一种检测总甲状腺素含量的检测卡、试剂盒及其检测方法与流程

本发明涉及生物医学检测，尤其涉及一种检测总甲状腺素含量的检测卡、试剂盒及其检测方法。

背景技术：

1、3，5，3’，5’四碘甲状腺原氨酸，即甲状腺素(thyroxine，t4)，是甲状腺分泌的主要激素，分子量为777，半衰期为6－7天。t4激素与细胞代谢一起调节许多生物过程，对神经系统的发育至关重要。据估计，血液中99.9％以上的总t4激素与转运蛋白结合，即甲状腺素结合球蛋白(tbg)、甲状腺结合前白蛋白(tbpa)和白蛋白(alb)，与蛋白结合的t4。因此，只有0.02－0.04％的t4以游离(未结合)的形式存在，目前认为游离的t4才具有生物学活性。与蛋白质结合的t4与游离的t4激素保持动态平衡，保证甲状腺的正常功能。t4的水平会随着tbg浓度的改变而变化，例如，怀孕或服用避孕药，长期肝炎和胆硬化等会增加tbg的水平，肾病和雄激素治疗等则会降低。游离的t4进入需利用t4的身体组织发挥作用。t4还转化为另一种甲状腺激素，即三碘甲状腺原氨酸(t3)；因此，t4是甲状腺功能障碍中任何激素变化的指标。虽然t3是比t4更具有活性的甲状腺激素，但t4在血清中循环的含量远远超过t3。t4和t3都起着调节体内的各种生化过程的作用，对正常的生理代谢和神经系统活性是必须的。

2、血清总甲状腺素(tt4)的浓度与甲状腺功能有密切的关系，tt4的检测是评估甲状腺功能和病理状态的一个重要的临床指标，也是诊断新生儿先天性甲状腺功能低下有效方法。因此，有待开发对总甲状腺素tt4检测灵敏度高与可靠性并能降低检测成本的检测技术。

3、总甲状腺素是由甲状腺分泌的一种激素，是血清中与蛋白结合的t4与游离t4的总量，tt4浓度升高出现甲亢、tt4浓度降低出现甲减。tt4浓度为甲状腺功能体外试验的灵敏指标，可在一定程度上反映甲状腺功能状态，为临床诊断甲亢、甲减提供依据。用于体内总甲状腺素测定的主要方法有：放射免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、化学发光免疫分析法等，具体如下。

4、1)蛋白结合碘法(pbi)。是最早应用的甲状腺素检测方法，由于该方法干扰因素较多，无法作为甲状腺激素的常规检测方法。

5、2)放射免疫法(ria)。是用i标记甲状腺素半抗原来实现的，其合成工艺复杂，有效期短，对环境有一定污染，影响检测结果的因素较多，目前已基本退出市场。

6、3)免疫胶体金方法(ica)。是将高电子密度的胶体金作为标记物标记在抗体或者抗原上，当其在相应的配体处发生聚集时会产生肉眼可见的颜色，因而可以用以定性或者半定量的检测研究中。该方法操作简单快速，但灵敏度低这一问题始终无法解决，这也是技术本身决定的。

7、4)酶联免疫方法(elisa)。是较为常用的一种技术，是通过固相的抗原或者抗体和酶标后的抗原和抗体结合，常见的结合方式有双抗夹心法和间接法。酶联免疫法主要原理是采用双抗夹心的方法进行检测，包被抗体吸附于固相的载体表面，用来和特异抗原结合，当待测物中含有特异抗原时，与其形成抗原－抗体的复合物。再加入另一种用酶标记的抗体作为检测抗体，这种方式可以保留酶的活性和抗体的免疫学活性，用来提高elisa方法的灵敏度。酶标记后的抗体会和待测物中抗原的不同表位结合形成抗体－抗原－抗体的双抗夹心复合物，形成的复合物也被结合在固相载体上，加入酶反应的底物后，底物会被酶催化成有色产物，有色产物颜色的深浅则可以判断待测物中抗原的浓度，从而进行定性或者定量的实验。该方法检测灵敏度低，检测范围窄，且操作时间长，不适合做急诊检测，只能应用于成批次检测。另外，酶自身性质不稳定，易受生物样品的干扰。

