一种图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法与流程

1.本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法。


背景技术：

2.图卡替尼(tucatinib)，又名妥卡替尼，是一种小分子酪氨酸激酶抑制剂，可以用于联合曲妥珠抗体和卡培他滨用于治疗无法通过手术切除或者已经转移的晚期人类表皮生长因子受体阳性乳腺癌患者。
3.pct专利申请wo2007059257中公开了一种图卡替尼的制备方法，其包括如下反应步骤：
[0004][0005]
在该步骤中，不可避免地会产生一定量的咪唑杂质。然而，咪唑杂质会在后续的反应步骤中与其他反应原料发生反应，从而影响最终的反应收率。因此，需要对该步反应的产物中的咪唑含量进行有效的监控。
[0006]
然而，现有技术中，未有能够有效分离该图卡替尼中间体及咪唑的分析方法报道。


技术实现要素：

[0007]
本发明是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种能够有效分离图卡替尼中间体及咪唑且能够对咪唑进行定量分析的图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法。
[0008]
本发明提供了一种图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法，用于使用液相色谱法分离图卡替尼中间体以及咪唑，并对咪唑的含量进行检测，图卡替尼中间体的结构式为：具有这样的特征，包括：液相色谱法包括如下液相条件：色谱柱为waters atlantis t3色谱柱或效能相当色谱柱；流动相a为磷酸水溶液，流动相b为乙腈，流动相洗脱方式为线性梯度洗脱，洗脱时长为16min-30min，在第一时间段中，流动相a与流动相b的体积比为(95-98)：(2-5)，在第二时间段中，流动相a与流动相b的体积比为(2-5)：(95-98)，在第三时间段中，流动相a与流动相b的体积比为(95-98)：(2-5)。
[0009]
在本发明提供的图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，流动相a为0.1％磷酸水溶液。
[0010]
在本发明提供的图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，供试品浓度为0.5mg/ml-1.5mg/ml。
[0011]
在本发明提供的图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法中，还可以具有这样的特
征：其中，稀释剂为乙腈与水的体积比为(5-6)：(4-5)的混合溶液。
[0012]
在本发明提供的图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，检测器为紫外检测器，检测波长为210nm-250nm。
[0013]
在本发明提供的图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，第一时间段为0min-5.0min，第二时间段为8.0min-11.0min，第三时间段为11.1min-16.0min。
[0014]
在本发明提供的图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，流速为0.5ml/min-1.5ml/min。
[0015]
在本发明提供的图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，柱温为25℃-40℃。
[0016]
发明的作用与效果
[0017]
根据本发明所涉及的图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法，因为采用了液相色谱法，流动相洗脱方式为线性梯度洗脱，且在不同的洗脱时段使用了不同比例的流动相，所以，本发明不仅能够有效分离图卡替尼中间体及咪唑，还能对咪唑进行定量分析。
附图说明
[0018]
图1是本发明的实施例1中图卡替尼中间体样品进行检测的液相色谱图；
[0019]
图2是图1中a区域的局部放大图；
[0020]
图3是本发明的实施例1提供的液相条件的线性方程图；
[0021]
图4是本发明的对比例中图卡替尼中间体样品进行检测的液相色谱图；
[0022]
图5是图2中a区域的局部放大图。
具体实施方式
[0023]
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，以下结合实施例及附图对本发明作具体阐述。
[0024]
在下述实施例中，除另有说明外，所使用的流动相、稀释剂、洗针液等均为市售的色谱纯产品。
[0025]
在下述实施例中，除另有说明外，图卡替尼中间体样品为参照pct专利申请wo2007059257记载的方法自行制备。
[0026]
《实施例1》
[0027]
图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法
[0028]
本实施例提供了一种图卡替尼中间体的杂质含量的高效液相检测方法，具体的色谱条件如表1所示。
[0029]
表1色谱条件
[0030][0031][0032]
采用表1记载的色谱条件对图卡替尼中间体样品进行检测，检测结果的液相色谱图以及局部放大图分别如图1-2所示。
[0033]
