一种基质金属蛋白酶-3胶乳检测试剂盒及其制备方法与流程

1.本发明属于体外诊断试剂盒技术领域，具体涉及一种基质金属蛋白酶
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3胶乳检测试剂盒及其制备方法。


背景技术：

2.基质金属蛋白酶(mmp)是一个由超过25种锌依赖性酶组成的家族，主要参与细胞迁移、组织重塑、癌症侵袭和转移。除了降解细胞外基质蛋白外，mmps对于生长因子和细胞因子的释放和激活也很重要。同时，它们可以通过蛋白质降解使炎症介质和酶本身失活。mmps根据功能和底物不同分为以下几类：(1)明胶酶类：包括mmp-2、mmp-9；(2)胶原蛋白酶类：mmp-1、mmp-8和mmp-13；(3)基质降解酶类：mmp-3、 mmp-10、mmp-11和mmp-7。其中mmp-3作用底物广泛，表达细胞众多，是mmps家族中的重要成员。mmp-3基因是定位于染色体11q22.3 的mmp基因簇的一部分，分子量是53977da。mmp-3由477个氨基酸组成，分成5个结构域，其中包括一个可降解的疏水信号肽区域、一个在激活时被剪切修饰的前肽区域、一个包含锌离子结合位点的催化活性区、一个富含脯氨酸的铰链区和一个血液结合素区域。mmp-3酶原在丝氨酸蛋白酶，胰蛋白酶的作用下去除前肽区域，形成了激活的mmp-3。
3.类风湿关节炎(ra)病理发展过程需要多种细胞的参与，包括软骨细胞、t细胞、成纤维样滑膜细胞以及巨噬细胞。其中成纤维样滑膜细胞扮演了关键的角色。成纤维样滑膜细胞可以释放mmp-3到滑膜液中，而mmp-3属于基质降解酶类可以降解聚蛋白多糖、胶原蛋白ii、胶原蛋白 ix、胶原蛋白x、以及其它组成关节的蛋白质。通过分析ra病人的滑膜液中蛋白多糖降解产物发现，其核心蛋白靶点对mmp-高度敏感。同时， mmp-3还可以激活其它的mmps酶原，如mmp-1酶原、mmp-8酶原、 mmp-9酶原和mmp-13酶原，形成放大的瀑布式效应。因此mmp-3被视为一个ra病理进展的重要中介分子。
4.在ra早期，大量的成纤维样滑膜细胞和软骨细胞一同合成并释放 mmp-3进入滑膜液和血液中。有研究表明ra患者滑膜液中mmp-3的浓度比骨关节炎患者和正常人都显著升高，同时ra患者血液中mmp-3的浓度比骨关节炎患者和正常人也要高。因此，mmp-3可作为ra早期病情活跃度监控指标，可以提供更加准确的疾病分期；减少患者影像学检查的次数；可以反映药物治疗的疗效，给医生提供更加准确的病情进展信息；动态监控mmp-3水平，可有效预测患者疾病进展。mmp-3研究及应用非常广泛，日本已经将mmp-3作为早期ra的常规筛查项目。
5.目前市场上对于类风湿炎症检测指标主要有c反应蛋白(c reactiveprotein，crp)，环化瓜氨酸多肽(cyclic citrulline polypeptide，ccp)，类风湿因子(rheumatoid factor，rf)和抗突变型瓜氨酸波形蛋白 (anti-mutant citrulline vimentin，mcv)。相对于这些标志物来说，mmp-3 表现出更敏感的反应。当下mmp-3常用的测定方法是酶联免疫法和免疫胶乳比浊法。酶联免疫法特异性和灵敏度低，而且操作繁琐和检测时间长。而胶乳免疫比浊法的特异性和灵敏度大大提高，备受市场的关注。为了获得较高的灵敏度和宽的线性范围，多数厂家采用单抗和大粒径的胶乳粒子 (大于200nm)，大粒径的胶乳粒子会增加
胶乳的重力作用导致试剂容易聚集和沉降，使试剂的测试稳定性很差。另一方面，该试剂会存在很大的类风湿因子的干扰，导致测试结果的不准确。目前市场上该项目的稳定性和抗类风湿因子干扰普遍存在问题。