8、5)化学发光免疫分析法(clia)。是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。近几年来，化学发光免疫分析技术发展迅速，灵敏度、特异性以及自动化程度均达到或超过了ria水平，特别是标记物的稳定性和不污染环境是ria法无法比拟的。近几年各大中型医院均进口了全自动化学发光免疫分析系统，但是仪器和试剂价格昂贵。目前已有多件磁微粒化学发光方法检测甲状腺素的专利申请，申请使用的是异鲁米诺发光标记物标记甲状腺素抗体，检测灵敏度较低，稳定性较差。

技术实现思路

1、基于上述问题，本发明所要解决的问题之一在于提供一种采用荧光定量免疫层析技术可实现操作简便、检测快速、便携性强的检测总甲状腺素含量的检测卡。

2、本发明所要解决的问题之二在于提供一种检测总甲状腺素含量的试剂盒。

3、本发明所要解决的问题之三在于提供一种使用试剂盒进行检测总甲状腺素含量的检测方法

4、本发明的技术方案一如下：

5、一种检测总甲状腺素含量的检测卡盒，所述检测卡包括长条状的pvc底板，在所述pvc底板的一个表面沿其长度方向依次排列设置有样品垫、结合垫、反应膜及吸收垫，且所述反应膜的两端分别与吸收垫及结合垫一端层叠搭接，所述结合垫的另一端与样品垫的一端层叠搭接；所述结合垫上设有荧光标记的tt4抗体和荧光标记的羊抗鸡igy抗体；所述反应膜上设有间隔排列的检测线和质控线，所述检测线包被tt4抗原，所述质控线包被鸡igy抗体。

6、一实施例，所述检测卡中，所述荧光标记tt4抗体的生物源性为鼠源单克隆igg。

7、一实施例，所述检测卡中，所述羊抗鸡igy抗体的生物源性为羊源抗体。

8、一实施例，所述检测卡中，所述包被tt4抗原的生物源性为重组抗原。

9、一实施例，所述检测卡中，所述包被鸡igy抗体的生物源性为鸡源抗体。

10、一实施例，所述检测卡中，所述羊抗鸡igy抗体和tt4抗体均标记有荧光微球。

11、一实施例，所述检测卡中，所述tt4抗原的标记抗体在检测卡上的终浓度为0.5mg/ml；所述tt4包被抗原在检测卡上的终浓度为0.5mg/ml。

12、一实施例，所述检测卡中，所述用于质控线的鸡igy抗体在检测卡上的终浓度为0.5mg/ml；所述用于质控线的包被鸡igy抗体在检测卡上的终浓度为1mg/ml。

13、本发明还提供一种检测总甲状腺素含量的试剂盒，包括上述任一所述的检测卡、用于稀释样本的稀释液及id卡芯片；所述id卡芯片预存有检测标准曲线；所述稀释液组分为磷酸盐缓冲液。

14、本发明还提供一种一种使用试剂盒检测人体血清、血浆以及全血中总甲状腺素含量的检测方法；包括如下步骤：

15、准备全血、血浆、血清样本；

16、用移液管吸取全血、血浆、血清样本各100μl，并分别加入稀释液稀释，备用；

17、用移液管分别吸取稀释后的全血、血浆、血清样本液体滴加到三个上述试剂盒中的检测卡上，置于免疫荧光检测仪中检测，分别获得全血、血浆、血清中总甲状腺素含量。

18、与现有技术相比，本发明提供的检测卡、试剂盒或检测方法，具有如下优点：

19、1、测定结果的准确性和稳定性好；

20、2、具有比elisa试剂盒方法更高的灵敏度和更短的检测时间；

21、3、可直接对抗凝管里的全血样品进行检测，无需对待检血液样品进行预处理，简化了总甲状腺素检测的操作步骤，节省了检测时间；

22、4、该检测试剂盒只需将样品与稀释液混合，将混合液加入检测卡中并用荧光仪器读取数据，无需各种配套试剂或昂贵的仪器。

23、5、检测方法，采用荧光定量免疫层析技术，是基于免疫学原理的定量检测方法，具有快速、操作简便、成本低的特点，应用前景广。