一种利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法与流程

1.本发明属于药物分析方法技术领域，具体涉及一种利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法。


背景技术：

2.利多卡因凝胶贴为局部外用药，作用部位在角质层内的外用制剂，在药学主要质量特性及制剂微观结构一致的基础上，我们可通过体外释放和体外透皮吸收对比试验来评价自制药和参比制剂的疗效的一致性，需开展体外透皮研究。体外透皮为模拟药品在生理条件下的透皮过程，以部分地反应药品质量与临床治疗的有效性。


技术实现要素：

3.本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法。
4.本发明的技术方案如下：
5.一种利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法，其特征在于，它包括如下步骤：
6.(1)将猪皮浸泡在生理盐水中，浸泡后的猪皮的表面用棉布擦干，揭除凝胶贴上的防粘膜后粘贴在擦干后的猪皮的表面上，在franz扩散池中进行透皮试验；
7.其中，透皮介质为生理盐水；透皮介质的体积为14.5～15.5ml；透皮介质的温度为30～35℃；转速为200～1000rpm；取样时间为6h；
8.(2)将透皮试验后的猪皮，加入氢氧化钠溶液中，在65～75℃的温度下浸泡，浸泡后，在5000～7000rpm的条件下进行匀浆处理，所得混悬液加入甲醇稀释后，离心，取上清液过滤，取续滤液作为皮内滞留透皮试验的供试品溶液；
9.(3)将步骤(2)中所得供试品溶液，采用高效液相色谱方法进行测定，其中，色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶；采用流动相a和流动相b为混合流动相进行等度洗脱，流动相a和流动相b的比例为30～40:70～60；所述流动相a为1～5％冰乙酸溶液，采用氢氧化钠调节ph值至5.0～6.0；所述流动相b为甲醇。
10.对于本发明而言，需要对透皮试验后的猪皮进行处理，具体处理过程如下：将透皮试验后的猪皮加入氢氧化钠溶液中，在65～75℃的温度下浸泡，浸泡后，在5000～7000rpm的条件下进行匀浆处理，处理后的猪皮在匀浆处理的过程中容易被打碎，主成分利多卡因容易被提取出来，采用高效液相色谱方法进行测定皮内滞留透皮试验时，皮内滞留量偏高，测试结果更加准确。
11.在相同的条件下，采用其他方式处理，例如，将透皮试验后的猪皮直接进行匀浆处理、不加人氢氧化钠，仅仅加入水中在65～75℃的温度下浸泡以及加入甲醇进行匀浆处理时，处理后的猪皮在匀浆处理的过程中均难以被打碎，主成分利多卡因不易被提取出来，采用高效液相色谱方法进行测定皮内滞留透皮试验时，皮内滞留量偏低，准确率偏低。
12.在本发明中，在步骤(2)中，浸泡时的温度为65～75℃，可以但不局限于65℃、68
℃、70℃、72℃或75℃，为了获得更好的提取效果，浸泡时的温度为70℃。
13.在一种优选方案中，浸泡时的时间为1～3h，优选为2h。
14.进一步地，浸泡时，氢氧化钠溶液的浓度0.05～0.15m为，优选为0.1m。
15.浸泡后，进行匀浆处理的过程中，转速为5000～7000rpm，可以但不局限于5000rpm、6000rpm或7000rpm。
16.在本发明中，在步骤(1)中，取利多卡因凝胶贴裁剪成2cm
×
2cm的方形片(利多卡因以含膏量计)，再将猪皮浸泡在生理盐水中，浸泡后的猪皮的表面用棉布擦干，揭除凝胶贴上的防粘膜后粘贴在擦干后的猪皮的表面上，在franz扩散池中进行透皮试验。
17.进一步地，猪皮在生理盐水中浸泡的时间为20～40分钟；优选为30分钟。
18.在一种优选方案中，在franz扩散池中进行透皮试验时，透皮介质的体积为14.5ml；透皮介质的温度为32℃；转速为500rpm。
19.进一步地，透皮介质的接触面积为1.1304cm2。