6.因此，研发出一种检测范围宽、灵敏度高、稳定性好和抗类风湿因子干扰的基质金属蛋白酶-3胶乳检测试剂盒用于临床检测至关重要。


技术实现要素：

7.本发明的针对上述现有技术中基质金属蛋白酶-3胶乳检测试剂盒存在的不足，本发明提供了一种稳定的基质金属蛋白酶-3胶乳检测试剂盒。
8.为解决上述技术问题，本发明提供以下技术方案：
9.一种基质金属蛋白酶-3胶乳检测试剂盒，其特征在于，由以下原料组成：为待测目标抗原或抗体提供稳定的且抗类风湿因子干扰的生化环境的反应液1、反应液2和基质金属蛋白酶-3校准品；
10.所述反应液1包括以下成分：将95～100g缓冲液、0.9～1.8g电解质、 0.5～1g助敏剂、0.1～0.5g稳定剂、0.2～0.8g抗干扰剂和0.2～0.4g抗菌剂；
11.所述反应液2为10～20ml含有表面偶联基质金属蛋白酶-3单克隆抗体的胶乳微球的储存液，所述基质金属蛋白酶-3单克隆抗体为羊单抗和/或兔单抗；所述乳胶微球在所述储存液中的质量分数为0.1％～2％；优选地，所述反应液2为粒径为60～100nm表面偶联羊单抗的胶乳微球和粒径为 150～200nm的表面偶联兔单抗的胶乳微球的混合储存液，每种所述乳胶微球在所述储存液中的质量分数为0.05％～1％；
12.所述基质金属蛋白酶-3校准品由以下成分制备而成：95～100g缓冲液、 0.9～1.8g电解质、0.1～0.5g表面活性剂、0.1～0.5g稳定剂和0.2～0.4g抗菌剂；混合后，再加入10～30μl基质金属蛋白酶-3，以500～1000rpm的转速搅拌10～30min，得到校准品；
13.所述储存液由包括以下成分组成：95～100g浓度为50～100mmol/l且 ph值为7.0～7.5的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(hepes)缓冲液、0.9～1.8g氯化钠、0.1～0.5g吐温20、0.1～0.5g稳定剂、0.2～0.4g抗菌剂和0.1～0.3g 甜菜碱；
14.所述缓冲液为浓度为50～100mmol/l且ph值为7.0～7.5的三羟甲基氨基甲烷(tris)缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(hepes)缓冲液、2
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(n-吗啉代)乙磺酸(mes)缓冲液、3-吗啉-2-羟基丙磺酸(mopso)缓冲液中的至少一种；所述助敏剂为聚乙二醇6000、聚乙二醇35000、葡聚糖中的至少一种；所述电解质为氯化钠、氯化镁、氯化钙中的至少一种；所述表面活性剂为吐温-20、乙二胺四乙酸.2钠(edta.2na)中的至少一种；
15.所述抗干扰剂为六巯基己醇、氨基酸、牛血清白蛋白中的至少一种，优选为六巯基己醇，可以封锁类风湿因子的活性位点，避免血清样本中的类风湿因子与mmp-3抗体发生反应，提高了试剂盒抗rf干扰的性能；
16.所述稳定剂为离子液体、曲拉通-100中的至少一种，优选为离子液体；所述离子液体为四甲基胍盐酸盐、1-癸基-3-甲基咪唑氯盐、1-乙基-3
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甲基咪唑三氟甲烷磺酸盐、三丁基甲基铵氯盐中的一种或两种以上；更优选为1-癸基-3-甲基咪唑氯盐；
17.所述抗菌剂为叠氮化钠、聚多巴胺修饰核壳结构zno金属有机骨架纳米粒子中的至少一种，优选zno@pda@zif-7复合纳米粒子；
