酒中阿斯巴甜的检测方法与流程

1.本发明属于酒类分析技术领域，具体涉及一种酒中阿斯巴甜的检测方法。


背景技术：

2.阿斯巴甜是天冬氨酸和苯基丙氨酸这两种氨基酸和甲醇缩合的物质，具有超出蔗糖的180至220倍的甜度，比一般蔗糖含更少的热量；一克的阿斯巴甜约有4千卡的热量。但使人感到甜味所需的阿斯巴甜量非常少，以致于可忽略其所含的热量，因此也被广泛地作为蔗糖的代替品。近年来，酒类产品在我国消费市场中需求量相当高，但是由于一些小企业、小作坊在酿造工艺环节操作不当，酒体中很容易带有苦味、异杂味，为了提升酒质，就会非法使用一些甜味剂，而摄入含有阿斯巴甜的食品会导致：脑神经异常、致癌性、脑肿瘤、骨骼发育正常、内脏异常等有害身体；因此，为了控制和有效降低食品安全风险，检测酒类产品中的阿斯巴甜是很有必要的，针对上述问题，需开发一种高效、便捷、准确度高的阿斯巴甜检测方法。


技术实现要素：

3.本发明解决的技术问题：提供一种酒中阿斯巴甜的检测方法，通过样品的前处理方法除酒精、除色泽、除蛋白质后，可快速准确的获得酒类产品中阿斯巴甜的含量，在流动相中创造性选用磷酸二氢钾溶液缓冲盐溶液，彻底解决了主峰与杂质峰以及相邻杂质峰之间分离困难的难题，分析方法快速、准确度高、重复性及再现性优异，操作简单、灵敏度高。
4.本发明采用的技术方案：酒中阿斯巴甜的检测方法，包括如下步骤：
5.1)样品前处理：对白酒类产品进行水浴超声后除去酒精；对发酵酒类产品中色泽较深的样品除杂；蛋白质含量较高的发酵酒类的产品采用沉淀剂去除蛋白质；
6.2)样品分析：采用乙腈和磷酸二氢钾缓冲盐溶液为流动相进行高效液相色谱仪分析检测。
7.上述步骤1)中，所述样品前处理中对白酒类产品进行55℃～65℃水浴超声除去酒精。
8.上述步骤1)中，所述样品前处理中发酵酒类产品中色泽较深的产品采用石墨化碳吸附除杂。
9.上述步骤1)中，所述沉淀剂为亚铁氰化钾和乙酸锌，所述样品前处理中蛋白质含量高的发酵酒类产品采用亚铁氰化钾和乙酸锌使蛋白质沉淀后得到上清液。
10.进一步地，所述白酒类产品进行水浴超声时在水浴温度为55℃～65℃下的水浴超声时间为8min～12min。
11.上述步骤1)中，所述白酒类产品准确称取4g～6g试样于烧杯中，在55℃～65℃水浴超声8min～12min无酒精气味后，将样品液体转移至22ml～28ml容量瓶中，继续向烧杯中加入4ml～6ml蒸馏水后超声4min～6min，将液体转移至同一容量瓶中，再重复上述操作，用水定容至刻度线。
12.上述步骤1)中，所述发酵酒类产品，准确称取4g～6g试样于烧杯中，在55℃～65℃水浴超声8min～12min无酒精气味后，加入50％甲醇水8ml～12ml、0.8g～1.2g石墨化碳后摇匀，继续超声8min～12min后，将样品液转移至22ml～28ml容量瓶中，继续向烧杯中加入50％甲醇水4ml～6ml后超声4min～6min，将液体转移至同一容量瓶中，再重复上述操作，用水定容至刻度线，涡旋混匀后，倒入离心管中，3000r/min离心2min～4min。
13.上述步骤1)中，所述蛋白含量较高的发酵酒类产品准确称取4g～6g试样装于烧杯中，在55℃～65℃水浴超声8min～12min无酒精气味后，将样品液转移至50ml比色管中，继续向烧杯中加入4ml～6ml蒸馏水后超声4min～6min，将液体转移至同一容量瓶中，重复上述操作后，向比色管中加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液后用水定容至刻度线，涡旋混匀后，倒入离心管中，3000r/min离心2min～4min。
14.进一步地，所述蛋白含量较高的发酵酒类产品除去蛋白质时先加入0.8～1.2ml亚铁氰化钾溶液，再加入0.8～1.2ml乙酸锌溶液涡旋，定容后离心取上清液。
15.本发明与现有技术相比的优点：
16.1、本技术方案通过样品的前处理方法除酒精、除色泽、除蛋白质后，可快速准确的获得酒类产品中阿斯巴甜的含量；
