一种蔬菜水果中嘧霉胺残留量的测定方法与流程

1.本发明涉及农药测定方法，具体涉及一种蔬菜水果中嘧霉胺残留量的测定方法。


背景技术：

2.目前采用gb 23200.8-2016《食品安全国家标准水果和蔬菜中500种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法》对蔬菜、水果中嘧霉胺的残留量进行测定，但是气相色谱-质谱联用仪价格昂贵，同时检测过程配套的设备耗材精密度要求严格，检测成本较高，同时现有检测方法嘧霉胺最低检测限仅为0.0126mg/kg，无法满足进一步的检测需求。


技术实现要素：

3.发明目的：为了解决现有技术存在的技术问题，本发明旨在提供一种检测成本低、检测精确和高效的嘧霉胺残留量的测定方法。
4.技术方案：本发明提供一种蔬菜水果中嘧霉胺残留量的测定方法，包括以下步骤：
5.(1)制样：取蔬菜水果类样品中可食用部分粉粹，制成待测样品，密封冷冻，备用；
6.(2)提取：将试样和乙腈混合，匀浆后，用滤纸过滤至装有5-8g的氯化钠的具塞比色管中，收集滤液，密封震荡，在室温下静置，待乙腈相和水相分层；
7.(3)净化：吸取乙腈相提取液，水浴蒸发至近干，以甲醇+二氯甲烷为淋洗液，用氨基柱净化，用甲醇定容，过滤膜，待测嘧霉胺残留量；
8.(4)测定：由自动进样器分别吸取配制好的标准溶液和净化后的试样注入液相色谱仪紫外检测器中，以保留时间定性，以样品峰面积与标准峰面积比较定量；
9.(5)定性分析：比较样品溶液和标准溶液中嘧霉胺的保留时间，若样品溶液和标准溶液中嘧霉胺的保留时间相差在
±
0.02min内，即可认定为是嘧霉胺；
10.(6)定量分析：试样中嘧霉胺的含量按下式计算：
11.x-试样中农药的含量，单位为mg/kg，a-样品中峰面积，a
s-标样中峰面积，v
1-提取溶剂总体积，单位为ml，v
2-吸取出用于检测的提取溶液总体积，单位为ml，v
3-样品溶液的定容体积，单位为ml，m-试样的质量，单位为g，ρ-标准溶液中农药的质量浓度，单位为mg/kg。
12.进一步的，所述步骤(1)中冷冻温度为-20℃至-16℃。
13.进一步的，所述步骤(2)中滤膜为0.22μm的有机相溶剂膜。
14.进一步的，所述步骤(3)中甲醇+二氯甲烷体积比例为5：95。
15.进一步的，所述步骤(4)中标准溶液的配制为：称取嘧霉胺标准品，用甲醇配制成0.10mg/l的单一农药标准储备液，贮存在-18℃以下冰箱中。
16.进一步的，所述步骤(4)中液相色谱仪紫外检测器的色谱条件为：色谱柱：xdb-c18，5μm，4.6
×
150mm，流动相：b为超纯水，c为甲醇，梯度洗脱：0-6min，b％:c％为55:45；7-13min，b％:c％为25:75；14-19min，b％:c％为0:100；20-30min，b％:c％为55:45；流速：0.8ml/min，检测波长275nm。
17.发明原理：本发明中液相色谱仪紫外检测器，是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器，其工作原理是lambert-beer定律，即当一束单色光透过流动池时，若流动相不吸收光，则吸收度a与吸光组分的浓度c和流动池的光径长度l成正比的原理。紫外检测器不仅灵敏度高、噪音低、线性范围宽、有较好的选择性，而且对环境温度、流动相组成变化和流速波动不太敏感，因此可用于对光吸收小、消光系数低的物质进行微量分析。
18.有益效果：与现有技术相比，本发明具有以下显著优点：本发明通过对液相色谱仪紫外检测器中的流动相甲醇和水比例及时间的设计，能够实现最低检测限为0.006mg/kg，回收率范围为92.0％-98.0％，相对标准偏差范围为2.5％-5.6％，相对标准偏差小于10％，检测精准度高，效率高，成本低。
附图说明
19.图1为本发明实施例1嘧霉胺液相色谱峰图。
具体实施方式
20.下面，结合具体实施例和附图进一步对本发明进行说明。
21.实施例1：对黄瓜中嘧霉胺残留量进行测定，步骤如下：
22.(1)制样
23.取黄瓜样品，去掉非可食用部分后用食品调理机粉碎，制成待测样品，放入容器中，于-20℃至-16℃条件下密封保存，备用；
24.(2)提取
25.准确称取20.0g黄瓜试样于250ml三角瓶中，加入40ml乙腈，在匀浆机中高速匀浆2min后，用滤纸过滤，滤液收集到装有8g氯化钠的100ml具塞比色管中，收集滤液30ml，盖上盖子，剧烈震荡1min，在室温下静置20min，使乙腈相和水相分层；
26.(3)净化
27.用移液管吸取10ml提取液于100ml烧杯中，水浴蒸发至近干，以甲醇+二氯甲烷(5：95)为淋洗液用氨基柱净化，用甲醇定容至2.5ml，过滤膜，待测嘧霉胺残留；
