一种用于肝癌诊断的血浆代谢标记物、其筛选方法及应用

1.本发明涉及肝癌诊断标志物技术领域，具体涉及一种用于肝癌诊断的血浆代谢标记物、其筛选方法及应用。


背景技术：

[0002][0003]
hcc传统诊断方法为检测血清中的标记物，目前公认的肝癌血清标记物为 afp(甲胎蛋白)，对hcc有早期诊断、鉴别诊断、肝切除后疗效观察、监测有无复发及评价预后的重要意义。afp是由590个氨基酸组成的糖蛋白，分子量为7.2万，只要由肝细胞粗面内质网上的核糖体合成。afp是胎儿时期肝脏合成的一种糖蛋白，成人后血清中水平很低，而发生恶变的肝细胞则又可以恢复其合成的能力。afp的检测方法一般为采集静脉血后分离出血浆，于自动elisa 仪中检测。afp指标升高，常用于肝癌的辅助诊断。
[0004]
然而，afp在不同原发性肝癌中的诊断价值的高低还存在一定的分歧。afp 对于肝癌的诊断存在的敏感性和特异性均不高，具有容易造成漏诊和误诊的缺陷。还存在一定局限性，如：需要先排除活动性肝炎、妊娠、生殖细胞肿瘤等情况。且少数慢性良性肝病，如肝硬化和肝炎，也可能出现afp升高的情况。


技术实现要素：

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本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种用于肝癌诊断的血浆代谢标记物、其筛选方法及应用。
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为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
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第一方面，本发明提供一种用于肝癌诊断的血浆代谢标记物，包括邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯。
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本发明的血浆代谢标记物在肝癌患者的血清中明显降低，差异具有统计学意义；在正常组以及肝硬化组之间无明显差异。且与患者的肝功能损害程度指标alt、肝功能代谢指标总胆红素、afp进行相关性分析，显示均不相关，邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯的肝癌诊断具有独特性。
[0009]
第二方面，本发明提供了所述的用于肝癌诊断的血浆代谢标记物的筛选方法，包括以下步骤：
[0010]
(1)收集肝癌患者、肝硬化患者、正常人的外周血样本；分别低速离心后，分离血清；
[0011]
(2)基于超高效液相串联四极杆飞行时间二级质谱技术结合数据依赖采集方式，对所述血清进行全谱分析，获得一级质谱和二级质谱数据；
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(3)对所述一级质谱和二级质谱数据进行峰提取和代谢物鉴定，进行统计学分析，筛选出肝癌患者血清中升高且具有统计学意义的代谢物，即为肝癌患者的血浆代谢标志物。
[0013]
本发明所筛选出的血浆代谢标志物可作为肝癌诊断和预后的标志物。
[0014]
作为本发明所述筛选方法的优选实施方式，所述峰提取和代谢物鉴定采用 xcms。
[0015]
作为本发明所述筛选方法的优选实施方式，所述升高的倍数＞1.5；所示统计学意义的p值＜0.05。
[0016]
第三方面，本发明将所述的血浆代谢标记物在制备肝癌诊断的试剂盒中应用。
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第四方面，本发明将所述的血浆代谢标记物在制备诊断肝癌预后的试剂盒中应用。
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与现有技术相比，本发明的有益效果为：
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本发明的血浆代谢标记物邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯在肝癌组明显降低，且与患者的肝功能损害程度指标alt、肝功能代谢指标总胆红素、afp进行相关性分析，显示均不相关，说明其诊断肝癌的独特性。另外，该检测方法易操作、所需上样量较少、灵敏度高。邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯可视为一个辅助诊断肝癌的新的代谢标志物。
附图说明
[0020]
图1为外周血的血清中邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯的含量统计图；
[0021]
图2为邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯诊断和afp诊断对比图。
具体实施方式
[0022]
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0023]
实施例中所用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0024]
实施例1：
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(1)收集肝癌患者、肝硬化患者、正常人的外周血，采集量为5ml
×
2管/ 人。分别存储于抗凝采血管和促凝采血管中。所有样本均签订样本采集知情同意书，处理好的样本均遵循实验室生物安全操作规范，做好相应记录。
[0026]
设置试验分组为：对照组：即为nc组，正常人外周血，30例；肝硬化组：即为dc组，肝硬化患者外周血，23例；实验组：即为hcc组，肝癌患者外周血，27例。
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(2)促凝采血管中血样低速离心后，分离血清及血细胞，收集血清至50μl 冻存管。
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(3)使用ab triple tof 5600/6600质谱仪(ab sciex)以及agilent 1290infinity lc超高压液相色谱仪等仪器，基于超高效液相串联四极杆飞行时间二级质谱(uhplc-q-tof ms)技术结合数据依赖采集方式，对各组血浆进行全谱分析，同时获得一级质谱和二级质谱数据，并采用xcms对数据进行峰提取和代谢物鉴定，随后进行统计学分析，筛选出肝癌组中升高明显(倍数＞1.5)且具有统计学意义(p值＜0.05)的代谢物，视为肝癌患者的可能代谢标志物。检测结果见图1。
[0029]
邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯在正常组与肝癌组的检测及分析结果如表1所示：
[0030]
表1检测结果
[0031]
血清代谢物肝癌正常人vip值差异倍数p值
邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯8038.26
±
3010.99112460.88
±
31374.254.420.07＜0.0001
[0032]
邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯在肝硬化组与肝癌组的检测及分析结果如表2 所示：
[0033]
表2检测结果
[0034]
血清代谢物肝癌肝硬化vip值差异倍数p值邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯8038.26
±
3010.99102273.91
±
32586.373.710.08＜0.0001
[0035]
如图1和表1、2所示，比较3组外周血的血清中邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯的含量，发现相比正常组以及肝硬化组，邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯在肝癌组明显降低，差异具有统计学意义；而且，在正常组以及肝硬化组之间无明显差异。
[0036]
实施例2：
[0037]
邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯诊断与afp相比较。
[0038]
用spss软件对邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯离子峰值，按照肝癌、非肝癌计算受试者工作曲线，并与afp相比较。结果如图2所示，邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯的roc曲线下面积高于afp，邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯的诊断效能优于afp。所需上样量较少、灵敏度高。
[0039]
实施例3：
[0040]
将病例资料数据做相关性分析，用spss软件对其与患者的肝功能损害程度指标alt、肝功能代谢指标总胆红素、afp进行相关性分析，显示均不相关(p ＞0.05)，说明其诊断肝癌的独特性，诊断更加灵敏。
[0041]
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。