18.所述反应液1由包括以下步骤制备而成：将95～100g三羟甲基氨基甲烷(tris)缓冲液、0.9～1.8g电解质、0.1～0.5g稳定剂、0.2～0.8g抗干扰剂和0.2～0.4g抗菌剂，将上述成分混合，以800～2000rpm的转速搅拌20～ 40min即可得到反应液1。
19.所述反应液2由包括以下步骤制备而成：将胶乳微球加入缓冲液中并搅拌，先加入活化剂，再加入基质金属蛋白酶-3单克隆抗体，继续搅拌反应，然后再加入封闭剂搅拌至反应结束，分离得到抗体-胶乳微球复合物，再加入储存液；将粒径为60～100nm的抗体-胶乳微球和粒径为150～ 200nm的抗体-胶乳微球按质量比1：(0.8～1.2)混合均匀后静置，得到反应液2。
20.更具体地，所述反应液2由以下步骤制备而成：
21.(1)抗体-胶乳微球的制备：将0.5～1ml粒径为60～100nm的胶乳微球加入5～10ml缓冲液中，以200～1000rpm的转速搅拌5～15min后，加入适量的活化剂搅拌10～30min，活化胶乳微球表面的羧基基团；再加入 0.1～1mg的基质金属蛋白酶-3单克隆抗体，继续搅拌反应1～3h；接着加入10～50ul的封闭剂，继续搅拌反应0.5～1h；然后采用切向流过滤分离，再加入10～20ml储存液，得到粒径为60～100nm的抗体-胶乳微球储存液；同样方法得到粒径为150～200nm的抗体-胶乳微球储存液；
22.(2)反应液2的制备：将粒径为60～100nm的抗体-胶乳微球储存液和粒径为150～200nm的抗体-胶乳微球储存液混合，静置12～48h，得到反应液2。
23.所述活化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液；所述封闭剂为ce510封闭剂、db1130封闭剂中的至少一种；所述基质金属蛋白酶-3单克隆抗体为羊单抗和/或兔单抗；优选地，粒径为60～100nm的胶乳微球偶联羊单抗，粒径为150～200nm的胶乳微球偶联兔单抗。
24.本发明抗体-胶乳微球的制备步骤主要可分为：胶乳微球反应位点的活化，抗体与胶乳微球的偶联，胶乳微球未反应的活性位点的封闭，未反应的物质与抗体-微球复合物的分离以及抗体-微球复合物的恢复。
25.本发明反应液1是一种稀释液，为待检测的目标抗原或抗体提供一种稳定的和抗类风湿因子干扰的生化环境，使目标抗原或抗体保持天然构象，控制反应达到终点的时间和速率。所述反应液2是一种含有基质金属蛋白酶-3的单克隆抗体包被胶乳微球的均一的乳白色液体，能够与一定浓度的目标抗原进行特异性反应，使体系溶液浑浊变大；胶乳微球的大小会影响检测的灵敏度和线性范围，一般大于150nm的胶乳微球能够提供较好的灵敏度，60～150nm的胶乳微球能够提供较宽的线性范围。胶乳微球的表面带有适量的羧基，能够与带有氨基的抗体进行酰胺反应进行化学偶联。所述基质金属蛋白酶-3校准品是一种用来与样本比较进行计算的抗原，含有一定浓度的天然基质金属蛋白酶-3抗原和抗原稀释液，能够保持基质金属蛋白酶-3的天然构象，为抗原抗体提供稳定的反应环境。
26.本发明采用粒径80nm的胶乳微球a与具有较宽线性范围的羊单抗偶联与粒径为150nm的胶乳微球b与具有较高灵敏度的兔单抗偶联，在胶乳微球本身特性的基础上结合抗体的自身特性，进一步为本发明试剂盒提供了较宽的线性范围以及较高的检测灵敏度。本发明采用离子液体作为稳定剂，由于离子液体具有独特的物理、化学和生物学特性，例如，稳定性高、挥发性小、溶解性好、电导率高和两亲性好等特点，与现有技术相比，本发明试剂盒不仅绿色环保，而且稳定性更高，长时间放置依然能够保持较高的精密度。