28.(4)测定：吸取20μl0.10mg/l标准溶液和净化后的试样注入液相色谱仪紫外检测器中，以保留时间定性，以样品峰面积与标准峰面积比较定量，色谱柱：xdb-c18，5μm，4.6
×
150mm，流动相：b为超纯水，c为甲醇，梯度洗脱：0-6min，b％:c％为55:45；7-13min，b％:c％为25:75；14-19min，b％:c％为0:100；20-30min，b％:c％为55:45；流速：0.8ml/min，检测波长275nm；
29.(5)定性分析：比较样品溶液和标准溶液中嘧霉胺的保留时间，若样品溶液和标准溶液中嘧霉胺的保留时间相差在
±
0.02min内，即可认定为是嘧霉胺；
30.(6)定量分析：试样中嘧霉胺的含量按下式计算：
[0031][0032]
x-试样中农药的含量，单位为mg/kg，a-样品中峰面积，a
s-标样中峰面积，v
1-提取溶剂总体积，单位为ml，v
2-吸取出用于检测的提取溶液总体积，单位为ml，v
3-样品溶液的定容体积，单位为ml，m-试样的质量，单位为g，ρ-标准溶液中农药的质量浓度，单位为mg/kg。
[0033]
(7)结果统计
[0034][0035]
(8)结果分析
[0036]
本技术发明的精密度用平行试验的相对标准偏差表示，准确度用添加回收回收率表示。实验中添加了0.006mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg四个浓度水平的嘧霉胺标样，回收率范围为93.0％-96.0％，相对标准偏差范围为2.7％-4.9％，表明本发明的准确度和精密度良好，能够满足不同嘧霉胺残留量的测定要求。
[0037]
实施例2：对梨中嘧霉胺残留量进行测定：
[0038]
(1)制样
[0039]
取梨样品，去掉非可食用部分后用食品调理机粉碎，制成待测样品，放入容器中，于-20℃至-16℃条件下保存，备用；
[0040]
(2)提取
[0041]
准确称取20.0g梨试样于250ml三角瓶中加入40ml乙腈，在匀浆机中高速匀浆1.5min后用滤纸过滤，滤液收集到装有5g氯化钠的100ml具塞比色管中，收集滤液20ml，盖上盖子，剧烈震荡1min，在室温下静置15min，使乙腈相和水相分层；
[0042]
(3)净化
[0043]
用移液管吸取10ml提取液于100ml烧杯中，水浴蒸发至近干，以甲醇+二氯甲烷(5：95)为淋洗液用氨基柱净化，用甲醇定容至2.5ml，过滤膜，待测嘧霉胺残留；
[0044]
(4)测定：吸取20μl0.10mg/l标准溶液和净化后的试样注入液相色谱仪紫外检测器中，以保留时间定性，以样品峰面积与标准峰面积比较定量，色谱柱：xdb-c18，5μm，4.6
×
150mm，流动相：b为超纯水，c为甲醇，梯度洗脱：0-6min，b％:c％为55:45；7-13min，b％:c％为25:75；14-19min，b％:c％为0:100；20-30min，b％:c％为55:45；流速：0.8ml/min，检测波长275nm。；
[0045]
(5)定性分析：比较样品溶液和标准溶液中嘧霉胺的保留时间，若样品溶液和标准溶液中嘧霉胺的保留时间相差在
±
0.02min内，即可认定为是嘧霉胺；
[0046]
(6)定量分析：试样中嘧霉胺的含量按下式计算：
[0047][0048]
x-试样中农药的含量，单位为mg/kg，a-样品中峰面积，a
s-标样中峰面积，v
1-提取溶剂总体积，单位为ml，v
2-吸取出用于检测的提取溶液总体积，单位为ml，v
3-样品溶液的定容体积，单位为ml，m-试样的质量，单位为g，ρ-标准溶液中农药的质量浓度，单位为mg/kg。
[0049]
(7)结果统计
[0050][0051]
(8)结果分析
[0052]
本技术发明的精密度用平行试验的相对标准偏差表示，准确度用添加回收回收率表示。实验中添加了0.006mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg四个浓度水平的嘧霉胺标样，回收率范围为92.0％-98.0％，相对标准偏差范围为2.5％-5.6％，表明本发明的准确度和精密度良好，能够满足不同嘧霉胺残留量的测定要求。
[0053]
对比例1：与实施例1的不同之处在于，色谱条件为：色谱柱：xdb-c18，5μm，4.6
×
150mm，流动相：b为超纯水，c为甲醇，梯度洗脱：0-5min，b％:c％为40:60；6-11min，b％:c％为50:50；12-19min，b％:c％为20:80；20-30min，b％:c％为40:60；流速：1ml/min，检测波长275nm。
[0054]
由于流动相比例不同，流速为1ml/min，流速过快，出峰时间快，样品峰和杂质峰会有重叠，没有很好的分离，造成出峰分离效果不好、峰型不成正态分布并有拖尾等问题，影响定量分析结果。