一种黄芪桂枝五物汤制剂的质量控制方法与流程

一、本发明涉及中药，特别是涉及一种黄芪桂枝五物汤制剂的质量控制方法。

背景技术：

0、二、背景技术

1、黄芪桂枝五物汤源于张仲景《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》，为桂枝汤的化裁方，乃桂枝汤倍生姜、去甘草、加黄芪而成。原方主治血痹证，有益气温经，和经通痹之功。具有确切疗效，被收录在2018年4月份国家公布的《古代经典名方目录(第一批)》中，表明该方具有较高的开发应用价值。

2、黄芪桂枝五物汤的临床应用范围较广泛，同时，亦取得令人满意的疗效。在临床各科的应用不仅局限于内服，在外敷上也取得一定疗效，这在一定程度上体现出本方配伍精准。近15年来黄芪桂枝五物汤的临床应用范围进一步拓展，尤其是在治疗周围神经病变方面疗效显著。黄芪桂枝五物汤所治疗疾病的范围虽广，但总以气虚寒凝血瘀为基本病机，体现了中医学“异病同治”的原理。黄芪桂枝五物汤在临床广泛的应用，使传统方剂和现代医学有机地结合起来，更好地服务于临床，提高疾病的治愈率，减轻患者的痛苦，满足临床需要。

3、现代药理研究发现，黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷主要用于提高免疫功能，增强抗氧化、抗辐射和抗癌作用，保护心脑血管、肝脏、肾脏和肺脏作用，保护脑细胞、提高记忆力，舒张血管平滑肌，激素样作用，抗菌及抑制病毒作用，降血脂、降血糖、减少糖尿病并发症等；白芍中芍药苷，具有扩张血管、镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热解痉、利尿的作用；桂枝中有机酸类成分以肉桂酸为主，具有抗氧化、抗血栓等作用；6-姜辣素抗氧化、抗细胞凋亡和抗炎作用；多糖具有抗氧化、增强免疫力、抗癌、保肝等作用。

技术实现思路

0、三、
技术实现要素：

1、本发明要解决的技术问题是提供一种黄芪桂枝五物汤制剂的制备方法及其质量控制方法，黄芪桂枝五物汤制剂的制备方法能提高黄芪桂枝五物汤制剂中芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、肉桂酸、6-姜辣素的含量；黄芪桂枝五物汤制剂的质量控制方法能利用高效液相色谱法同时测定黄芪桂枝五物汤制剂中芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、肉桂酸、6-姜辣素的含量；针对黄芪桂枝五物汤制剂建立了hplc特征图谱。

2、为实现上述目的，本发明的具体技术方案如下：一种黄芪桂枝五物汤制剂的制备方法，所述黄芪桂枝五物汤由下述原料药按重量份制成：黄芪2-4份、桂枝2-4份、白芍2-4份、生姜4-8份、大枣3-6份，原料药的优选重量比为：黄芪3份、桂枝3份、白芍3份、生姜6份、大枣4份。黄芪桂枝五物汤制剂由以下方法制备：(1)取黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣，加蒸馏水用闪式提取器提取2次，每次提取的加水量分别为黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣总重量的12-19倍量，提取时间为1.8-5.6min，提取温度为50℃，过滤，合并滤液，得药渣i和滤液a，备用；将药渣i加入9.5倍重量的体积浓度为95％的乙醇浸泡4h，过滤，得滤液b备用；取滤液a蒸馏收集挥发油，55℃减压浓缩至比重为1.05-1.21的浸膏，得挥发油c和浸膏d，备用；取挥发油c，加入7倍重量的β-环糊精研磨包合，冷冻干燥，粉碎成过100目筛的细粉，得β-环糊精包合物c，备用；取滤液b，50℃减压回收乙醇，减压浓缩成比重为1.02-1.19的浸膏，得浸膏e，冷冻干燥，粉碎成过200目筛的提取物极细粉，得提取物极细粉a，备用；取浸膏d，以孔径为10000分子量的卷式膜过滤，滤液减压回收溶剂，减压浓缩至25℃时比重为1.13的浸膏，冷冻干燥，粉碎成过200目筛的提取物极细粉，得提取物极细粉b，备用；取提取物极细粉a、提取物极细粉b、β-环糊精包合物c混合均匀，加辅料制备成中药制剂。

