技术特征：
1.一种非诊断目的基于还原性氧化石墨烯-羧甲基壳聚糖-氯化血红素/纳米铂@钯纳米材料rgo-cmcs-hemin/pt@pd nps的比色传感器检测gp73的方法，其特征在于，按以下步骤进行：步骤1：rgo-cmcs-hemin/pt@pd nps-gp73apt识别探针的制备（1）还原性氧化石墨烯rgo的制备称取氧化石墨烯go倒入纯水中，破碎均匀，按照1：2的体积比加入抗坏血酸aa还原，得到rgo悬浮液；（2）还原性氧化石墨烯-氯化血红素rgo-hemin的制备将氯化血红素hemin加入氨水至纯水中溶解，得到hemin溶液；在rgo溶液加入hemin溶液，搅拌反应，得到rgo-hemin悬浮液；（3）还原性氧化石墨烯-羧甲基壳聚糖-氯化血红素rgo-cmcs-hemin的制备在rgo-hemin悬浮液中加入羧甲基壳聚糖cmcs溶液，10 mmol/l 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐/n-羟基琥珀酰亚胺 edc/nhs进行活化，搅拌反应，得到rgo-cmcs-hemin溶液；（4）rgo-cmcs-hemin/pt@pd nps纳米材料制备在rgo-cmcs-hemin溶液中加入20 mm氯铂酸钠na2ptcl6、20 mm氯钯酸钠na2pdcl6和水合肼n2h4·
h2o，搅拌反应，得到 rgo-cmcs-hemin/pt@pd nps溶液；（5）rgo-cmcs-hemin/pt@pd nps
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gp73apt识别探针的制备将gp73apt溶液和rgo-cmcs-hemin/pt@pd nps溶液混合，孵育，得到rgo-cmcs-hemin/pt@pd nps
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gp73apt识别探针；步骤2：比色生物传感界面的构建（1）将未修饰的3 μmol/l gp73适配体apt ι溶液室温孵育，加入1 %牛血清白蛋白 bsa溶液封闭；（2）将5 μg/ml gp73溶液滴加到apt ι溶液中，孵育，得到apt ι/gp73溶液；（3）在apt ι/gp73溶液中滴加rgo-cmcs-hemin/pt@pd nps-gp73apt溶液，孵育，得到apt ι/gp73/rgo-cmcs-hemin/pt@pd nps-gp73apt溶液；步骤3：gp73工作曲线及标准曲线的绘制（1）在ph为4.0的含有显色体系tmb-h2o2的磷酸盐缓冲液中加入步骤2得到的溶液，进行反应，采用紫外-分光光度计的分光光度法进行测量，记录传感器在652 nm处的吸光度；（2）分别对不同浓度的gp73进行检测，记录吸光度；根据传感器的吸光度与gp73浓度的关系，绘制gp73的工作曲线及标准曲线，计算出该方法的最低检测限；步骤4：实际血清样本中gp73的检测（1）将待测实际血清样品加入步骤2得到的溶液，再加入含有显色体系tmb-h2o2的磷酸盐缓冲溶液，反应 10 min，采用紫外-分光光度计的分光光度法进行测量，记录传感器在652 nm处的吸光度；（2）根据步骤3所得到的工作曲线及标准曲线，计算待测实际样品中gp73的浓度。2.按照权利要求1所述检测gp73的方法，其特征在于：步骤1中所述edc/nhs按照体积比为4：1混合。3.按照权利要求1所述检测gp73的方法，其特征在于：步骤1中所述rgo-cmcs-hemin/
pt@pd nps溶液和apt溶液的体积比为1：3。4.按照权利要求1所述检测gp73的方法，其特征在于：步骤2中所述gp73溶液的孵育温度为25 o
c，孵育时间为40 min，所述其余溶液的孵育时间为1 h。
技术总结
基于RGO-CMCS-Hemin/Pt@Pd NPs比色传感器检测GP73的方法，将氨基化的GP73适配体通过π-π共轭及静电吸附作用与所得纳米材料结合，先形成RGO-CMCS-Hemin/Pt@Pd NPs-GP73Apt识别探针，再形成AptΙ/GP73/RGO-CMCS-Hemin/Pt@Pd NPs-GP73Apt夹心型复合结构；该复合结构催化H2O2分解为H2O和O2，进而将TMB氧化为oxTMB，使溶液由无色变为深蓝色，利用紫外-分光光度计测量652nm处的紫外吸收峰，对比吸光度的差异，从而实现GP73的检测。从而实现GP73的检测。从而实现GP73的检测。
技术研发人员：李桂银 李鑫镐 吕秋彦 李胜男 李海媚 周治德 梁晋涛
受保护的技术使用者：桂林电子科技大学
技术研发日：2022.04.21
技术公布日：2022/8/5