一种血液透析液中葡萄糖浓度的检测方法与流程

1.本发明属于医学检测技术领域，尤其涉及一种血液透析液中葡萄糖浓度的检测方法。


背景技术：

2.血液透析是急慢性肾功能衰竭患者肾脏替代治疗方式之一。血液透析过程中，随着毒素及水分的清除，患者体内的葡萄糖也随之移出，因此，在血液透析的中、后期患者经常发生低血糖，但，尤其是进人终末期的糖尿病肾病患者，由于对胰岛素代谢和敏感性的变化，以及血液透析过程中人体的葡萄糖进人透析液中等影响，较普通透析患者更容易发生血糖过低的现象，此时使用含糖透析液可以增高患者透析期间的血糖，降低低血糖的发生率。
3.现有技术中针对含糖透析液，yy 0598-2015《血液透析及相关治疗用浓缩物》中规定，浓缩液a、b与透析用水按照要求比例混合后的透析液作为检测用的为供试液，按照《中国药典》中“葡萄糖氯化钠注射液”项的方法进行测试，使用旋光仪进行检测供试液，即使用旋光仪检测旋光度的方法检测葡萄糖含量。但是现有大部分的透析液葡萄糖含量为1g/l，其旋光度约为0.05，《中国药典》通则0621“旋光度测定法”中认定的旋光仪不稳定零点波动的标准为差值超过
±
0.01，0.05的数值对仪器的精度及稳定性要求非常高，检测结果准确性不强。
4.为此，能够提供一种准确、客观和精度高的血液透析和相关治疗用浓缩物中葡萄糖溶质浓度检测方法是本领域技术人员亟需解决的问题。


