技术特征：
1.高效液相色谱串联质谱法检测血浆中cmpf含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：血浆样本前处理：准确移取100μl血浆样本置于96孔蛋白沉淀板，加入含有cmpf同位素内标的有机溶剂，置于恒温振荡仪中，700rpm振荡3min，置于正压装置上，调节流量至40psi下，接取过滤液，作为液相色谱串联质谱检测样本备用；采用高效液相色谱串联质谱法检测经过前处理的血浆样本中的cmpf含量：先利用高效液相色谱将cmpf分离，再利用质谱同位素内标法进行定量，以cmpf目标化合物与cmpf同位素内标的浓度比为x轴，cmpf目标化合物与cmpf同位素内标的峰面积比为y轴，建立校正曲线，计算血浆中cmpf的含量，具体仪器条件为：(1)高效液相色谱条件：流动相a：5mm甲酸铵水；流动相b：0.1％甲酸+甲醇；色谱柱型号：waters uplc hss c18sb 2.1mm
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50mm,1.8μm柱温为40℃
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5℃，进样量为10μl，进样盘温度为10℃
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5℃，流速为0.4ml/min；采用梯度洗脱方式，见下表1：表1 梯度洗脱程序梯度洗脱程序(2)质谱条件：离子化模式：在电喷雾正离子模式下，采用多反应监测的质谱扫描模式，毛细管电压为4.0kv；离子源温度为150℃；去溶剂气温度为650℃；去溶剂气流速为650l/hr；同时监测目标化合物以及同位素内标；多反应监测模式，离子参数：cmpf：239.1596>151.114，锥孔电压为32v，碰撞能量为16v；cmpf-d3：242.1596>154.173，锥孔电压为32v，碰撞能量为18v。2.根据权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱法检测血浆中cmpf含量的方法，其特征在于，所述血浆样本前处理中加入含有cmpf同位素内标的有机溶剂按以下方法制备：以甲醇为溶剂配制1mg/ml的cmpf-d3标准品储备液，然后用甲醇制备出含1.0μg/ml cmpf-d3的有机溶剂。3.根据权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱法检测血浆中cmpf含量的方法，其特征在于，所述cmpf目标化合物按以下方法配制：以甲醇为溶剂配制1mg/ml的cmpf标准品储备液，然后用5％m/v bsa溶液制备cmpf浓度分别为0.02μg/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/
ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml、50μg/ml共7个梯度的混合标准品溶液分装于1.5ml棕色瓶中，置于-20℃保存备用。
技术总结
本发明提供一种高效液相色谱串联质谱法检测血浆中CMPF含量的方法，包括血浆样本前处理及采用高效液相色谱串联质谱法检测经过前处理的血浆样本中的CMPF含量，具体先利用高效液相色谱将CMPF分离，再利用质谱同位素内标法进行定量，以目标化合物与其同位素内标的浓度比为X轴，目标化合物与其同位素内标的峰面积比为Y轴，建立校正曲线，计算血浆中CMPF的含量。本申请在样本前处理过程中通过蛋白沉淀板和有机溶剂的组合，使蛋白沉淀更为完全，能有效去除杂质，降低基质效应，不仅提高了沉淀效率，大大缩短了样本前处理和检测时间，同时在样本前处理中加入含有CMPF同位素内标的有机溶剂，能有效克服因样本个体间基质差异引起的干扰。干扰。干扰。
技术研发人员：何永鹏 李咏生 雷海科 冀晓辉 王帅奇 王惟 赵化侃 王娇
受保护的技术使用者：重庆大学附属肿瘤医院
技术研发日：2022.06.30
技术公布日：2022/8/19