1.本发明涉及靶点药物分析技术领域，具体为一种新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法。
背景技术：
2.在lag3类药物抗药性抗体检测过程中，面临的1个主要挑战就是靶点分子(lag3)的干扰，尽管给药前lag3浓度不会显著影响ada检测，但给药后，一方面由于药物迅速和血液中可溶性的lag3结合，导致血液中游离的lag3水平迅速降低，进而引发内在负反馈机制导致lag3分泌增多；另一方面lag3与药物结合导致清除显著减慢，从而导致总的lag3水平显著升高，在ada检测过程中需要采用酸解等方式将ada-药物复合物解离开，形成游离的ada以便于检测，但该过程的同时也会释放药物结合的lag3分子，造成样品中的游离的lag3水平显著升高，lag3往往是以聚体的形式存在，可以直接与捕获试剂和检测试剂桥连而出现假阳性信号。
3.目前针对lag3靶点抗体药物还没有解决方法，该类项目的免疫原性结果表现出较高的假阳性率，严重影响人们对现有结果的解读，无法为安全性及有效性评价提供数据支持，故而提出一种新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法来解决上述问题。
技术实现要素：
4.(一)解决的技术问题
5.针对现有技术的不足，本发明提供了一种新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法，具备获得免疫原性数据准确等优点，解决了无法提供安全且有效的数据支持的问题。
6.(二)技术方案
7.本发明提供一种新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法，包括以下步骤：
8.1)样品初步处理：将样品用酸解液或竞争抑制确认试剂以1:100倍来对样品进行酸处理后，然后将处理后的样品在室温下振荡孵育20-40min得酸处理样品；
9.2)样品温育处理：首先在抗菌板中加入master mix工作液90l/孔；其次在抗菌板中加入中和试剂20l/孔；然后在抗菌板中按照板图中样品顺序，单孔加入酸处理后的样品50l/孔；最后封板在室温的环境下避光以540-640rpm的速率振荡温育2.0-2.5hr；
10.3)样品封闭处理：将封闭液加入msd微孔板中150l/孔，封板后室温避光振荡封闭30-40min，并采用洗板液进行洗板；
11.4)样品加样处理：将抗菌板中样品按照板图转入msd微孔板中50l/孔，封板后在室温避光的环境下以500-620rpm的速率振荡温育1.0-1.5hr，并采用洗板液进行洗板；
12.5)样品检测处理：将msd read buffert(2x)工作液加入msd微孔板中150μl/孔，15min内将msd微孔板放入meso quickplex sq120中进行检测；
13.6)样品试验处理：将经灌胃或静脉注射的方式给予健康受试动物由步骤7)中所制
备的溶液；
14.7)数据储存、分析：根据sop-0447与sop-0467储存原始数据，并打印；根据分析规程对原始数据进行分析并按照sop-0447进行储存并打印。
15.优选的，所述步骤3)与步骤4)中的洗板液洗板液以300-400μl/孔，且洗板液可为碳氢清洗剂、半水系环保清洗剂或酒精中的一种，所述步骤1)中振荡速率为550-650rpm。
16.优选的，所述步骤2)与步骤4)中的抗菌板可为圆孔聚丙烯板、圆孔聚苯乙烯板和圆孔培养板中的一种。
17.优选的，所述步骤3)与步骤4)洗板次数为3-5次。
18.优选的，所述步骤6)中给予健康受试动物可为质量为200-210g的雄性老鼠，在进行灌胃或静脉注射前，对其进行10-15天培养，培育条件为室温即可。
19.(三)有益效果
20.与现有技术相比，本发明提供了一种新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法，具备以下有益效果：
21.该新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法，本技术建立了一种准确可靠的检测抗lag3靶点单抗免疫原性的方法，该方法可以很好地解决内源性lag3干扰对抗lag3靶点单抗免疫原性检测的影响，从而准确获得免疫原性的数据。
具体实施方式
22.下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
23.实施例一：
24.一种新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法，包括以下步骤：
25.1)样品初步处理：将样品用酸解液或竞争抑制确认试剂以1:100倍来对样品进行酸处理后，然后将处理后的样品在室温下振荡孵育20min得酸处理样品，振荡速率为550rpm；
26.2)样品温育处理：首先在抗菌板中加入master mix工作液90l/孔；其次在抗菌板中加入中和试剂20l/孔；然后在抗菌板中按照板图中样品顺序，单孔加入酸处理后的样品50l/孔；最后封板在室温的环境下避光以540rpm的速率振荡温育2.0hr，抗菌板可为圆孔聚丙烯板、圆孔聚苯乙烯板和圆孔培养板中的一种；