27.优选地，本发明所述zno@pda@zif-7复合纳米粒子，制备方法如下：
28.(1)将0.1～0.5g的zif-7纳米粒子分散在5～12g甲醇溶液中，然后加入0.1～0.5g份盐酸多巴胺，形成混合液，再将混合液在60～75℃水浴中，以800～1500rpm的转速搅拌反应8～12h，结束后离心，乙醇洗涤三次，80℃干燥15～30h，得到pda@zif-7纳米粒子；
29.(2)将0.9～1.8g所述pda@zif-7纳米粒子分散在8～14g甲醇中，然后加入12～20g 10mmol/l硝酸锌甲醇溶液，以1000～1500rpm的转速搅拌30～60min后，加入0.9～1.8g0.01mol/l氢氧化钠甲醇溶液，继续反应 30～50min，结束后离心，甲醇洗涤三次，60℃干燥20～30h，得到 zno@pda@zif-7复合纳米粒子。
30.进一步地，所述zif-7纳米粒子的制备方法为：将0.5～1.5g苯并咪唑和1.5～3.0g硝酸锌加入到8.0～12.0g n,n-二甲基甲酰胺中，以500～ 1000rpm的转速搅拌反应12～36h，结束后离心，用甲醇洗涤三次，80℃干燥15～30h，得到zif-7纳米粒子。
31.金属有机骨架zif-7具有良好的生物相容性、合成简单、负载量大、易修饰等优点而成为最具有代表性的一种材料。其中，zif-7中的苯并咪唑具有一定的抗菌活性，可以作为抗炎、抗菌和抗真菌的材料。盐酸多巴胺 (hda)是贻贝粘附蛋白的一种结构模型，具有较高的生物相容性以及较强的表面粘附性。hda具有丰富的邻苯二酚和氨基官能团，在碱性条件下发生自聚，形成可以依附于各种各样材料的聚多巴胺(pda)壳层。zno 纳米粒子具有良好的生物相容性、高的广谱抗菌活性以及在极端条件下的具有长期稳定性。
32.本发明将生物相容性好且具有抗菌活性的zif-7和zno通过粘附性强的多巴胺连接，制备zno@pda@zif-7复合纳米粒子，将其作为抗菌剂，不仅抑菌性能优异，而且生物相容性好，进一步提高了试剂盒的长期稳定性。
33.本发明的发明构思是：采用胶乳增强免疫比浊法定量检测基质金属蛋白酶-3，其检测原理是利用酰胺反应将抗体与胶乳微球偶联，形成抗体-微球复合物；当被测样本中含有一定浓度的基质金属蛋白酶-3时，基质金属蛋白酶-3抗原就会与试剂中的抗体-微球复合物形成更大的抗原-抗体-微球复合物；在一定浓度的电解质下，抗原-抗体-微球复合物会与临近的抗体
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胶乳颗粒通过寡核苷酸之间的静电吸引力交织成网状结构，能够引起反应体系浊度的显著变化；当保持反应体系中抗体过量时，反应后体系浊度的变化与基质金属蛋白酶-3的量成正比关系，根据基质金属蛋白酶-3校准曲线即可进行定量分析。
34.本发明具有以下有益效果：
35.(1)本发明采用切向流离心技术，降低了生产成本，提高了试剂生产的效率，有效降低了不同批次反应液在离心吹打过程中带来的差异性，大大降低了试剂的批间差。(2)本发明使用离子液体作为稳定剂，不仅绿色环保无污染，而且稳定性更高。(3)如果采用zno@pda@zif-7复合纳米粒子作为抗菌剂，不仅抑菌性能优异，而且生物相容性好，可以进一步提高了试剂盒的长期稳定性。本发明制备的试剂盒具有较强的特异性，宽的线性范围，较高的灵敏度、高rf抗干扰性能和长期稳定性，适用于生化仪器的分析检测。
具体实施方式