如图1-2所示，图卡替尼中间体峰与咪唑峰能够很好地分离，两者分离度达到54.8，且两者的峰峰型良好，不存在其他杂峰干扰，可以实现对咪唑的定量分析。
[0034]
按照表1中的仪器工作条件对1.0mg/l的样品溶液进行测定，以10倍信噪比计算测定下限，咪唑的测定下限为0.5μg/ml，换算成样品中物质的质量分数计，其测定下限为0.05％，满足图卡替尼中间体中杂质的检测技术标准要求。
[0035]
《实施例2》
[0036]
系统适用性
[0037]
本实施例针对实施例1提供的液相方法进行系统适用性测试。具体测试方法为：取咪唑对照品溶液连续进样6针。在本实施例中，咪唑对照品样品溶液的配制方法为：精密称取50mg咪唑对照品，置50ml容量瓶中，用稀释剂溶解，必要时超声，定容至刻度，摇匀，作为咪唑-stock-01；精密移取上述咪唑-stock-01溶液1ml，置200ml容量瓶，用稀释剂稀释，定容至刻度，摇匀，即得。标记为std01。同法配置平行2份，标记为std02。移取std01，std02溶液置进样小瓶，std01连续进样6次，std02进样1次。
[0038]
测试结果如表3所示。
[0039]
表3系统适用性测试结果
[0040][0041]
如表3所示，咪唑峰保留时间的rsd为0.00％(≤2％)，峰面积的rsd为0.24％(≤2％)；std02进样1针的rf值/std01连续进样前6针的平均rf值为99.96％(98-102％)，因此实施例1提供的液相方法具有良好的系统适用性。
[0042]
《实施例3》
[0043]
检测限与定量限
[0044]
本实施例针对实施例1提供的液相方法进行检测限和定量限的测试。分别配制了lod溶液和loq溶液进行了测试。
[0045]
在本实施例中，咪唑loq溶液的配制方法为：精密移取实施例2中咪唑-stock-01溶液1ml，置10ml的容量瓶，用稀释剂稀释，定容至刻度，摇匀，作为咪唑-loq-stock-01；精密移取上述咪唑-loq-stock-01溶液1ml，置200ml容量瓶，用稀释剂稀释，定容至刻度，摇匀，即得，标记为loq。
[0046]
在本实施例中，咪唑lod溶液的配制方法为：精密移取实施例2中std溶液1ml，置于25ml的容量瓶，用稀释剂稀释，定容至刻度，摇匀，标记为lod。
[0047]
测试结果如表4所示。
[0048]
表4检测限与定量限结果
[0049][0050]
如表4所示，检测限溶液中咪唑峰的s/n为32.9(s/n≥3)；定量限溶液中咪唑峰的s/n为98.3(s/n≥10)；定量限溶液，连续进样6针，咪唑峰面积的rsd为0.73(≤2％)。
[0051]
《实施例4》
[0052]
准确度测试
[0053]
本实施例针对实施例1提供的液相方法进行准确度的测试。分别配制了spl溶液、loq-spl溶液以及std-spl溶液进行了测试。
[0054]
在本实施例中，spl溶液的配制方法为：精密称取50mg供试品，置50ml容量瓶，用稀释剂溶解，必要时超声，定容至刻度，摇匀，即得。标记为spl溶液。
[0055]
在本实施例中，loq-spl溶液的配制方法为：精密称取50mg供试品，置50ml容量瓶，用实施例3中loq溶液稀释剂溶解，必要时超声，定容至刻度，摇匀，即得。标记为loq-spl溶液。
[0056]
在本实施例中，std-spl溶液的配制方法为：精密称取50mg供试品，置50ml容量瓶，用实施例2中std溶液稀释剂溶解，必要时超声，定容至刻度，摇匀，即得。标记为std-spl溶液。
[0057]
测试结果如表5-6所示。
[0058]
表5准确性测试结果1
[0059][0060]
表6准确性测试结果2
[0061][0062]
如表6所示，咪唑在loq水平的加标回收率为100.67％；在std水平的加标回收率为98.40％。
[0063]
《实施例5》
[0064]
线性范围的测定
[0065]
本实施例对实施例1提供的液相方法测定了其线性范围，本实施例分别配制了体积分数为0.02％、0.05％、0.1％、0.4％、0.6％、1.0％的咪唑水溶液。
[0066]
测试结果分别如表7以及图5所示。
[0067]
表7线性范围数据表
[0068][0069][0070]
如表7以及图3所示，在实施例提供的液相方法中，咪唑在0.0002mg/ml-0.0105mg/ml的范围内，r2＝1.0000≥0.990，因此保持有良好的线性。
[0071]
《对比例》
[0072]
图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法
[0073]
本对比例提供了一种图卡替尼中间体的杂质含量的高效液相检测方法，具体的色谱条件与实施例1记载的检测方法基本相同，其区别点仅在于梯度洗脱过程中的使用的梯度不同。本对比例所使用的梯度如表8所示。
[0074]
表8梯度洗脱表
[0075][0076]
采用表8记载的色谱条件对图卡替尼中间体样品进行检测，检测结果的液相色谱图以及局部放大图分别如图4-5所示。
[0077]
如图4-5所示，虽然本对比例提供的检测方法也能够有效分离图卡替尼中间体和咪唑杂质，但是咪唑峰明显存在杂峰干扰，所以无法对咪唑进行定量分析。
[0078]
实施例的作用与效果
[0079]
根据上述实施例所涉及的图卡替尼中间体的杂质含量的检测方法，因为采用了液相色谱法，流动相洗脱方式为线性梯度洗脱，且在不同的洗脱时段使用了不同比例的流动相，所以，上述实施例不仅能够有效分离图卡替尼中间体及咪唑，还能对咪唑进行定量分析。
[0080]
上述实施方式为本发明的优选案例，并不用来限制本发明的保护范围。