用于判定妊孕性的生物标记物及使用其的判定方法

本发明涉及以人体液中的可溶性cd163浓度为指标来判断卵子或胚胎的妊孕性的方法等。

背景技术：

1、2017年，日本不孕治疗的治疗周期数超过40万周期数，出生婴儿数超过5万人。今后，由于晚婚化等的影响，预测不孕治疗件数和通过体外受精而出生的婴儿也会逐渐增加(非专利文献1)。

2、导致不孕的因素在男女中都存在。男性的情况下，主要可列举造精功能障碍、输精管道阻塞、精子活力不足等。而女性的情况下，除了年龄增长以外还可列举妇科疾病(子宫内膜异位症、子宫肌瘤等)、内分泌、代谢疾病等。但是，也存在常规不孕检查中观察不到异常的原因不明的情况，在观察不到明显异常时，一般认为是卵子质量下降导致了妊孕性下降。这里，妊孕性是指容易怀孕的程度，是卵子或卵子受精后形成的胚胎能够完成着床并妊娠的整个过程的能力的程度。通过取卵而得到的卵子的质量无法判断，因此即使进行体外受精并移植经过胚胎培养而得到的良好胚胎，实现着床的概率最高也仅30％左右(非专利文献1)。为了提高该着床概率，一般会尝试移植多个通过体外受精而得到的胚胎，但是多胎妊娠会增大身体负担，因此目前公开了原则上仅移植1个胚胎的单胚胎移植(非专利文献2)。

3、目前，胚胎移植包括用分割胚胎进行的分割胚胎移植和移植已达囊胚期的胚胎的囊胚移植。作为在各胚胎移植时进行评价的形态学方法，分别主要使用veeck分类(非专利文献3)及gardner分类(非专利文献4)。通常，在对通过体外受精得到的胚胎进行形态学评价后，移植同一周期内评价最高的胚胎，当然，即使移植评价最高的胚胎也未必能够实现着床/妊娠，另外还存在相反的情况，因此形态学胚胎评价并非与实际的胚胎质量严格相关。近年来，开发了用于确认胚胎生长过程的时差(time-lapse)培养。还提出了不是在胚胎培养后进行最终的形态学判断、而是基于胚胎生长过程来进行评价的方法(非专利文献5)，但是并无明确的判断基准。因此，为了对着床/妊娠预期可能性高的单胚胎移植进行判断，需要能够通过结合形态学评价而提供更好的客观判断基准的生物标记物。

4、近年来，以不孕治疗为对象的生物标记物研究已有很多报道。专利文献1中，作为非侵入性地进行体外受精评价的生物标记物，公开了mica(mhc i类链相关蛋白a)。虽然作为当人被检体中的mica水平超过阈值时表示着床功能不足、体外受精失败或流产的生物标记物而提出，但是并不表示卵子或胚胎的实际质量。

5、专利文献2中，作为用于预先选择适合于在子宫内着床的胚胎的生物标记物，提出了可溶性cd146。公开了以能够在胚胎培养液中进行确认的可溶性cd146为指标来选择适合移植的胚胎的方法，但是并非以人体液为对象。

6、专利文献3公开了鉴定能够胜任妊娠的卵母细胞的遗传学手段。公开了通过对由卵丘细胞得到的基因簇进行分析评价、从而在移植该卵母细胞时能够实现可存活的妊娠的指标，但是未在蛋白质水平进行研究且并非以人体液为对象。

7、本发明所关注的cd163已知为血红蛋白/结合珠蛋白清道夫受体，属于清道夫受体富含半胱氨酸超家族，为在单核细胞或巨噬细胞中表达的i型跨膜蛋白。在巨噬细胞活化过程中，被金属蛋白酶切割而产生可溶cd163而在血液中进行循环。因此，进行循环的可溶cd163为巨噬细胞活性标记物，并且，近年报道了其为以治疗恶性黑素瘤、进展期非小细胞肺癌为目标的分子标向治疗药-纳武单抗的治疗效果预测标记物(专利文献4)。

8、现有技术文献

9、专利文献

10、专利文献1:国际公开第2008/084105号小册子

11、专利文献2:国际公开第2016/170021号小册子

12、专利文献3:国际公开第2011/060080号小册子

13、专利文献4:国际公开第2018/003995号小册子

14、非专利文献

15、非专利文献1:日本产妇人科学会2018年art数据手册

16、非专利文献2:日本产妇人科学会“生殖補助医療における多胎妊娠防止に関する見解”平成20年4月发表

17、非专利文献3:atlas of the human oocyte&early conceptus,2,1991

18、非专利文献4:gardner dk,et al,fertil.steril.,73:1155-1158,2000

19、非专利文献5:pribenszky et al,reprod.biomed.online,35(5):511-520,2017

技术实现思路

1、发明要解决的问题

2、本发明的目的在于提供生物标记物、使用其的判定方法及判定试剂，其在不孕治疗中在体外受精后能够从经胚胎培养而得到的胚胎中判定出着床/妊娠概率高、即妊孕性高的胚胎。

3、用于解决问题的方案

4、本技术的发明人们进行了深入研究，结果发现，通过在体外受精时所进行的取卵中测定与卵子同时采集的卵泡液、即将取卵前的血清等体液中存在的可溶性cd163浓度，能够判断卵子或卵子受精后形成的胚胎的妊孕性，从而完成了以下的本技术发明。

5、即，本发明如下所述。

6、[1]用于判断卵子或卵子受精后形成的胚胎的妊孕性的生物标记物，其由可溶性cd163构成。

7、[2]可溶性cd163作为用于判断卵子或卵子受精后形成的胚胎的妊孕性的生物标记物的应用。

8、[3]判断卵子或卵子受精后形成的胚胎的妊孕性的方法，其测定人体液中的可溶性cd163浓度并由该测定值判断卵子或卵子受精后形成的胚胎的妊孕性。

9、[4]根据[3]所述的方法，其中，可溶性cd163浓度高于基准值时，判定为卵子或卵子受精后形成的胚胎的妊孕性高，该基准值为移植人卵子受精后形成的胚胎而未确立妊娠的其它人体液中的可溶性cd163浓度。

10、[5]根据[3]或[4]所述的方法，其中，前述体液为卵泡液、全血、血清、血浆或尿。

11、[6]根据[3]～[5]中任一项所述的方法，其中，测定可溶性cd163浓度的方法为免疫学测定方法。

12、[7]用于[6]所述的方法的判定试剂或判定试剂盒，其特征在于，其含有特异性识别可溶性cd163的抗体。

13、[8]特异性识别可溶性cd163的抗体在制造用于判定妊孕性的试剂或判定试剂盒中的应用。

14、[9]特异性识别可溶性cd163的抗体在判定妊孕性中的应用。

15、[10]特异性识别可溶性cd163的抗体，其用于判定妊孕性。

16、[11]治疗患者的不孕症的方法或提高基于体外受精的确立妊娠的方法，其包括：

17、(i)测定从患者采集的体液中的可溶性cd163浓度的工序；

18、(ii)当前述测定值超过预先设定的基准值时，将与前述被检体同一天从该患者采集的卵子或该卵子受精后形成的胚胎鉴定为妊孕性高的工序；及

19、(iii)将(ii)中鉴定出的卵子受精后形成的胚胎或鉴定出的胚胎移植于前述患者的工序。

20、发明的效果

21、根据本发明，不再仅依赖以往的基于医师经验的形态学判断，还能够参考客观的数值来选择适合于移植的胚胎，可极大地帮助医师进行胚胎评价/选择判断。