36.下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。本技术领域的一般技术人员应当认识到本实施例仅是用来说明本发明，而并非用作对本发明的限定，只要在本发明的实施范围内对实施例进行变换、变型都可在本发明权利要求的范围内。
37.本实施的原料全部为市售产品。
38.粒径80nm的胶乳微球a，日本jsr公司；粒径150nm的胶乳微球b，日本jsr公司。(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，cas号：7084-11-9，欣诺达生物科技有限公司。甜菜碱，货号：16，陕西晨明生物科技有限公司。1-癸基-3-甲基咪唑氯盐，中科院兰州化物所。
39.实施例1
40.一种基质金属蛋白酶-3胶乳检测试剂盒，由以下原料组成：反应液1、反应液2和校准品：
41.反应液1由以下步骤制备而成：将100g浓度为100mmol/l且ph＝7.4 的tris缓冲液、0.9g氯化钠、0.5g聚乙二醇6000、0.3g稳定剂和0.3g抗菌剂混合，以1000rpm的转速搅拌30min，得到反应液1。
42.反应液2由以下步骤制备而成：(1)抗体-胶乳微球的制备：将0.5ml 粒径80nm的胶乳微球a加入5g浓度为100mmol/l且ph＝7.4的tris缓冲液中，以500rpm的转速搅拌10min后，加入50ul浓度为10mg/l的1-(3
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二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液搅拌反应15min,然后加入 0.5mg羊单抗，继续搅拌反应2h，然后再加入30ul的ce510封闭剂，继续搅拌反应30min,结束后使用切向流过滤进行分离，然后加入10ml储存液，得到羊抗体-胶乳微球a；重复同样的步骤得到羊抗体-胶乳微球b(粒径150nm)；(2)反应液2的制备：将10ml羊抗体-胶乳微球a和10ml 羊抗体-胶乳微球b混合，静置24h，得到反应液2。
43.储存液由以下原料组成：100g浓度为100mmol/l且ph＝7.4的hepes 缓冲液、1.0g氯化钠、0.2g吐温20、0.4g稳定剂、0.5g抗菌剂和0.3g甜菜碱。
44.校准品由以下步骤制备而成：将100g浓度为100mmol/l且ph＝7.4 的tris缓冲液、1.3g氯化钠、0.3g吐温20、0.5g稳定剂和0.3g抗菌剂混合后，再加入10μl基质金属蛋白酶-3，以800rpm的转速搅拌20min，得到校准品。
45.稳定剂为1-癸基-3-甲基咪唑氯盐；抗菌剂为叠氮化钠。
46.实施例2
47.与实施例1基本相同，区别仅在于所述反应液2由以下步骤制备而成：
48.(1)抗体-胶乳微球的制备：将0.5ml粒径80nm的胶乳微球a加入 5g浓度为100mmol/l且ph＝7.4的tris缓冲液中，以500rpm的转速搅拌 10min后，加入50ul浓度为10mg/l的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液搅拌反应15min,然后加入0.5mg兔单抗，继续搅拌反应 2h，然后再加入30ul的ce510封闭剂，继续搅拌反应30min,结束后使用切向流过滤进行分离，然后加入10ml储存液，得到兔抗体-胶乳微球a；重复同样的步骤得到兔抗体-胶乳微球b(粒径150nm)；(2)反应液2 的制备：将10ml兔抗体-胶乳微球a和10ml兔抗体-胶乳微球b混合，静置24h，得到反应液2。
49.实施例3
50.与实施例1基本相同，区别仅在于所述反应液2由以下步骤制备而成：
