一种零价碘在透明质酸检测上的应用的制作方法

1.本发明涉及一种零价碘在透明质酸检测上的应用，属于化学检测技术领域。


背景技术：

2.透明质酸(hyaluronic acid，简称ha)又名玻璃酸，是由(1-3)-2-乙酰氨基-2-脱氧-d-葡萄糖(1-4)-d-d-葡萄醛酸双糖重复单位所组成的高分子量的直链粘多糖。透明质酸具有良好的保湿性能，近年来被添加到各种护肤品、日用品、食品中，比如精华、面膜、纸巾、湿巾、无纺类产品、织物类产品、饮品，等等。欧洲药典记载的ha检测方法是目前ha检测最常用的方法，需要先将ha降解成葡萄糖醛酸，再利用葡萄糖醛酸与咔唑的显色反应，通过光度法计算出葡萄糖醛酸的含量，进而换算出ha的含量。该方法反应过程复杂、耗时长，还需要用到强酸，对环境也有一定污染。
3.对于产品中的ha，还可以利用高效液相色谱法进行检测，但该方法一般需要经过“萃取-酶解-hplc”的串联操作，例如，专利cn109298112b提供了一种测定透明质酸含量的方法，该方法适用于保健食品、药品、医疗器械、化妆品、毛发护理用品、口腔护理用品、纸品中透明质酸含量的测定，需要先利用透明质酸酶对包含透明质酸的待测样品进行酶解再利用高效液相色谱对ha含量进行测定。不仅耗时长，而且受设备型号限制，不能快速检测出产品中的ha。目前，现有技术中还未发现能快速检测出产品中的ha的方法。