20.在本发明中，将步骤(2)中所得供试品溶液采用高效液相色谱方法进行测定，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶，例如，色谱柱为inertsustion c18。优选地，色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm。
21.在色谱分析的过程中，采用流动相a和流动相b为混合流动相进行等度洗脱，流动相a和流动相b的比例为30～40:70～60。优选地，等度洗脱时，流动相a和流动相b的比例为35:65。
22.在色谱分析的过程中，采用流动相a和流动相b为混合流动相进行等度洗脱，流动相a为1～5％冰乙酸溶液，采用氢氧化钠调节ph值至5.0～6.0；流动相b为甲醇。优选地，流动相a为3％冰乙酸溶液，采用氢氧化钠调节ph值至5.5。
23.对于本发明而言，上述色谱条件还包括：流速为0.8～1.5ml/min，优选为1ml/min；进样量为10～50μl，优选为20μl；检测波长为225～235nm；优选为230nm。
24.本发明保护的利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法用于测定皮内滞留量，通过计算物料平衡来考察利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法的准确性，其中，物料平衡的计算方法如下：物料平衡(％)＝(渗透量+膏体残留量+表皮残留量+皮内滞留量)
÷
试验贴膏的理论含量。
25.其中，渗透量的体外透皮试验方法包括如下步骤：
26.(1)取利多卡因凝胶贴裁剪成2cm
×
2cm的方形片(利多卡因以含膏量计)，再将猪皮浸泡在生理盐水中，浸泡后的猪皮的表面用棉布擦干，揭除凝胶贴上的防粘膜后粘贴在擦干后的猪皮的表面上，在franz扩散池中进行透皮试验，透皮介质为生理盐水；透皮介质的体积为14.5ml；透皮介质的温度为32℃；转速为500rpm；透皮介质的接触面积为1.1304cm2；取样时间为6h；
27.(2)取透皮试验完成后的透皮介质，过滤，作为供试品溶液，采用高效液相色谱方法进行测定，色谱条件包括：色谱柱为inertsustion c18(4.6
×
250mm，5μm)；流速为1ml/min；进样量为20μl；检测波长为230nm；采用流动相a和流动相b为混合流动相进行等度洗脱，流动相a和流动相b的比例为35:65；所述流动相a为3％冰乙酸溶液，采用氢氧化钠调节ph值至5.5；所述流动相b为甲醇。
28.(3)取利多卡因对照品，加混合流动相(流动相a和流动相b的比例为35:65)溶解，
并用生理盐水稀释制成每1ml约含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；按照步骤(2)中色谱条件进行测定，计算单位面积渗透量。
29.表皮残留量的体外透皮试验方法，是在透皮试验后的猪皮的基础上进行测定，包括如下步骤：
30.(1)透皮试验后的猪皮，采用甲醇浸湿后的脱脂棉花擦拭整个猪皮表面，将擦试后的脱脂棉花所得的挤出液加入量瓶中，用甲醇多次洗涤挤出后脱脂棉花，所得洗涤液转移至量瓶中，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到表皮残留透皮试验的供试品溶液；
31.(2)将步骤(1)中所得供试品溶液，采用高效液相色谱方法进行测定，色谱条件包括：色谱柱为inertsustion c18(4.6
×
250mm，5μm)；流速为1ml/min；进样量为20μl；检测波长为230nm；采用流动相a和流动相b为混合流动相进行等度洗脱，流动相a和流动相b的比例为35:65；所述流动相a为3％冰乙酸溶液，采用氢氧化钠调节ph值至5.5；所述流动相b为甲醇。
32.(3)取利多卡因对照品，加混合流动相(流动相a和流动相b的比例为35:65)溶解，并用生理盐水稀释制成每1ml约含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；按照步骤(2)中色谱条件进行测定，计算表皮残留量。
33.皮内滞留量的体外透皮试验方法，是在透皮试验后的猪皮的基础上进行测定，包括如下步骤：
34.(1)将透皮试验后的猪皮，加入0.1m氢氧化钠溶液中，在70℃的温度下浸泡2h，浸泡后，在6000rpm的条件下进行匀浆处理，所得混悬液加入甲醇稀释后，离心，取上清液过滤，取续滤液作为皮内滞留透皮试验的供试品溶液；