3、本发明制备的黄芪桂枝五物汤制剂中芍药苷的含量不低于175.72mg/g(hplc法测定)、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量不低于3.78mg/g(hplc法测定)、肉桂酸的含量不低于10.65mg/g(hplc法测定)、6-姜辣素的含量不低于8.2mg/g(hplc法测定)、总挥发油含量不低于0.1％(ml/g)(按照2015版《中国药典》(四部)附录2204挥发油测定法乙法测定总挥发油含量)。

4、2015版《中国药典》(四部)附录2204挥发油测定法乙法：取水约300ml与玻璃珠数粒，置烧瓶中，连接挥发油测定器。自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时止，再用移液管加人二甲苯1ml，然后连接流冷凝管。将烧瓶内容物加热至沸腾，并继续蒸馏，其速度以保持冷凝管的中部呈冷却状态为度。30分钟后，停止加热，放置15分钟以上，读取二甲苯的容积，取供试品适量(相于含挥发油0.5～1.0ml)，称定重量(准确至0.01g)，置烧瓶中，加水300～500ml(或适量)与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时止。置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热至沸腾，并持微沸约5小时，至测定中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止。放置1小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，自油层量中减去二甲苯量，即挥发油量，再计算供试品中挥发油的含量(％)。

5、本发明针对黄芪桂枝五物汤制剂建立了特征图谱及5种成分的含量测定方法，其中，芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、肉桂酸、6-姜辣素可利用hplc法同时测定，其特征在于，包括以下步骤：

6、步骤1，黄芪桂枝五物汤制剂供试品溶液的制备：取黄芪桂枝五物汤制剂样品适量，加70％甲醇适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，超声(250w，40khz)处理30min，放至室温，用70％甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

7、步骤2，混合对照品溶液的制备：精密称定芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷，肉桂酸和6-姜辣素对照品，置于容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液。

8、步骤3，黄芪桂枝五物汤制剂中4种成分含量的同时测定及特征图谱测定：将步骤1制备的黄芪桂枝五物汤制剂供试品溶液注入hplc进行分析，测定15批黄芪桂枝五物汤制剂样品中4种成分的含量及特征图谱。所述的黄芪桂枝五物汤制剂的特征图谱及4种成分同时测定的检测方法，其液相色谱条件为：乙腈(a)-0.2％甲酸水溶液(b)，梯度洗脱；检测波长278nm，柱温30℃，流速1.0ml/min，色谱柱thermo syncronis c18柱。

