技术特征：
1.一种基于铜铁双金属有机框架纳米酶的无标记电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤第一步，制备纺锤形铜铁双金属有机框架纳米酶的微粒：将2-氨基对苯二甲酸溶解于n,n-二甲基甲酰胺中，然后分别逐滴添加naoh、 cucl2.2h2o和fecl3.6h2o，搅拌均匀得到混合液，将混合液转入聚四氟乙烯内衬的反应釜中，然后将反应釜置于恒温鼓风干燥箱中于90～110 ℃、反应为16～20 h；然后待高压反应釜自然冷却至室温，分离反应后的沉淀物并先后用蒸馏水和n,n-二甲基甲酰胺各洗涤3次，最后于80～90℃条件下真空干燥10～12 h，得深褐色粉末即为纺锤形铜铁双金属有机框架纳米酶的微粒，粒径为500-600 nm；第二步，用第一步制备得到的纺锤形铜铁双金属有机框架纳米酶的微粒，修饰玻碳电极界面固定抗体分子，制备得到无标记电化学免疫传感器。2. 根据权利要求1所述的基于铜铁双金属有机框架纳米酶的无标记电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，第一步中，2-氨基对苯二甲酸溶解于n,n-二甲基甲酰胺的浓度为：0.1～0.2mol/l， 2-氨基对苯二甲酸、cucl2.2h2o和fecl3.6h2o物质的量的比为：1：1：1，所述naoh的浓度为4mol/l，加入量为混合液体积的4～5%。3.根据权利要求1所述的基于铜铁双金属有机框架纳米酶的无标记电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，第二步的具体包括以下步骤： (1)将纺锤形铜铁双金属有机框架纳米酶超声分散于二次去离子水中，形成分散均匀的悬浮液，再将悬浮液与壳聚糖溶液等体积混合并超声分散均匀；再将上述混合溶液与链霉亲和素溶液等体积混合均匀，得到链霉素生物功能化的纺锤形铜铁双金属有机框架纳米酶混合液；(2)将玻碳电极先用氧化铝粉抛光，用二次去离子水冲洗掉残留的氧化铝粉后，然后依次用乙醇和二次蒸馏水超声清洗玻碳电极，最后在氮气下吹干；(3)取步骤(1)中制得的链霉素生物功能化的纺锤形铜铁双金属有机框架纳米酶的混合溶液滴涂于步骤(2)中所得洁净的玻碳电极表面，并于低温冷藏的环境下晾干；(4)将步骤(3)所修饰后的玻碳电极表面滴涂生物素化的抗体，室温下反应后，用磷酸盐缓冲溶液冲洗；(5)将牛血清蛋白溶液滴涂于步骤(4)中所得到的玻碳电极表面，在室温下封闭后，用磷酸盐缓冲溶液冲洗，得到该无标记电化学免疫传感器。4. 根据权利要求3所述的基于铜铁双金属有机框架纳米酶的无标记电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，纺锤形铜铁双金属有机框架纳米酶的悬浮液的分散浓度为1～2.0 mg/ml，壳聚糖溶液的浓度为0.5～1.0wt％，链霉亲和素的浓度为200～300μg/ml；纺锤形铜铁双金属有机框架纳米酶的悬浮液、壳聚糖溶液和链霉亲和素的混合体积比为1：1：1；步骤 (2)中，所述的氧化铝粉粒径为0.5 μm。5. 根据权利要求3所述的基于铜铁双金属有机框架纳米酶的无标记电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述冷藏低温为0～4℃；步骤(4)中，所述生物素化的抗体浓度为100～200 μg/ml。6.根据权利要求3所述的基于铜铁双金属有机框架纳米酶的无标记电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述牛血清蛋白溶液浓度为1.0～2.0wt％。7.一种基于铜铁双金属有机框架纳米酶的无标记电化学免疫分析方法，其特征在于，
包括如下分析步骤：a.将权利要求1～6任一项制备的所述锤形铜铁双金属有机框架纳米酶的无标记电化学免疫传感器，在igg抗原温育液中温育，然后用磷酸盐缓冲溶液冲洗；b.以步骤a中抗原温育后的无标记电化学免疫传感器为工作电极，饱和甘汞电极作为辅助电极，铂片电极作为对电极，在邻苯二胺测试液中，用差示脉冲伏安法检测电化学信号，分别输出各不同已知浓度的抗原电流信号曲线；c. 以各已知抗原的浓度值为纵作标，以步骤b中输出的各已经浓度对应的电流信号曲线的峰值为横作标，描点拟合抗原免疫检测标准曲线；d．按步骤a和步骤b的过程，进行未知抗原浓度的电化学免疫分析，输出电流信号曲线，以本步中的电流信号曲线的电源峰值为纵作标，描点步骤c中的抗原免疫检测标准曲线，确定未知抗原的浓度。8.根据权利要求7所述的无标记电化学免疫分析方法，其特征在于，步骤a中，温育时间为30～40min。9.根据权利要求7所述的无标记电化学免疫分析方法，其特征在于，步骤b中，邻苯二胺测试液由20.0 mm邻苯二胺和6.0 mm 过氧化氢混合液组成，溶液的ph为7.0，溶液体积为10～20ml。
技术总结
本发明涉及一种基于铜铁双金属有机框架纳米酶的无标记电化学免疫传感器的制备方法及免疫分析方法，首先合成纺锤形铜铁双金属有机框架纳米酶，然后再用其修饰玻碳电极界面固定抗体分子，制备得到无标记电化学免疫传感器。该铜铁双金属有机框架纳米酶具有大的比表面积，借助于链霉亲和素对生物素化的抗体较高的选择性，使抗体能够有效的固定于铜铁双金属有机框架的表面。该传感器，在邻苯二胺溶液体系中，可催化邻苯二胺氧化，产生强的电化学信号，使抗原-抗体特异性反应形成的免疫复合物抑制了铜铁双金属有机框架纳米酶催化，而引起电化学信号强度降低。利用降低信号和抗原浓度线性关系，可快速实现对IgG的无标记高灵敏度的检测。的检测。的检测。
技术研发人员：杨占军 曹佳雯 李娟
受保护的技术使用者：扬州大学
技术研发日：2022.05.19
技术公布日：2022/8/30