技术实现要素：

5.有鉴于此，本发明提供了一种血液透析液中葡萄糖浓度的检测方法，本发明检测方法操作方法简便，利用高效液相色谱法达到了定性定量测定的要求，重现性好，准确性高，并且具有良好的线性，有利于对血液透析液中葡萄糖的含量控制。
6.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
7.一种血液透析液中葡萄糖浓度的检测方法，所述方法为采用高效液相色谱法对浓缩物中葡萄糖浓度进行检测。
8.优选地，所述浓缩物为血液透析及相关治疗用浓缩物。
9.优选地，所述述高效液相色谱的色谱柱为阳离子交换色谱柱。
10.优选地，所述阳离子交换色谱柱为磺化交联的苯乙烯二乙烯基苯共聚物为填充剂的强阳离子型交换色谱柱。
11.优选地，所述高效液相的色谱条件为：
12.以水为流动相，流速为每分钟0.4-0.6ml，柱温为65-80℃；
13.示差折光检测器，检测温度为45-55℃。
14.优选地，所述高效液相色谱法的具体检测步骤为：
15.(1)供试液的配制：将血液透析液配置成供试液，备用；葡萄糖对照品溶液配制，备用；
16.(2)取所述供试液、所述葡萄糖对照品溶液注入高校液相色谱仪测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得葡萄糖浓度。
17.优选地，步骤(1)所述血液透析液适用于浓缩液a、所述浓缩液b和所述水的体积比为1:1.225:32.775，1:1.26:32.74等各种处方的透析液。
18.优选地，步骤(1)所述葡萄糖对照品溶液的配制方法为：精密称取处理后的无水葡萄糖对照品20mg于20ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，混匀即得。
19.经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
20.1.本发明检测方法操作方法简便，利用高效液相色谱法达到了定性定量测定的要求，重现性好，准确性高，并且具有良好的线性，有利于对血液透析液中葡萄糖的含量控制；
21.2.本发明检测方法样品的前处理过程简单，使用按处方配制后透析液直接检测，操作简单，缩短了检测时间，提高了检测效率；
22.3.本发明的分析时间较短，仅需要15min即可完成分析；
23.4.采用本发明检测血液透析液时，葡萄糖可以完全分离，而且葡萄糖在进行定量时与其它峰不会产生影响；从而保证了检测结果的准确性。
24.5.实验条件简单，流动相为水，无有机相，对人体危害小。
附图说明
25.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
26.图1是实施例1溶剂检测色谱图；
27.图2是实施例1阴性溶液检测色谱图；
28.图3是实施例1对照品溶液检测色谱图；
29.图4是实施例1无水葡萄糖溶液检测色谱图；
30.图5是实施例1供试品溶液检测色谱图。
具体实施方式
31.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
32.实施例1
33.一种血液透析液中葡萄糖浓度的检测方法，具体包括以下步骤：
34.(1)供试液的配制：取血液透析浓缩液a与b液按使用说明配制成供试液，备用；
35.葡萄糖对照品溶液配制(含葡萄糖c6h
12
o6·
h2o 1.1g/l)：精密称取按说明书处理后的无水葡萄糖对照品20mg于20ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，混匀即得备用；
36.(2)系统适用性试验方法及要求：
37.精密量取葡萄糖对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，连续测定5次，记录色谱图；计算葡萄糖主峰峰面积的rsd及理论板数和分离度，5次峰面积的rsd(相对标准偏差)应不得过2.0％；理论板数按葡萄糖主峰计算应大于 2000；分离度大于1.5；
38.(3)精密量取供试液、葡萄糖对照品溶液各20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得葡萄糖浓度；其中，色谱条件：用磺化交联的苯乙烯二乙烯基苯共聚物的钙型强阳离子交换树脂为填充剂；以水为流动相，流速为每分钟0.4ml，柱温为65℃；示差折光检测器，检测温度为45℃；
[0039][0040]
式中：
[0041]s供试品
：为供试品溶液无水葡萄糖的峰面积；
[0042]s对照品
：为对照品溶液无水葡萄糖的峰面积；
[0043]m对照品
：为无水葡萄糖对照品的称样量，mg。
[0044]
验证
[0045]
方法学验证
[0046]
由于血液透析产品主要有氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、冰醋酸、无水葡萄糖、枸橼酸、碳酸氢钠等原料组成，取典型处方配制方法学溶液，具体配比见表1，如下：
[0047]
表1阴性浓缩液和供试品浓缩液的具体配比
[0048][0049]
溶剂：水
[0050]
阴性溶液配制：取阴性浓缩液与8.4％b液按浓缩液:b液:水＝1:1.225:32.775的体积比配制成阴性溶液；
[0051]
供试品溶液配制：取供试品浓缩液与8.4％b液按浓缩液:b液:水＝1:1.225:32.775的体积比配制成供试品溶液；
[0052]
无水葡萄糖溶液配制(含葡萄糖c6h
12
o6·
h2o 1.1g/l)：取无水葡萄糖20.22mg于20ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，混匀即得。
[0053]
葡萄糖对照品溶液配制(含葡萄糖c6h
12
o6·
h2o 1.1g/l)：精密称取按说明书处理后的无水葡萄糖对照品20.16mg于20ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，混匀即得。
[0054]
1)专属性：
[0055]
精密量取溶剂、阴性溶液、无水葡萄糖溶液、供试液、葡萄糖对照溶液各20μl，依次注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1-5，检测结果见表2；
[0056]
表2各溶液检测结果：
[0057][0058]
由上表和色谱图可知，供试液中葡萄糖峰应与葡萄糖对照溶液的主峰保留时间一致，流动相和阴性溶液(含氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、冰醋酸、碳酸氢钠)在(葡萄糖)主峰保留时间处无干扰。
[0059]
2)系统适用性试验
[0060]
测定
[0061]
精密量取葡萄糖对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，连续测定5次，记录色谱图，计算葡萄糖主峰峰面积的rsd及理论板数和分离度，检测结果见表3。
[0062]
可接受标准：5次峰面积的rsd应不得过2.0％；理论板数按葡萄糖主峰计算应大于2000，分离度大于1.5。
[0063]
表3葡萄糖对照品溶液检测结果：
[0064][0065]
由表3数据可知系统适用性满足要求。
[0066]
3)定量限和检测限
[0067]
以信噪比为10:1时相应浓度作为定量限，以信噪比为3:1时相应浓度作为检测限；检测结果定量限的浓度0.0055mg/ml，检测限的浓度0.0018mg/ml；
[0068]
4)线性和范围
[0069]
以葡萄糖(c6h
12
o6﹒h2o)0.88mg/ml、0.99mg/ml、1.1mg/ml、1.21mg/ml、 1.32mg/ml的线性溶液葡萄糖主峰峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标作图，检测结果见表4，得到相应曲线。
[0070]
表4浓度与峰面积检测结果
[0071][0072]
在葡萄糖浓度0.88-1.32mg/ml浓度范围下具有良好的线性关系。
[0073]
5)由不同化验员在不同时间分别对供试品浓缩液分别按配制比例配制6份，检测结果见表5，
[0074]
表52组化验员检测结果
[0075][0076]
由上表数据可知，第一人6份样品的峰面积rsd为0.17％，第二人6份样品的峰面积rsd为0.1％，两人12份结果的rsd为0.14％。
[0077]
6)回收率
[0078]
取葡萄糖含量80％、100％、120％供试品各3份，依次注入液相色谱仪，各测定2次，记录色谱图，检测结果见表6.
[0079]
表6葡萄糖含量80％、100％、120％供试品检测结果
[0080][0081]
7)溶液的稳定性
[0082]
取回收率项下1.1g/l浓度的供试品溶液3份，分别在0h、24h、48h、72h小时点分别测定，检测结果见表7。
[0083]
表7供试品检测结果
[0084][0085]
由上表数据可知，计算各时间点与0h供试品峰面积的rsd均小于2.0％，溶液在72h内能够稳定存在。
[0086]
8)采用本发明方法与旋光度测定法进行对比，取90％、100％、110％的葡萄糖含量浓度进行检测，结果数据见表8，
[0087]
表8本发明方法与旋光度测定法检测结果
[0088][0089]
从上表中可以看出，高效液相色谱法峰面积数据准确精密，灵敏度高，能够准确计算；旋光度测定法只能检测到0.001，而0.052-0.053数值相差1.9％，数据无法准确确定数值。
[0090]
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。