一种磁珠稀释液、磁微粒试剂、即时检测化学发光试剂盒的制作方法

本技术涉及免疫检测领域，具体涉及一种磁珠稀释液、磁微粒试剂、即时检测化学发光试剂盒。

背景技术：

1、磁微粒化学发光免疫分析技术源于上世纪70年代，发展至今已经成为一种成熟的、高灵敏、高特异免疫分析技术，其检测灵敏度和精确度显著优于酶联免疫法、荧光法层析法，可以完全替代放射免疫分析。其灵敏度高、特异性强、试剂效期长、检测速度快、检测范围宽、操作简单、易于自动化等优点，深受广大临床检验人员认可。

2、目前，主流大型医院临床免疫检测多采用大型全自动化学发光检测设备。在检测过程中，涉及多个检测项目或同一个项目存在多个试剂组分，不同组分共用同一加样针，可能导致检测中存在清洗不彻底而相互污染风险，同时影响了检测效率。因此小型化学发光检测设备或称即时检测poct化学发光检测设备及其配套试剂盒需求日趋增加。小型磁微粒化学发光检测仪器配套单人份试剂条(即每个样本对应一个试剂条)，试剂条的孔内封装有磁微粒、反应试剂和洗液等组分，以满足基层医院或科室床旁样本检测的需求。

3、单人份的化学发光试剂大多采用将免疫检测所需试剂组分预分装于试剂条各组分孔中，如磁微粒(偶联抗原或抗体)、标记抗体或抗原、样本稀释液、工作洗液、发光底物液或发光触发液等。由于磁微粒存在长期放置易于沉降、而单人份发光试剂条不便于采用震荡方式将磁微粒充分悬浮后再吸取加样，试剂生产企业多采用tip头吸取其他组分(如样本或稀释后的样本、标记抗体或抗原)加入至磁微粒孔内，进行免疫反应，然后通过磁分离洗涤掉未参与免疫反应的组分。

4、由于参与免疫反应的磁颗粒体积较小(50-100ul)，试剂条在运输过程存在搬运、装车或卸车等活动导致磁珠粘于管壁或上侧铝箔封条上，从而导致样本检测中参与免疫反应的磁微粒数量不同，引起即使同一份样本检测而检测结果不一致现象，表现为试剂重复性或批间差无法满足产品技术要求的标准，从而引起患者误诊、耽搁患者早期诊断或治疗。

技术实现思路

1、为了提高检测精密度，本技术提供种一种磁珠稀释液、磁微粒试剂、即时检测化学发光试剂盒。

2、第一方面，本技术提供了一种磁珠稀释液，采用如下的技术方案：

3、一种磁珠稀释液，包括,

4、a组分：tris-hcl缓冲液、甘油、防腐剂，

5、以磁珠稀释液的总体积为100％计，所述甘油的体积百分比为10-40％，所述防腐剂的体积百分比为0.08-0.2％；

6、b组分：氯化钠、明胶、非还原性双糖，

7、所述氯化钠在磁珠稀释液中的浓度为8-100g/l，所述明胶在磁珠稀释液中的浓度为3-20g/l，所述非还原性双糖在磁珠稀释液中的浓度为3-10g/l。

8、优选的，一种磁珠稀释液，包括,

9、a组分：tris-hcl缓冲液、甘油、防腐剂，

10、以磁珠稀释液的总体积为100％计，所述甘油的体积百分比为10-30％，所述防腐剂的体积百分比为0.1-0.2％；

11、b组分：氯化钠、明胶、非还原性双糖，

12、所述氯化钠在磁珠稀释液中的浓度为9-100g/l，所述明胶在磁珠稀释液中的浓度为5-20g/l，所述非还原性双糖在磁珠稀释液中的浓度为5-10g/l，

13、使用tris-hcl缓冲液补充体积至100％。

14、氯化钠、甘油、明胶和非还原性双糖的加入，建立了储存条件(2-8℃)下粘度较强、温育温度(37℃)下粘度较弱的磁珠稀释液，使用这种磁珠稀释液配置的磁微粒试剂具有储存或运输条件(2-8℃)下粘度较强，温育温度(37℃，即样本检测时的反应温度)下粘度较弱的优点，减少了试剂条在运输过程因搬运、装车或卸车等活动导致磁珠粘于上侧管壁或上侧铝箔封条上，从而导致样本检测中因参与免疫反应的磁微粒数量不同而引起试剂条检测结果精密性降低问题。进一步的可以为临床客户提供灵敏度高、特异性好、精密性高的即时检测化学发光试剂，避免因精密性低而引起患者误诊，从而耽搁患者早期诊断或治疗。