技术实现要素：

4.针对现有技术存在的不足，发明人经过大量的试验和研究，惊奇地发现透明质酸和零价碘混合后能发生颜色变化，零价碘的颜色为黄色，与透明质酸混合后，黄色消失，混合溶液变为无色。发明人进一步研究了其它与透明质酸结构相似的多羟基多糖类物质，如壳聚糖、海藻酸钠等，发现同样条件下，其它多羟基多糖类物质与零价碘混合均未发生颜色变化，因此，零价碘与透明质酸的颜色反应具有一定的特异性，可以用零价碘指示透明质酸的存在。
5.本技术具体技术方案如下：本发明提供一种零价碘在检测透明质酸中的应用。
6.在一些实施方案中，将零价碘、待检样品和溶剂混合，通过混合物颜色的变化来判断是否存在透明质酸。
7.所述零价碘包括碘单质、碘单质与聚合物的复配物中的一种或多种。
8.所述碘单质与聚合物的复配物包括聚维酮碘。
9.本发明还提供一种包含零价碘的组合物在检测透明质酸中的应用。
10.上述组合物包括零价碘和溶剂，所述零价碘包括碘单质、碘单质与聚合物的复配物中的一种或多种，所述溶剂包括水。
11.本发明还提供一种检测透明质酸的方法，将待检样品、零价碘和溶剂混合，观察混
合物的颜色变化。
12.上述待检样品包括化妆品、食品、保健品、纸制产品、无纺类产品、织物类产品、和/或它们的提取物。
13.在一些实施方案中，将零价碘与待检样品在溶剂中混合，通过混合物颜色的变色判断是否存在透明质酸。所述待检样品优选为预期含有透明质酸的产品。
14.进一步地，由于零价碘呈黄色，当混合物颜色保持初始颜色不变时，说明无透明质酸存在，当混合物初始颜色改变，说明有透明质酸存在。
15.在一些实施方案中，当混合物中还含有其他具有颜色的成分时，例如染料，含有透明质酸的混合物可能会具有多种变色类型。可以加入的染料例如ci 45430、ci 16255、ci 15510、ci 45410、ci 16035、ci42090等水溶性染料。
16.本发明基于碘与透明质酸类物质反应能够发生变色的现象，通过肉眼就能判断是否有透明质酸类物质的存在，可实现透明质酸类物质的快速定性检测。
17.本发明所说的透明质酸，指的是透明质酸类物质，其包括透明质酸、透明质酸盐、交联透明质酸、交联透明质酸盐、透明质酸衍生物、交联透明质酸衍生物等透明质酸类物质。其中，透明质酸盐包括透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸锌、透明质酸镁、透明质酸钙、透明质酸钴、透明质酸金等。透明质酸衍生物包括乙酰化透明质酸、巯基化透明质酸等，交联透明质酸衍生物包括乙酰化交联透明质酸、巯基化交联透明质酸等。
18.所述零价碘包括碘单质、和/或碘单质与聚合物的复配物，碘单质与聚合物的复配物没有特别限制，例如为聚维酮碘等。零价碘的颜色为黄色，待检样品溶液与零价碘混合后溶液呈黄色，当样品中含有透明质酸类物质时，碘与透明质酸类物质发生反应，零价碘颜色变浅或消失，混合溶液颜色变浅或直接变为无色。
19.在一些实施方案中，待检样品以溶液的形式与零价碘接触混合，当待检样品能够溶解于溶剂中时，将待检样品、零价碘和溶剂混合即可。混合的顺序可以随意选择，例如可以分别将待检样品与溶剂配成溶液，将零价碘和溶剂配成溶液，然后将两种溶液混合；或者，直接将待检样品和零价碘同时溶于溶剂中，混合均匀。当待检样品无法完全直接溶于溶剂中时，待检样品需要提前用溶剂进行提取，然后将提取液与零价碘混合。所述溶剂例如为水。
20.零价碘与透明质酸一旦接触就能发生反应，碘单质加入量越多，或透明质酸含量越多，反应越快，颜色变化越迅速。但碘加入量不易过量，过量后有多余的碘存在混合体系中，不易观察颜色变化。透明质酸与碘单质的质量比可以是(1000~0.1):1，优选为(100~1):1，例如，可以是1000:1、900:1、800:1、700:1、600:1、500:1、400:1、300:1、200:1、100:1、90:1、80:1、70:1、60:1、50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、0.9:1、0.8:1、0.7:1、0.6:1、0.5:1、0.4:1、0.3:1、0.2:1、0.1:1。零价碘的含量可以在常规用量中进行选择，在一些实施方案中，零价碘的含量为0.0001%~0.1%，优选为0.001%~0.01%，例如，可以是0.0001%、0.0002%、0.0003%、0.0004%、0.0005%、0.0006%、0.0007%、0.0008%、0.0009%、0.001%、0.002%、0.003%、0.004%、0.005%、0.006%、0.007%、0.008%、0.009%、0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%；ha的含量可以是ha在化妆品、食品、保健品、纸制产品、无纺类产品、织物类等产品中的常规添加量，在一些实施方案中，ha的含量为0.0001%~5%，优选为0.001%~1.0%，例如，可以是0.0001%、