9、作为优选方案，所述的黄芪桂枝五物汤制剂的特征图谱及4种成分同时测定的检测方法，梯度洗脱程序如下：

10、

11、所述的黄芪桂枝五物汤物质基准及其制剂的特征图谱及4种成分同时测定的检测方法，所建立的特征图谱中，有12个共有峰。

12、在一些实施方式中，本发明提供一种黄芪桂枝五物汤制剂的制备方法及其质量控制方法，所述黄芪桂枝五物汤制剂的中药组合物由下述原料药按重量份制成：黄芪2-4份、桂枝2-4份、白芍24份、生姜4-8份、大枣3-6份，其特征在于，黄芪桂枝五物汤制剂由以下方法制备：(1)取黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣，加蒸馏水用闪式提取器提取2次，每次提取的加水量分别为黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣总重量的12-19倍量，提取时间为1.8-5.6min，提取温度为50℃，过滤，合并滤液，得药渣i和滤液a，备用；将药渣i加入9.5倍重量的体积浓度为95％的乙醇浸泡4h，过滤，得滤液b备用；取滤液a蒸馏收集挥发油，55℃减压浓缩至比重为1.05-1.21的浸膏，得挥发油c和浸膏d，备用；取挥发油c，加入7倍重量的β-环糊精研磨包合，冷冻干燥，粉碎成过100目筛的细粉，得β-环糊精包合物c，备用；取滤液b，50℃减压回收乙醇，减压浓缩成比重为1.02-1.19的浸膏，得浸膏e，冷冻干燥，粉碎成过200目筛的提取物极细粉，得提取物极细粉a，备用；取浸膏d，以孔径为10000分子量的卷式膜过滤，滤液减压回收溶剂，减压浓缩至25℃时比重为1.13的浸膏，冷冻干燥，粉碎成过200目筛的提取物极细粉，得提取物极细粉b，备用；取提取物极细粉a、提取物极细粉b、β-环糊精包合物c混合均匀，加辅料制备成中药制剂；所述中药制剂中芍药苷的含量不低于175.72mg/g、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量不低于3.78mg/g、肉桂酸的含量不低于10.65mg/g、6-姜辣素的含量不低于8.2mg/g、总挥发油含量不低于0.1％；黄芪桂枝五物汤制剂的特征图谱及芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、肉桂酸、6-姜辣素4种成分的含量同时测定的方法包括以下步骤：步骤1，黄芪桂枝五物汤制剂供试品溶液的制备：取黄芪桂枝五物汤制剂样品适量，加70％甲醇适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，250w，40khz超声处理30min，放至室温，用70％甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；步骤2，混合对照品溶液的制备：精密称定芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷，肉桂酸和6-姜辣素对照品，置于容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液；步骤3，黄芪桂枝五物汤制剂中4种成分含量的同时测定及特征图谱测定：将步骤1制备的黄芪桂枝五物汤制剂供试品溶液注入高效液相色谱仪进行分析，测定黄芪桂枝五物汤制剂样品中4种成分的含量及特征图谱；所述黄芪桂枝五物汤制剂的特征图谱是由12个共有峰构成，以对照品对照，3号峰为芍药苷、4号峰为毛蕊异黄酮葡萄糖苷、8号峰为肉桂酸、12号峰为6-姜辣素，以芍药苷为参照物，3号峰为参照峰，该标准对照特征图谱具有12个共有特征峰，以参照物峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值得±5％之内，规定值为峰1：0.28，峰2：0.56，峰3：1.00，峰4：1.19，峰5：1.35，峰6：1.52，峰7：1.76，峰8：2.36，峰9：2.39，峰10：2.61，峰11：2.87，峰12：3.00。