15、进一步的，通过调整氯化钠、甘油、明胶和非还原性双糖的用量，从而获得了储存条件(2-8℃)下粘度不小于4.6pa·s、温育温度(37℃)下粘度不大于1.9pa·s的磁珠稀释液。

16、优选的，所述氯化钠在磁珠稀释液中的浓度为8-100g/l；

17、在本技术的一些实施方案中，每百毫升磁珠稀释液中，氯化钠含量可以为0.8g、0.9g、1.0g、1.2g、2g、5g、8g或10g；

18、更优选的，每百毫升磁珠稀释液中，氯化钠含量为0.9g。

19、随着氯化钠含量的增加，磁珠稀释液的粘度逐渐增高，但过高的离子浓度可能会影响蛋白质的溶解度和抗原抗体的免疫反应。

20、优选的，所述甘油占磁珠稀释液总体积的10-40％；

21、在本技术的一些实施方案中，每百毫升磁珠稀释液中，甘油含量为10ml、20ml、30ml或40ml；

22、优选的，所述明胶在磁珠稀释液中的浓度为3-20g/l；

23、在本技术的一些实施方案中，每百毫升磁珠稀释液中，明胶含量可以为0.3g、0.5g、1.0g或2.0g；

24、更优选的，所述明胶在磁珠稀释液中的浓度为5g/l。

25、明胶和甘油的加入可以提高磁珠稀释液的粘度，从而使得磁珠稀释液在低温下处于高粘度状态，进而减少磁珠在搬运过程中粘附在试剂条上侧管壁或上侧铝箔封条上，从而在取样时可以更准确的取得所需的磁珠用量，进而提高了检测的准确性。

26、优选的，所述海藻糖在磁珠稀释液中的浓度为3-10g/l；

27、在本技术的一些实施方案中，每百毫升磁珠稀释液中，海藻糖含量可以为0.3g、0.5g、0.7g或1.0g。

28、更优选的，所述海藻糖在磁珠稀释液中的浓度为5g/l。

29、优选的，所述tris-hcl缓冲液浓度为150-250mm；

30、更优选的，所述tris-hcl缓冲液浓度为200mm。

31、优选的，所述tris-hcl缓冲液ph为7.5-8.5。

32、更优选的，所述tris-hcl缓冲液ph为8。

33、在本技术的一种实施方案中，所述tris-hcl缓冲液浓度为200mm，ph为8。

34、所述防腐剂为proclin300。

35、防腐剂的加入，延长了磁珠稀释液的保藏时间，并且提高了存放在磁珠稀释液中的抗原或抗体的稳定性。

36、一种磁珠稀释液的制备方法，包括以下步骤，

37、s1按配方量加入tris-hcl缓冲液、甘油、防腐剂，搅拌均匀，

38、s2随后向s1所得液体中加入氯化钠、明胶、海藻糖，搅拌均匀即得所述磁珠稀释液。

39、第二方面，本技术提供磁微粒试剂，采用如下的技术方案：

40、一种使用上述磁珠稀释液配置的磁微粒试剂，所述磁微粒试剂还包括偶联磁珠的抗体或抗原。

41、一种磁微粒试剂，是将偶联磁珠的抗体或抗原溶解在磁珠稀释液中配置而成的。偶联磁珠的抗体或抗原在磁微粒试剂中的浓度为0.1-10ug/ml。

42、在本技术几种实施方案中，偶联磁珠的抗体或抗原在磁微粒试剂中的浓度可以是0.1ug/ml、0.2ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、2ug/ml、5ug/ml或10ug/ml。

43、偶联磁珠的抗体或抗原经过磁珠稀释液稀释后，可以储存于试剂条中，并且由于偶联磁珠稀释剂中使用氯化钠、甘油、明胶、海藻糖对于磁珠稀释剂的粘度进行了调整，从而减少了试剂条内的磁珠在搬运、装车、卸车等活动的影响下，磁珠粘附在试剂条的上侧管壁或上侧铝箔封条的情况，从而提高了样本检测时，磁珠数量的均匀性，降低了由于磁珠数量随机差异而影响试剂条检测结果精密性的情况。