0.0002%、0.0003%、0.0004%、0.0005%、0.0006%、0.0007%、0.0008%、0.0009%、0.001%、0.002%、0.003%、0.004%、0.005%、0.006%、0.007%、0.008%、0.009%、0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1.0%。
21.本发明还提供的零价碘在透明质酸检测上的应用，可以用于检测产品中ha的定性检测，所述产品为化妆品、食品、保健品、纸制产品、无纺类产品、织物类等，和/或其提取物。当透明质酸与零价碘混合时，可出现肉眼可见的颜色变化，耗时短，能够实现ha的快速定性检测。
22.在一些实施方案中，本发明可以用于判断产品中是否含有透明质酸，也可以用于不同产品之间的ha含量分析，例如将含有ha的不同厂家生产的同类型产品采用该定性方法进行ha检测，通过颜色变化的快慢来评价哪种产品透明质酸含量更高。
23.在一些实施方案中，本发明还可以用于生产过程中的质量控制，例如在含ha的饮品生产过程中，通过该定性方法可以进行快速的是否含ha的检测，用于控制产品质量。
24.在一些实施方案中，本发明还可以用于在市场上做真假货的快速辨别。该方法操作简单、现象直观、耗时短、效率高、无需其他设备辅助、成本低，具有很高的应用价值。
25.在一些实施方案中，由于本发明的变色现象直观，还可以用于实验展示，让消费者直观地看到产品中添加有ha成分。
26.本发明具有以下有益效果：1、本发明提供了一种零价碘在透明质酸检测上的应用，通过零价碘与透明质酸混合，可出现肉眼可见的颜色变化，能够实现ha的快速检测，操作方便、耗时短、成本低。
27.2、本发明能有效适合于预期含有ha的化妆品、食品、保健品、纸制产品、无纺类产品、织物类产品等（不易使用传统hplc检测方法）中ha的检测，在定量检测产品中ha含量之前，可用于产品中是否含量ha的初步筛选，具有很好的应用前景。
28.3、本发明可以适用于多种不同的场景需求，对ha实现快速的定性检测，具有操作简单、现象直观、效率高、无需其他设备辅助等优势。
具体实施方式
29.下面通过具体实施例对本发明进行进一步说明，下述说明仅是示例性的，并不对其内容进行限制。
30.下述实施例中，所用试剂均为市售产品，部分试剂情况如下表1所示：
实施例1称取0.002g透明质酸钠（30wda）溶解于纯化水中，定容至100ml，配置成质量百分比为0.002%的透明质酸溶液；称取0.002g聚维酮碘溶解于纯化水中，定容至100ml，配置成质量百分比为0.002%的聚维酮碘溶液；将上述透明质酸溶液和聚维酮碘溶液等体积混合，混合后混合物中透明质酸钠和聚维酮碘的质量百分含量如表2所示。
31.实施例2-14按照实施例1的步骤，将透明质酸钠、交联透明质酸钠或乙酰化透明质酸钠分别溶解于纯化水中，配成透明质酸水溶液。将零价碘也溶于纯化水中，配成零价碘水溶液。
32.将透明质酸水溶液和零价碘水溶液按照一定体积比混合，得到表2所示不同透明质酸和零价碘浓度的混合物溶液。
33.对比例1海藻酸钠溶液：称取0.002g海藻酸钠溶解于纯化水中，定容至100ml，配置成质量百分比为0.002%的海藻酸钠溶液；聚维酮碘溶液：称取0.002g聚维酮碘溶解于纯化水中，定容至100ml，配置成质量百分比为0.002%的聚维酮碘溶液；将上述海藻酸钠溶液和聚维酮碘溶液等体积混合，混合后混合物中海藻酸钠和聚维酮碘的质量百分含量均为0.001%。
34.对比例2壳聚糖溶液：称取0.002g壳聚糖溶解于纯化水中，定容至100ml，配置成质量百分比为0.002%的壳聚糖溶液；聚维酮碘溶液：称取0.002g聚维酮碘溶解于纯化水中，定容至100ml，配置成质量百分比为0.002%的聚维酮碘溶液；将上述壳聚糖溶液和聚维酮碘溶液等体积混合，混合后混合物中壳聚糖和聚维酮碘的质量百分含量均为0.001%。
35.变色情况实验以透明质酸水溶液和零价碘水溶液混合后的时间定为初始时间，观察溶液颜色是否有变化，如果有变化，记录从该初始时间开始溶液颜色变为无色所需的时间，即为变色时间。对比例1的变色时间为海藻酸钠溶液和聚维酮碘溶液混合后溶液颜色变为无色所需的时间。对比例2的变色时间为壳聚糖溶液和聚维酮碘溶液混合后溶液颜色变为无色所需的
时间。
36.各实施例和对比例的混合物溶液变色情况如下表3所示：通过上述实验可以看出，不同浓度、不同分子量的透明质酸钠、交联透明质酸钠以及透明质酸钠的衍生物与零价碘混合后均发生颜色变化，而与透明质酸结构相似的海藻酸钠和和壳聚糖在相同条件下并不能与零价碘发生显色反应，由此表明，零价碘与ha的颜色反应具有一定的特异性，零价碘能够特异性指示ha的存在。