35.(2)将步骤(1)中所得供试品溶液，采用高效液相色谱方法进行测定，其中，色谱条件包括：色谱柱为inertsustion c18(4.6
×
250mm，5μm)；流速为1ml/min；进样量为20μl；检测波长为230nm；采用流动相a和流动相b为混合流动相进行等度洗脱，流动相a和流动相b的比例为35:65；所述流动相a为3％冰乙酸溶液，采用氢氧化钠调节ph值至5.5；所述流动相b为甲醇。
36.(3)取利多卡因对照品，加混合流动相(流动相a和流动相b的比例为35:65)溶解，并用生理盐水稀释制成每1ml约含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；按照步骤(2)中色谱条件进行测定，计算皮内滞留量。
37.由于皮内滞留测试时，猪皮在匀浆处理的过程中被打碎，对离心后所得的凝胶贴方形片进行膏体残留量的体外透皮试验，包括如下步骤：
38.(1)取出上述离心后得到的凝胶贴方形片置于研钵中，加甲醇浸泡约1小时，再加入甲醇分次研磨利多卡因溶解，转移至量瓶中，甲醇稀释，摇匀，滤过，取续滤液，再加入生理盐水稀释，作为膏体残留量透皮试验的供试品溶液；
39.(2)将步骤(1)中所得供试品溶液，采用高效液相色谱方法进行测定，其中，色谱条件包括：色谱柱为inertsustion c18(4.6
×
250mm，5μm)；流速为1ml/min；进样量为20μl；检测波长为230nm；采用流动相a和流动相b为混合流动相进行等度洗脱，流动相a和流动相b的比例为35:65；所述流动相a为3％冰乙酸溶液，采用氢氧化钠调节ph值至5.5；所述流动相b为甲醇。
40.(3)取利多卡因对照品，加混合流动相(流动相a和流动相b的比例为35:65)溶解，
并用生理盐水稀释制成每1ml约含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；按照步骤(2)中色谱条件进行测定，计算膏体残留量。
41.上述公式中试验贴膏的理论量按照试验所裁取的凝胶贴膏含膏量进行标示量折算，其含膏量测定方法如下：取利多卡因凝胶贴用剪刀裁成2cm
×
2cm的方形贴片，初始贴膏称重(w1)，去除防粘膜，在相同的条件下进行透皮试验后，取出残留膏体，待膏体残留供试品处理结束后，将衬布清洗干净，与对应盖衬层一并称重(w2)，含膏量(w3)＝w
1-w2，则试验贴膏的理论量＝裁取贴膏的含膏量
÷
理论含膏量(14g)
×
理论主药量(700mg)。
42.将所得的渗透量、膏体残留量、表皮残留量和皮内滞留量的数据代入公式中，计算物料平衡，物料平衡在90％～110％范围内，物料基本守恒，可以确定本发明提供的利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法的准确性。
43.采用本发明的技术方案，优势如下:
44.本发明提供的利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法，将透皮试验后的猪皮，加入氢氧化钠溶液中，在65～75℃的温度下浸泡，浸泡后，在5000～7000rpm的条件下进行匀浆处理，所得混悬液加入甲醇稀释后，离心，取上清液过滤，得到的续滤液作为供试品溶液；对所得供试品溶液进行皮内滞留透皮试验，能够有效将猪皮中滞留的利多卡因提取出来，处理后的猪皮呈现完全溶解状态，具有肉眼可见的优势，主成分利多卡因稳定性好，采用高效液相色谱方法进行测定皮内滞留透皮试验时，皮内滞留量偏高，测试结果更加准确。
附图说明
45.图1是200转-6小时至10小时单位面积渗透量与时间平方根线性图；
46.图2是500转-6小时至10小时单位面积渗透量与时间平方根线性图；
47.图3是渗透量-线形图。
具体实施方式
48.通过以下实施例并结合附图对本发明的利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法作进一步的说明，但这些实施例不对本发明构成任何限制。
49.实施例1
50.一种利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法，它包括如下步骤：