44、优选的，所述磁微粒试剂中磁微粒试剂磁珠浓度为100-200μg/ml，磁珠上偶联myo抗体浓度为0.2-10μg/ml。

45、第三方面，本技术提供即时检测化学发光试剂盒采用如下的技术方案：

46、一种即时检测化学发光试剂盒，包括试剂条，试剂条中装载有标记抗体或抗原试剂、磁微粒试剂；

47、所述磁微粒试剂使用的是上文所述的磁微粒试剂。

48、优选的，即时检测化学发光试剂盒还包括样本稀释液、化学发光底物液、工作洗液。

49、所述样本稀释液包括tris-hcl缓冲液、nacl、防腐剂、np40、吐温、甘油、新生牛血清。

50、优选的，所述样本稀释液包括tris-hcl缓冲液、nacl、proclin300、np40、吐温20、甘油、新生牛血清。

51、以样本稀释液的总体积为100％计，proclin300 0.08-0.12v％、np40 0.5-1.5v％、tw-200.08-1.2v％、甘油8-15v％、新生牛血清8-12v％；使用tris-hcl缓冲液补充余量；

52、tris-hcl缓冲液的浓度为180mm-220mm，ph为7.5-8.5；

53、每百毫升样本稀释液中nacl含量为0.8-100g。

54、在本技术的一些较优的实施方案中，按样本稀释液的总体积为100％计，proclin3000.1v％、np40 1v％、tw-20 0.1v％、甘油10v％、新生牛血清10v％；使用tris-hcl缓冲液补充余量；

55、tris-hcl缓冲液的浓度为200mm，ph为8.0；

56、每百毫升样本稀释液中nacl含量为0.9g。

57、优选的，以工作洗液的总体积为100％计，工作洗液包括0.5％体积的tw-20、0.1％体积的proclin300、氯化钠，最后用200mm ph8.0的tris-hcl缓冲液补充余量配置而成，每百毫升工作洗液中氯化钠的含量为0.9g。

58、优选的，所述标记抗体或抗原试剂为使用标记物稀释液按比例稀释的alp标记的抗体或抗原。

59、更优选的，所述标记物稀释液包括tris-hcl缓冲液、nacl、防腐剂、稳定剂、np40、甘油、新生牛血清；

60、以标记物稀释液的总体积为100％计，所述防腐剂用量0.08-0.12v％，稳定剂8-12v％，np400.5-1.5v％，甘油8-12v％、新生牛血清8-12v％；

61、所述nacl在标记物稀释液中的浓度为0.8-1.2g/l。

62、标记抗体或抗原试剂中alp标记的抗体或抗原的浓度为0.1-10μg/ml。

63、在本技术的一些实施方案中，alp标记的抗体或抗原的浓度可以是0.1μg/ml、0.2μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml或10μg/ml。

64、一种即时检测化学发光试剂盒，包括试剂条，试剂条上开设有至少一个样本孔，至少一个稀释液试剂孔、至少一个工作洗液试剂孔、至少一个酶标试剂孔、至少一个磁微粒试剂孔、至少一个发光底物液试剂孔。试剂条上还设置有避光检测杯，用于检测化学发光信号。

65、样本孔用于装载测试样本，稀释液试剂孔装载有样本稀释液，工作洗液试剂孔装载有工作洗液、酶标试剂孔装载有标记抗体或抗原试剂、磁微粒试剂孔装载有磁微粒试剂、发光底物液试剂孔装载有化学发光底物液。

66、第四方面，本技术提供一种即时检测化学发光检测方法

67、一种即时检测化学发光检测方法：取50-100ul血清样本，根据项目需求确定是否使用样本稀释液对血清样本预稀释；将样本(或预稀释样本)、标记抗体或抗原试剂加入装有磁微粒试剂的试剂孔中，进行抗原抗体反应(温育)，形成抗原抗体复合物，经洗涤后，含标记物的抗原抗体复合物加入到试剂孔中，催化发光底物发光或触发底物发光，检测光信号rlu值并根据化学发光检测设备内置校准曲线计算出待检样本中目标物质的含量。

68、综上所述，本技术具有以下有益效果：

69、氯化钠、甘油、明胶和海藻糖的加入，建立了储存条件(2-8℃)下粘度较强、温育温度(37℃)下粘度较弱的磁珠稀释液，使用这种磁珠稀释液配置的磁微粒试剂具有储存条件(2-8℃)下粘度较强，温育温度(37℃)下粘度较弱的优点，减少了试剂条在运输过程因搬运、装车或卸车等活动导致磁珠粘于上侧管壁或上侧铝箔封条上，从而导致样本检测中因参与免疫反应的磁微粒数量不同而引起试剂条检测结果精密性降低问题。