13、在一些实施方式中，在所述黄芪桂枝五物汤制剂的制备方法及其质量控制方法中，所述的黄芪桂枝五物汤制剂的中药组合物由下述原料药按重量份制成：黄芪2份、桂枝2份、白芍2份、生姜4份、大枣3份，其特征在于，黄芪桂枝五物汤制剂由以下方法制备：(1)取黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣，加蒸馏水用闪式提取器提取2次，每次提取的加水量分别为黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣总重量的12倍量，提取时间为1.8min，提取温度为50℃，过滤，合并滤液，得药渣i和滤液a，备用；将药渣i加入9.5倍重量的体积浓度为95％的乙醇浸泡4h，过滤，得滤液b备用；取滤液a蒸馏收集挥发油，55℃减压浓缩至比重为1.05的浸膏，得挥发油c和浸膏d，备用；取挥发油c，加入7倍重量的β-环糊精研磨包合，冷冻干燥，粉碎成过100目筛的细粉，得β-环糊精包合物c，备用；取滤液b，50℃减压回收乙醇，减压浓缩成比重为1.02的浸膏，得浸膏e，冷冻干燥，粉碎成过200目筛的提取物极细粉，得提取物极细粉a，备用；取浸膏d，以孔径为10000分子量的卷式膜过滤，滤液减压回收溶剂，减压浓缩至25℃时比重为1.13的浸膏，冷冻干燥，粉碎成过200目筛的提取物极细粉，得提取物极细粉b，备用；取提取物极细粉a、提取物极细粉b、β-环糊精包合物c混合均匀，加辅料制备成颗粒剂；所述颗粒剂中芍药苷的含量不低于175.72mg/g、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量不低于3.78mg/g、肉桂酸的含量不低于10.65mg/g、6-姜辣素的含量不低于8.2mg/g、总挥发油含量不低于0.1％；黄芪桂枝五物汤颗粒剂的特征图谱及芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、肉桂酸、6-姜辣素4种成分的含量同时测定的方法包括以下步骤：步骤1，黄芪桂枝五物汤颗粒剂供试品溶液的制备：取黄芪桂枝五物汤颗粒剂样品适量，加70％甲醇适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，250w，40khz超声处理30min，放至室温，用70％甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；步骤2，混合对照品溶液的制备：精密称定芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷，肉桂酸和6-姜辣素对照品，置于容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液；步骤3，黄芪桂枝五物汤颗粒剂中4种成分含量的同时测定及特征图谱测定：将步骤1制备的黄芪桂枝五物汤颗粒剂供试品溶液注入高效液相色谱仪进行分析，测定黄芪桂枝五物汤颗粒剂样品中4种成分的含量及特征图谱；所述黄芪桂枝五物汤颗粒剂的特征图谱是由12个共有峰构成，以对照品对照，3号峰为芍药苷、4号峰为毛蕊异黄酮葡萄糖苷、8号峰为肉桂酸、12号峰为6-姜辣素，以芍药苷为参照物，3号峰为参照峰，该标准对照特征图谱具有12个共有特征峰，以参照物峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值得±5％之内，规定值为峰1：0.28，峰2：0.56，峰3：1.00，峰4：1.19，峰5：1.35，峰6：1.52，峰7：1.76，峰8：2.36，峰9：2.39，峰10：2.61，峰11：2.87，峰12：3.00。

14、在一些实施方式中，在所述黄芪桂枝五物汤制剂的制备方法及其质量控制方法中，所述的黄芪桂枝五物汤制剂的中药组合物由下述原料药按重量份制成：黄芪4份、桂枝24份、白芍4份、生姜8份、大枣6份，其特征在于，黄芪桂枝五物汤制剂由以下方法制备：(1)取黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣，加蒸馏水用闪式提取器提取2次，每次提取的加水量分别为黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣总重量的19倍量，提取时间为5.6min，提取温度为50℃，过滤，合并滤液，得药渣i和滤液a，备用；将药渣i加入9.5倍重量的体积浓度为95％的乙醇浸泡4h，过滤，得滤液b备用；取滤液a蒸馏收集挥发油，55℃减压浓缩至比重为1.21的浸膏，得挥发油c和浸膏d，备用；取挥发油c，加入7倍重量的β-环糊精研磨包合，冷冻干燥，粉碎成过100目筛的细粉，得β-环糊精包合物c，备用；取滤液b，50℃减压回收乙醇，减压浓缩成比重为1.19的浸膏，得浸膏e，冷冻干燥，粉碎成过200目筛的提取物极细粉，得提取物极细粉a，备用；取浸膏d，以孔径为10000分子量的卷式膜过滤，滤液减压回收溶剂，减压浓缩至25℃时比重为1.13的浸膏，冷冻干燥，粉碎成过200目筛的提取物极细粉，得提取物极细粉b，备用；取提取物极细粉a、提取物极细粉b、β-环糊精包合物c混合均匀，加辅料制备成片剂；所述片剂中芍药苷的含量不低于175.72mg/g、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量不低于3.78mg/g、肉桂酸的含量不低于10.65mg/g、6-姜辣素的含量不低于8.2mg/g、总挥发油含量不低于0.1％；黄芪桂枝五物汤片剂的特征图谱及芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、肉桂酸、6-姜辣素4种成分的含量同时测定的方法包括以下步骤：步骤1，黄芪桂枝五物汤片剂供试品溶液的制备：取黄芪桂枝五物汤片剂样品适量，加70％甲醇适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，250w，40khz超声处理30min，放至室温，用70％甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；步骤2，混合对照品溶液的制备：精密称定芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷，肉桂酸和6-姜辣素对照品，置于容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液；步骤3，黄芪桂枝五物汤片剂中4种成分含量的同时测定及特征图谱测定：将步骤1制备的黄芪桂枝五物汤片剂供试品溶液注入高效液相色谱仪进行分析，测定黄芪桂枝五物汤片剂样品中4种成分的含量及特征图谱；所述黄芪桂枝五物汤片剂的特征图谱是由12个共有峰构成，以对照品对照，3号峰为芍药苷、4号峰为毛蕊异黄酮葡萄糖苷、8号峰为肉桂酸、12号峰为6-姜辣素，以芍药苷为参照物，3号峰为参照峰，该标准对照特征图谱具有12个共有特征峰，以参照物峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值得±5％之内，规定值为峰1：0.28，峰2：0.56，峰3：1.00，峰4：1.19，峰5：1.35，峰6：1.52，峰7：1.76，峰8：2.36，峰9：2.39，峰10：2.61，峰11：2.87，峰12：3.00。