51.(1)抗体-胶乳微球的制备：将0.5ml粒径80nm的胶乳微球a加入 5g浓度为100mmol/l且ph＝7.4的tris缓冲液中，以500rpm的转速搅拌 10min后，加入50ul浓度为10mg/l的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液搅拌反应15min,然后加入0.5mg兔单抗，继续搅拌反应 2h，然后再加入30ul的ce510封闭剂，继续搅拌反应30min,结束后使用切向流技术进行分离，然后加入10ml储存液，得到兔抗体-胶乳微球a：将0.5ml粒
0.01mol/l氢氧化钠甲醇溶液，继续反应40min，结束后离心，甲醇洗涤三次，60℃干燥24h，得到zno纳米粒子。
66.实施例8
67.与实施例4基本相同，区别仅在于所述抗菌剂为zno@pda@zif-7 复合纳米粒子。
68.所述zno@pda@zif-7复合纳米粒子，制备方法如下：
69.(1)将1.0g苯并咪唑和2.0g硝酸锌加入到10g n,n-二甲基甲酰胺中，以800rpm的转速搅拌反应24h，结束后离心，用甲醇洗涤三次，80℃干燥24h，得到zif-7纳米粒子；
70.(2)将步骤(1)得到的0.5g zif-7纳米粒子分散在10g甲醇溶液中，然后加入0.2g盐酸多巴胺，形成混合液，再将混合液在70℃水浴中，以 1000rpm的转速搅拌反应10h，结束后离心，乙醇洗涤三次，80℃干燥24h，得到pda@zif-7纳米粒子；
71.(3)将步骤(2)得到的0.3g pda@zif-7纳米粒子分散在10g甲醇中，然后加入15.0g 10mmol/l硝酸锌甲醇溶液，以1200rpm的转速搅拌 50min后，加入0.2g 0.01mol/l氢氧化钠甲醇溶液，继续反应40min，结束后离心，甲醇洗涤三次，60℃干燥24h，得到zno@pda@zif-7复合纳米粒子。
72.实施例9
73.与实施例8基本相同，区别仅在于：反应液1中添加0.2g六巯基己醇抗干扰剂。
74.对照组2
75.与实施例4基本相同，区别仅在于：反应液1中无稳定剂，反应液2 中的储存液中无稳定剂。
76.分别对实施例1-9和对照组1-2进行如下性能测试和评价：
77.实验仪器：hitachi7180，mmp-3试剂检测参数如表1。
78.(1)反应液2的外观应为乳白色溶液，无沉淀。
79.(2)试剂空白吸光度：在对应的主波长下，试剂空白吸光度(a)≤ 1.5。
80.(3)灵敏度：测试100ng/ml被测物时的吸光度与空白试剂测试时的吸光度差值(
△
a)。
81.(4)线性范围：试剂在指定的线性区间内：计算线性相关系数(r)，一般r≥0.990。
82.(5)批间差：不同批次的试剂测试同一个样本，计算批间相对极差 (r)，一般r≤10.0，越小说明批间差越小。
83.(6)精密度：重复测试一例样本10次，计算变异系数(cv),一般 cv≤10.0，越小说明精密度越好。
84.(7)开瓶稳定性：将试剂盒开瓶后放置于生化分析仪试剂仓内 (2-8℃)，放置45天以上，每隔7天测试一次质控品，每次测试3遍，计算测定平均值与第0天的相对偏差，一般应≤10.0。
85.(8)热加速稳定性：将试剂放置于37℃下8天，然后将试剂拿出来后进行反应液2的外观、试剂空白吸光度、灵敏度、线性范围、批间差和精密度评价。
86.(9)长期稳定性：将试剂在2-8℃下放置28个月，每4个月评价一下r2试剂性状、试剂空白吸光度、灵敏度、线性范围、批间差和精密度指标。
87.(10)抗类风湿因子干扰测试：将血清样本中添加不同浓度的rf，每个浓度样本测试3遍，计算平均值与rf添加浓度为0的样本做相对偏差，一般应≤10.0％。