51.(1)取利多卡因凝胶贴(批号：210513321)裁剪成2cm
×
2cm的方形片，再将猪皮在生理盐水中浸泡30分钟，浸泡后的猪皮的表面用棉布擦干，揭除凝胶贴上的防粘膜后粘贴在擦干后的猪皮的表面上，在franz扩散池中进行透皮试验，透皮介质为生理盐水；透皮介质的体积为14.5ml；透皮介质的温度为32℃；转速为500rpm；透皮介质的接触面积为1.1304cm2；取样时间为6h；
52.(2)将透皮试验后的猪皮置10ml离心管中，加入5ml 0.1m氢氧化钠溶液中，在70℃的温度下浸泡2h，浸泡后，使用匀浆机在6000rpm的条件下进行匀浆处理1分钟，所得混悬液转移至20ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液过滤，取续滤液作为皮内滞留的供试品溶液；
53.(3)将步骤(2)中所得供试品溶液，采用高效液相色谱方法进行测定，其中，色谱条件包括：色谱柱为inertsustion c18(4.6
×
250mm，5μm)；流速为1ml/min；进样量为20μl；检
测波长为230nm；采用流动相a和流动相b为混合流动相进行等度洗脱，流动相a和流动相b的比例为35:65；所述流动相a为3％冰乙酸溶液，采用氢氧化钠调节ph值至5.5；所述流动相b为甲醇。
54.(4)取利多卡因对照品，加混合流动相(流动相a和流动相b的比例为35:65)溶解，并用生理盐水稀释制成每1ml约含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；按照步骤(3)中色谱条件进行测定，计算皮内滞留量。
55.结果分析：将透皮试验后的猪皮加入0.1m氢氧化钠溶液中，在70℃的温度下浸泡2h，浸泡后，使用匀浆机在6000rpm的条件下进行匀浆处理1分钟，猪皮在匀浆处理的过程中容易被打碎，猪皮呈现完全溶解状态，主成分利多卡因容易被提取出来，采用高效液相色谱方法进行测定皮内滞留透皮试验时，皮内滞留量偏高，测试结果更加准确，皮内滞留量为0.37(mg)。
56.对比例1
57.与实施例1中的区别在于步骤(2)中猪皮的处理过程不同，具体的处理过程如下：
58.将透皮试验后的猪皮剪碎，置10ml离心管中，使用匀浆机在6000rpm的条件下进行匀浆处理30分钟，所得混悬液转移至20ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液过滤，取续滤液作为皮内滞留的供试品溶液。在匀浆处理的过程中，猪皮未完全被打碎，主成分利多卡因不易被完全提取出来。
59.对比例2
60.与实施例1中的区别在于步骤(2)中猪皮的处理过程不同，具体的处理过程如下：
61.将透皮试验后的猪皮置10ml离心管中，加入5ml水中，在70℃的温度下浸泡2h，浸泡后，使用匀浆机在6000rpm的条件下进行匀浆处理1分钟，所得混悬液转移至20ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液过滤，取续滤液作为皮内滞留的供试品溶液。在匀浆处理的过程中，猪皮未完全被打碎，主成分利多卡因不易被完全提取出来。
62.对比例3
63.与实施例1中的区别在于步骤(2)中猪皮的处理过程不同，具体的处理过程如下：
64.将透皮试验后的猪皮置10ml离心管中，加入5ml甲醇中，使用匀浆机在6000rpm的条件下进行匀浆处理1分钟，所得混悬液转移至20ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液过滤，取续滤液作为皮内滞留的供试品溶液。在匀浆处理的过程中，猪皮未完全被打碎，主成分利多卡因不易被完全提取出来。
65.实施例1和对比例1-3中测定的皮内滞留量的结果见表1，具体如下：
66.表1皮内滞留量测定结果
67.序号皮内滞留量(mg)实施例10.37对比例10.29对比例20.27对比例30.12
68.结果分析：由猪皮的处理现象和结果可见，对比例1-3中的猪皮在匀浆处理的过程中，采用不同的方式处理猪皮，在匀浆处理的过程中猪皮未完全被打碎，主成分利多卡因不易被完全提取出来，皮内滞留量偏低，准确率偏低。而本发明将透皮试验后的猪皮加入0.1m
