微粒浓度达到1mg/ml。5.根据权利要求1所述的一种快速检测血浆中甲状腺球蛋白浓度的方法，其特征在于，步骤2)中，甲状腺球蛋白标准曲线的浓度依次为5ng/ml，10ng/ml，25ng/ml，50ng/ml，75ng/ml与100ng/ml。6.根据权利要求1所述的一种快速检测血浆中甲状腺球蛋白浓度的方法，其特征在于，步骤3)具体为：在血清样品或定标曲线样品中加入pbs配制的lr12内标，再加入变性剂，加入二硫苏糖醇60℃还原，打开蛋白质半胱氨酸间中的二硫键；恢复室温后加入碘乙酰胺避光室温处理，使还原后的半胱氨酸烷基化；加入胰蛋白酶酶解；加入10％甲酸，混匀，waters sepakc18小柱脱盐，80％甲醇洗脱，真空浓缩干燥，得到酶解物。7.根据权利要求1所述的一种快速检测血浆中甲状腺球蛋白浓度的方法，其特征在于，步骤4)具体为：在步骤3)得到的酶解物中加入90％pbs-10％甲醇溶液充分溶解，加入抗体偶联磁微粒孵育，磁吸分离弃去液体；抗体偶联磁微加入pbs洗涤，磁吸分离弃去液体，再重复洗1次；抗体偶联磁微粒加80％甲醇洗脱，磁吸分离弃去抗体偶联磁微粒，取洗脱后的肽段上质谱仪分析。8.根据权利要求1所述的一种快速检测血浆中甲状腺球蛋白浓度的方法，其特征在于，液相色谱的参数为：色谱柱：waters acquity uplc beh c18 100
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2.1mm 1.7μm；流动相a：
0.1％甲酸水溶液；流动性b：0.1％甲酸乙腈溶液；流速：0.5ml/min；柱温：45℃；进样：20μl。9.根据权利要求1所述的一种快速检测血浆中甲状腺球蛋白浓度的方法，其特征在于，质谱参数为：质谱型号和扫描模式：i-class waters tqs，正离子模式；毛细管电压：0.8kv；脱溶剂温度：400℃；脱溶剂气：800l/hr；锥孔气：150l/hr；扫描模式：多反应监测。
技术总结
本发明公开了一种快速检测血浆中甲状腺球蛋白浓度的方法，通过胰蛋白酶酶解血清总蛋白，得到含有甲状腺球蛋白特征性多肽的血清总蛋白胰蛋白酶酶解肽段混合物，抗甲状腺球蛋白特征肽抗体偶联磁微粒自动化富集纯化血清中的Tg特征性多肽，利用超高效液相色谱串联质谱法快速测定血清中的Tg浓度。本发明的方法可避免TgAb带来的影响，准确检测血清中的Tg浓度，样品前处理操作简便，结合自动处理仪器iMS1000，可实现样品前处理自动化，实验周期短，一天内可完检测。一天内可完检测。一天内可完检测。
技术研发人员：吕中伟 易婉婉 刘瑾 马超 蔡海东 贾成友 范恒伟
受保护的技术使用者：上海市第十人民医院
技术研发日：2021.12.21
技术公布日：2022/4/1