88.表1mmp-3试剂检测参数
[0089][0090][0091]
数据结果与分析：第0个月实施例的试剂性能见表2。不同实施例的开瓶稳定性见表3。不同实施例的热加速稳定性见表4。不同实施例长期稳定性空白吸光度见表5。不同实施例的长期稳定性(灵敏度)见表6。不同实施案例长期稳定性(批间差)见表7。不同实施例的长期稳定性(精密度)见表8。不同实施案例长期稳定性(线性)见表9。不同实施例的抗类风湿因子干扰见表10。
[0092]
表2不同实施例的第0个月试剂性能
[0093][0094]
表3不同实施例的开瓶稳定性
[0095]
[0096]
[0097][0098]
表4不同实施例的热加速稳定性
[0099]
[0100][0101]
表5不同实施例的长期稳定性(空白吸光度)
[0102]
[0103][0104]
表6不同实施例的长期稳定性(灵敏度)
[0105]
[0106][0107]
表7不同实施案例长期稳定性(批间差)
[0108][0109]
表8不同实施例的长期稳定性(精密度)
[0110]
[0111][0112]
表9不同实施例的长期稳定性(线性)
[0113]
[0114][0115]
表10不同实施例的抗类风湿因子干扰
[0116]
[0117][0118]
由表2的数据可以看出，对照组2相比于实施例4来说反应液1和反应液2没有添加稳定剂，反应液2出现了沉淀，灵敏度、批间差和精密度都很差，不满足要求，说明离子液体稳定剂的添加对试剂的稳定性有很大的提高；实施例1-4不同之处在于每个胶乳粒子偶连的抗体不一样，r2 试剂都没有出现沉淀，但灵敏度、批间差、精密度和线性范围实施案例4 最好，说明胶乳颗粒a和羊单抗偶连，胶乳颗粒b与兔单抗偶连的性能最好；实施例4与对照组1的不同之处在于粒子分散的方式不同，对照组 1采取离心+吹打的方式，实施例4采取切向流的分散方式，其批间差比对照组1的批间差要低，说明采取切向流的分散方式可以有效的降低批间差；实施案例4、6-9的不同之处在于加入的抗菌剂不同，实施例8和9的性能最好，说明加入zno@pda@zif-7复合纳米粒子可以有效的抑菌，改善试剂性能。由表10的数据可以得出：实施案例9添加六巯基己醇组能抵抗400iu/ml的rf干扰，而对照组和其他案例组只能抵抗200iu/ml的 rf干扰，说明本发明的胶乳试剂抵抗rf干扰的能力最佳。
[0119]
由表3的试剂开瓶数据可以得出：对照组2的开瓶稳定性很差，对照组1和其他实施例组开瓶49天后，偏差都能满足要求。实施案例8和9 的开瓶稳定性最好，相对偏差普遍小于3％，说明添加离子液体和 zno@pda@zif-7复合纳米粒可以改善试剂的开瓶稳定性。说明本发明提供的胶乳试剂稳定性性能更优。
[0120]
由表4的热加速数据可以得出：对照组的热加速后性能最差，r2试剂出现沉淀，空白本底急速的升高，灵敏度、批间差、精密度和线性都不能满足要求。实施案例8和9的性能不仅能满足要求，而且每项指标都最佳。
[0121]
由表5-9的数据可以得出：各实施例的试剂放置32个月后试剂的r2 性状、空白吸光度、灵敏度、批间差、精密度和线性基本能满足要求，其中实施例8和9的批间差与精密度的相对偏差普遍都小于3％，性能最优。对照组1只有批间差的性能不佳，其他性能基本能满足要求，对照组2以上性能都不能满足要求。
[0122]
综上所述，本发明的基质金属蛋白-3测定试剂盒(胶乳免疫比浊法) 开瓶稳定性、加热稳定性、长期稳定性和抗rf干扰性能均较好，试剂的物理性状、空白吸光度、灵敏度、批间差、精密度、线性和稳定性均能满足临床使用需求。