氢氧化钠溶液中，在70℃的温度下浸泡2h，浸泡后，使用匀浆机在6000rpm的条件下进行匀浆处理1分钟，猪皮在匀浆处理的过程中容易被打碎，猪皮呈现完全溶解状态，主成分利多卡因容易被提取出来，皮内滞留量偏高，测试结果更加准确。
69.实施例2药物稳定性考察
70.由于在猪皮处理过程中，采用0.1m氢氧化钠溶液和70℃的高温处理猪皮，涉及强碱与高温两个剧烈条件，为了考察其对主药稳定性的影响，进行破坏试验。
71.取利多卡因原料约10mg，加甲醇溶解后用生理盐水稀释制成每1ml含0.05mg的溶液，作为未破坏溶液；另取利多卡因原料约10mg，置20ml量瓶中，加0.1m氢氧化钠溶液5ml加热至70℃浸泡2小时后，用甲醇稀释至刻度，精密量取1ml置10ml量瓶中，用生理盐水稀释至刻度，摇匀，作为破坏溶液。按实施例1中的高效液相色谱条件测定，精密量取上述对照品溶液与未破坏及破坏溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，测定利多卡因含量，结果见表2。
72.表2破坏处理测定结果
73.内容含量(％)含量比值(％)未破坏溶液98.1/破坏溶液98.8100.7
74.结果分析：由表2可见，以未破坏溶液含量值为100.0％，破坏溶液含量与其比值为100.7％，表明利多卡因在0.1m氢氧化钠溶液中加热至70℃浸泡2小时后稳定，可将其作为猪皮处理方式的条件。
75.实施例3不同体外透皮试验
76.按照实施例1中的高效液相色谱条件测定不同时间点的渗透量、膏体残留量、表皮残留量和皮内滞留量。
77.1、渗透量
78.取利多卡因凝胶贴(批号：210513321)和参比制剂(teikoku pharma usa inc)各6片，裁取2cm
×
2cm的方形贴片，称重；取厚度均一的猪皮裁成圆形，其面积为4.9063cm2(确保覆盖实际液体接触面，并与接收面外圈相切合)；于透皮介质(生理盐水)中浸泡30分钟，猪皮称重，以便折算实际液体接触面猪皮重量，计算皮内滞留量(单位重量皮肤内的药物含量，按mg/g表示)，与参比制剂进行对比。在franz扩散池中进行透皮试验，参数条件同实施1。
79.照上述方法进行试验，运行两次，每次自制品和参比制剂各3个交叉放置，并且第二次运行与第一次自制品与参比制剂交换位置，以消除系统差异。取每一片自制品与参比制剂进行透皮试验完成后的透皮介质，过滤，作为供试品溶液，按各时间点取样测定；另取利多卡因对照品，加混合流动相(流动相a和流动相b的比例为35:65)溶解，并用生理盐水稀释制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液。按照实施例1中的高效液相色谱条件进行检测，单位面积渗透量数据见表3，平均渗透率比见表4，渗透曲线见图1。
80.表3自制制剂与参比制剂单位面积渗透量数据汇总(n＝6)
[0081][0082]
表4自制制剂与参比制剂平均渗透率对比
[0083][0084][0085]
注：渗透率＝单位面积累积渗透量/时间的平方根
[0086]
结果分析：由上表3和4可见，自制制剂与参比制剂的平均渗透率之比在0.7～1.3范围内，结果符合要求，并且自制制剂的渗透率的变动(15.1～23.4)小于参比制剂渗透率的变动(23.4～38.5)。
[0087]
2、表皮残留量
[0088]
透皮试验后的猪皮，采用甲醇浸湿后的脱脂棉花擦拭整个猪皮表面，将擦试后的脱脂棉花所得的挤出液加入5ml量瓶中，用甲醇多次洗涤挤出后脱脂棉花，所得洗涤液转移至量瓶中，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到表皮残留透皮试验的供试品溶液。
[0089]
取利多卡因对照品，加混合流动相(流动相a和流动相b的比例为35:65)溶解，并用生理盐水稀释制成每1ml约含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；按照实施例1中的高效液相色谱条件进行测定，计算表皮残留量。表皮残留量结果见表5。
[0090]
表5表皮残留量数据汇总
[0091][0092][0093]