17.2、本技术方案在流动相中创造性选用磷酸二氢钾溶液缓冲盐溶液，彻底解决了主峰与杂质峰以及相邻杂质峰之间分离困难的难题；
18.3、本技术方案分析方法快速、准确度高、重复性及再现性优异，操作简单、灵敏度高。
附图说明
19.图1为本发明实施例一中白酒中阿斯巴甜的hplc分析图；
20.图2为本发明实施例二中猕猴桃酒中阿斯巴甜的hplc分析图；
21.图3为本发明实施例三中醪糟中阿斯巴甜的hplc分析图。
具体实施方式
22.下面将结合本发明实施例中的图1-3，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
23.需要说明的是，在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下。由语句“包括一个......”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
24.实施例中所用仪器设备：
25.25ml容量瓶、50ml容量瓶、电子天平(精确到0.001g)、恒温水浴超声、高效液相色谱仪；
26.实施例中所用试剂：
27.乙腈(色谱纯)、磷酸二氢钾、亚铁氰化钾、乙酸锌、冰乙酸、甲醇；
28.标准品阿斯巴甜标准溶液(浓度为1000μg/ml)，用蒸馏水逐级稀释配制成标准工作液10μg/ml，绘制标准曲线点浓度为：0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml；
29.实施例中所用高效液相色谱仪仪器条件：
30.色谱柱：c
18
柱；规格：250mm
×
4.6mm，5um；流动相：20％乙腈：80％0.01mol/l磷酸二氢钾；紫外检测器波长为200nm；柱温：35℃；进样量：20ul；流动相流速：1.0ml/min；
31.实施例一
32.准确称取约5g白酒于烧杯中，在60℃水浴超声10min无酒精气味后。将样品液体转移至25ml容量瓶中，继续向烧杯中加入5ml蒸馏水后超声5min，将液体转移至同一容量瓶中，再重复上述操作，用水定容至刻度线。对定容液体按照高效液相色谱仪仪器条件进行分析。
33.实施例二
34.准确称取约5g猕猴桃酒于烧杯中，，在60℃水浴超声10min无酒精气味后，加入10ml50％甲醇水、1g石墨化碳后摇匀，继续超声10min后，将样品液转移至25ml容量瓶中，继续向烧杯中加入50％甲醇水5ml后超声5min，将液体转移至同一容量瓶中，再重复上述操作，用水定容至刻度线。涡旋混匀后，倒入离心管中，3000r/min离心3min，取上清液按照高效液相色谱仪仪器条件进行分析。
35.实施例三
36.准确称取约5g醪糟(或米酒)于烧杯中，在60℃水浴超声10min无酒精气味后，将样品液转移至50ml容量瓶中，继续向烧杯中加入5ml蒸馏水后超声5min，将液体转移至同一容量瓶中，重复上述操作后。向容量瓶中加入1.0ml亚铁氰化钾溶液和1.0ml乙酸锌溶液后用水定容至刻度线，涡旋混匀后，倒入离心管中，3000r/min离心3min。取上清液按照高效液相色谱仪仪器条件进行分析。
37.对以上三种样品进行加标回收质量控制手段进行分析。同一实验室测得样品中阿斯巴甜的含量(μg/g)及其精密度见表1。
38.精密度：在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。
39.表1
[0040][0041]
从表1中可以看出，本发明的重复性及再现性非常好。同时，进行的加标回收率实验的回收率在93.6％～107.6％，说明本发明方法具有较高的准确度。
[0042]
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
[0043]
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。