27.3)样品封闭处理：将封闭液加入msd微孔板中150l/孔，封板后室温避光振荡封闭30min，并采用洗板液进行洗板；
28.4)样品加样处理：将抗菌板中样品按照板图转入msd微孔板中50l/孔，封板后在室温避光的环境下以500rpm的速率振荡温育1.0hr，并采用洗板液进行洗板，洗板液洗板液以300μl/孔，洗板液可为碳氢清洗剂、半水系环保清洗剂或酒精中的一种，洗板次数为3次；
29.5)样品检测处理：将msd read buffert(2x)工作液加入msd微孔板中150μl/孔，15min内将msd微孔板放入meso quickplex sq120中进行检测；
30.6)样品试验处理：将经灌胃或静脉注射的方式给予健康受试动物由步骤7)中所制
备的溶液，给予健康受试动物可为质量为200g的雄性老鼠，在进行灌胃或静脉注射前，对其进行10天培养，培育条件为室温即可；
31.7)数据储存、分析：根据sop-0447与sop-0467储存原始数据，并打印；根据分析规程对原始数据进行分析并按照sop-0447进行储存并打印。
32.实施例二：
33.一种新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法，包括以下步骤：
34.1)样品初步处理：将样品用酸解液或竞争抑制确认试剂以1:100倍来对样品进行酸处理后，然后将处理后的样品在室温下振荡孵育30min得酸处理样品，振荡速率为600rpm；
35.2)样品温育：首先在抗菌板中加入master mix工作液90l/孔；其次在抗菌板中加入中和试剂20l/孔；然后在抗菌板中按照板图中样品顺序，单孔加入酸处理后的样品50l/孔；最后封板在室温的环境下避光以590rpm的速率振荡温育2.3hr，抗菌板可为圆孔聚丙烯板、圆孔聚苯乙烯板和圆孔培养板中的一种；
36.3)封闭：将封闭液加入msd微孔板中150l/孔，封板后室温避光振荡封闭35min，并采用洗板液进行洗板；
37.4)样品加样处理：将抗菌板中样品按照板图转入msd微孔板中50l/孔，封板后在室温避光的环境下以560rpm的速率振荡温育1.3hr，并采用洗板液进行洗板，洗板液洗板液以350μl/孔，洗板液可为碳氢清洗剂、半水系环保清洗剂或酒精中的一种，洗板次数为4次；
38.5)样品检测处理：将msd read buffert(2x)工作液加入msd微孔板中150μl/孔，15min内将msd微孔板放入meso quickplex sq120中进行检测；
39.6)样品试验处理：将经灌胃或静脉注射的方式给予健康受试动物由步骤7)中所制备的溶液，给予健康受试动物可为质量为205g的雄性老鼠，在进行灌胃或静脉注射前，对其进行13天培养，培育条件为室温即可；
40.7)数据储存、分析：根据sop-0447与sop-0467储存原始数据，并打印；根据分析规程对原始数据进行分析并按照sop-0447进行储存并打印。
41.实施例三：
42.一种新型检测lag3靶点药物抗药性抗体的分析方法，包括以下步骤：
43.1)样品初步处理：将样品用酸解液或竞争抑制确认试剂以1:100倍来对样品进行酸处理后，然后将处理后的样品在室温下振荡孵育40min得酸处理样品，振荡速率为650rpm；
44.2)样品温育：首先在抗菌板中加入master mix工作液90l/孔；其次在抗菌板中加入中和试剂20l/孔；然后在抗菌板中按照板图中样品顺序，单孔加入酸处理后的样品50l/孔；最后封板在室温的环境下避光以640rpm的速率振荡温育2.5hr，抗菌板可为圆孔聚丙烯板、圆孔聚苯乙烯板和圆孔培养板中的一种；
45.3)封闭：将封闭液加入msd微孔板中150l/孔，封板后室温避光振荡封闭40min，并采用洗板液进行洗板；
46.4)加样：将抗菌板中样品按照板图转入msd微孔板中50l/孔，封板后在室温避光的环境下以620rpm的速率振荡温育1.5hr，并采用洗板液进行洗板，洗板液洗板液以400μl/孔，洗板液可为碳氢清洗剂、半水系环保清洗剂或酒精中的一种，洗板次数为5次；
47.5)检测：将msd read buffert(2x)工作液加入msd微孔板中150μl/孔，15min内将msd微孔板放入meso quickplex sq120中进行检测；
48.6)试验：将经灌胃或静脉注射的方式给予健康受试动物由步骤7)中所制备的溶液，给予健康受试动物可为质量为210g的雄性老鼠，在进行灌胃或静脉注射前，对其进行15天培养，培育条件为室温即可；
49.7)数据储存、分析：根据sop-0447与sop-0467储存原始数据，并打印；根据分析规程对原始数据进行分析并按照sop-0447进行储存并打印。
50.本发明的有益效果是：将酸处理后的试剂工作液、检测试剂工作液和中和试剂加入到抗菌板中，然后再加入处理后的待测样品或验证样品或系统适用性样品干该板中，避光振荡充分反应后将样品混合液转入到已封闭的msd streptavidin gold plate中，避光室温振荡温育，将msd sapl ate加入msd read buffer t(2x)，于meso quickplex so120读取仪器信号，仪器信号值的大小与抗体浓度成正比，阳性质控样品用100％正常健康人血清配制。
51.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。