结果分析：由上表5数据可见，利多卡因凝胶贴膏透皮试验猪皮表皮残留量自制品与参比制剂基本一致。
[0094]
3、皮内滞留量
[0095]
将透皮试验后的猪皮，加入5ml 0.1m氢氧化钠溶液中，在70℃的温度下浸泡2h，浸泡后，使用匀浆机在6000rpm的条件下进行匀浆处理1分钟，所得混悬液转移至20ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液过滤，取续滤液作为皮内滞留的供试品溶液。取利多卡因对照品，加混合流动相(流动相a和流动相b的比例为35:65)溶解，并用生理盐水稀释制成每1ml约含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；按照实施例1中高效液相色谱条件进行测定，计算皮内滞留量。皮内滞留量结果见表6。
[0096]
表6皮内滞留量数据汇总
[0097][0098]
注：接收面猪皮重量，将猪皮重量按照接收面积(1.1304cm2)折算。
[0099]
结果分析：由上表6数据可见，利多卡因凝胶贴膏透皮试验猪皮皮内滞留量自制品与参比制剂基本一致。
[0100]
4、膏体残留量
[0101]
由于皮内滞留测试时，猪皮在匀浆处理的过程中被打碎，对离心后所得的凝胶贴
方形片进行膏体残留量的体外透皮试验，包括如下步骤：取出离心后得到的凝胶贴方形片置于研钵中，加甲醇浸泡约1小时，再加入甲醇分次研磨利多卡因溶解，转移至100ml量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液3ml，置10ml量瓶中，用生理盐水稀释至刻度，摇匀，作为膏体残留量透皮试验的供试品溶液。
[0102]
对照品溶液同用皮内滞留量项下。膏体残留量结果见表7。
[0103]
表7药物残留量数据汇总
[0104][0105]
结果分析：由上表7数据可见，利多卡因凝胶贴膏透皮试验自制品膏体残留量与参比制剂基本一致。
[0106]
5、物料平衡
[0107]
由上述所得的渗透量、皮内滞留量、表面残留量、膏体残留量的结果，按物料平衡(％)＝(渗透量+膏体残留量+表皮残留量+皮内滞留量)
÷
试验贴膏的理论含量，进行物料平衡计算，结果见表8。上述公式中试验贴膏的理论量按照试验所裁取的凝胶贴膏含膏量进行标示量折算，其含膏量测定方法如下：取利多卡因凝胶贴用剪刀裁成2cm
×
2cm的方形贴片，初始贴膏称重(w1)，去除防粘膜，在相同的条件下进行透皮试验后，取出残留膏体，待膏体残留供试品处理结束后，将衬布清洗干净，与对应盖衬层一并称重(w2)，含膏量(w3)＝w
1-w2，则试验贴膏的理论量＝裁取贴膏的含膏量
÷
理论含膏量(14g)
×
理论主药量(700mg)。
[0108]
表8物料平衡结果
[0109]
[0110][0111]
结果分析：由上表8可见，自制品与参比制剂物料平衡均在90％～110％范围内，物料基本守恒。
[0112]
6、体外透皮试验结论
[0113]
利多卡因凝胶贴(批次：210513321)与参比制剂进行体外透皮试验，利用franz扩散法的双次交叉试验，结果自制制剂与参比制剂体外透皮的各个指标(渗透率之比、渗透率变动、表皮残留量、皮内滞留量、膏体残留以及物料平衡)基本一致，符合《化学自制药透皮贴剂药学研究及时指导原则》要求，结果表明自制制剂与参比制剂体外透皮相似。
[0114]
实施例4体外透皮试验参数条件的筛选
[0115]
1、透皮介质的筛选
[0116]
取参比制剂各6片，每片裁剪出2cm
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2cm的方形片，共6小片，备用；取猪皮照透皮杯接受面大小进行裁剪，将裁剪好的猪皮于各透皮介质中浸泡30分钟取出，将表面用棉布擦干；将凝胶贴方形片除去防粘膜，粘着面贴于猪皮表面，在franz扩散池中进行透皮试验，透皮介质为生理盐水、ph4.0醋酸盐缓冲液、ph7.4磷酸盐缓冲液和ph8.0磷酸盐缓冲液；透皮介质的体积为14.5ml；透皮介质的温度为32℃；转速为500rpm；透皮介质的接触面积为1.1304cm2。取样时间为0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、10小时、24小时。
[0117]
取透皮试验完成后的不同透皮介质，过滤，作为供试品溶液，采用高效液相色谱方法进行测定，色谱条件包括：色谱柱为inertsustion c18(4.6
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250mm，5μm)；流速为1ml/min；进样量为20μl；检测波长为230nm；采用流动相a和流动相b为混合流动相进行等度洗脱，流动相a和流动相b的比例为35:65；所述流动相a为3％冰乙酸溶液，采用氢氧化钠调节ph值至5.5；所述流动相b为甲醇。
[0118]
取利多卡因对照品，加混合流动相(流动相a和流动相b的比例为35:65)溶解，并用生理盐水稀释制成每1ml约含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；按照上述提及的色谱条件进行测定，计算单位面积累积渗透量，结果见表9。
[0119]
表9各介质单位面积累积渗透量数据汇总(n＝6)
[0120][0121]
结果分析：由上述表9可见，生理盐水各时间点累积渗透量的rsd较其他渗透介质小，故采用生理盐水介质进行本品的体外透皮试验。
[0122]
另外，试验测得利多卡因在生理盐水中饱和溶解度为3.2mg/ml，假设透皮试验介质接触面积(s＝1.1304cm2)中利多卡因(5.6mg)完全透过猪皮，则药物进入接收池(14.5ml)中浓度约为0.4mg/ml，拟定的介质体积满足漏槽条件。同时考虑到生理盐水对猪皮刺激性较小，皮肤的屏障层不受损害。
[0123]
综上，利多卡因凝胶贴体外透皮介质选择生理盐水。
[0124]
2、透皮转速选择
[0125]
取利多卡因凝胶贴参比制剂，每片裁剪出2cm
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2cm的方形片，照上述透皮试验方法及franz扩散池参数条件，透皮介质采用生理盐水介质，转速分别采用200转/分钟、500转/分钟，计算单位面积累积渗透量；考察渗透稳态状态的到达时间，绘制单位面积累积渗透量—时间平方根线性图，照上述高效液相色谱法进行检测，结果见表10。渗透量见图1和图2。
[0126]
表10不同转速单位面积累积渗透量数据汇总(n＝6)
[0127][0128][0129]
结果分析：转速为200转/分钟、500转/分钟均有缓慢透过的趋势，相比而言，500转/分钟的各点透过量rsd更小一些；两种转速在6小时至10小时的渗透量，均能成线性，表示6小时后能达到渗透率稳态。试验综合考虑，转速拟采用500转/分钟。
[0130]
3、透皮试验时间的考察
[0131]
取利多卡因凝胶贴(批号：201124321)与参比制剂各6贴，每贴裁剪2cm
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2cm方形贴片，照上述透皮试验方法，采用同一个扩散设备(6个扩散池)运行两次，每次自制品和参比制剂各3个交叉放置，并且第二次运行与第一次自制品与参比制剂交换位置，以消除系统差异。
[0132]
单位面积渗透量结果见表11，通过绘制每一个接收池测得的单位面积渗透量与相应的时间平方根绘制曲线，考察透皮速率达稳态的时间点，渗透量-线形图参见图3。
[0133]
表11自制制剂与参比制剂单位面积渗透量数据汇总(n＝6)
[0134][0135]
由表11和图3可以看出，在透皮6小时～12小时，自制品和参比制剂均渗透率达稳态；到24小时可能由于透皮试验的时间较长，猪皮通透性变高，使得药物渗透量又开始非线性增长，不受控。
[0136]
由图3可见，各线性图6小时以后单位面积渗透量与时间平方根呈良好线性关系，自制表明自制品与参比制剂均在6小时以后渗透率达到恒定，试验平均渗透率的判定时间点拟定为6小时的点以及渗透速率一半的点(3小时的点)。体外透皮试验时间规定为总共取样6小时。
[0137]
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可能对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。