15、在一些实施方式中，在所述黄芪桂枝五物汤制剂的制备方法及其质量控制方法中，所述的黄芪桂枝五物汤制剂的中药组合物由下述原料药按重量份制成：黄芪3份、桂枝3份、白芍3份、生姜6份、大枣4份，其特征在于，黄芪桂枝五物汤制剂由以下方法制备：(1)取黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣，加蒸馏水用闪式提取器提取2次，每次提取的加水量分别为黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣总重量的15倍量，提取时间为4.1min，提取温度为50℃，过滤，合并滤液，得药渣i和滤液a，备用；将药渣i加入9.5倍重量的体积浓度为95％的乙醇浸泡4h，过滤，得滤液b备用；取滤液a蒸馏收集挥发油，55℃减压浓缩至比重为1.13的浸膏，得挥发油c和浸膏d，备用；取挥发油c，加入7倍重量的β-环糊精研磨包合，冷冻干燥，粉碎成过100目筛的细粉，得β-环糊精包合物c，备用；取滤液b，50℃减压回收乙醇，减压浓缩成比重为1.11的浸膏，得浸膏e，冷冻干燥，粉碎成过200目筛的提取物极细粉，得提取物极细粉a，备用；取浸膏d，以孔径为10000分子量的卷式膜过滤，滤液减压回收溶剂，减压浓缩至25℃时比重为1.13的浸膏，冷冻干燥，粉碎成过200目筛的提取物极细粉，得提取物极细粉b，备用；取提取物极细粉a、提取物极细粉b、β-环糊精包合物c混合均匀，加辅料制备成胶囊剂；所述胶囊剂中芍药苷的含量不低于175.72mg/g、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量不低于3.78mg/g、肉桂酸的含量不低于10.65mg/g、6-姜辣素的含量不低于8.2mg/g、总挥发油含量不低于0.1％；黄芪桂枝五物汤胶囊剂的特征图谱及芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、肉桂酸、6-姜辣素4种成分的含量同时测定的方法包括以下步骤：步骤1，黄芪桂枝五物汤胶囊剂供试品溶液的制备：取黄芪桂枝五物汤胶囊剂样品适量，加70％甲醇适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，250w，40khz超声处理30min，放至室温，用70％甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；步骤2，混合对照品溶液的制备：精密称定芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷，肉桂酸和6-姜辣素对照品，置于容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液；步骤3，黄芪桂枝五物汤胶囊剂中4种成分含量的同时测定及特征图谱测定：将步骤1制备的黄芪桂枝五物汤胶囊剂供试品溶液注入高效液相色谱仪进行分析，测定黄芪桂枝五物汤胶囊剂样品中4种成分的含量及特征图谱；所述黄芪桂枝五物汤胶囊剂的特征图谱是由12个共有峰构成，以对照品对照，3号峰为芍药苷、4号峰为毛蕊异黄酮葡萄糖苷、8号峰为肉桂酸、12号峰为6-姜辣素，以芍药苷为参照物，3号峰为参照峰，该标准对照特征图谱具有12个共有特征峰，以参照物峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值得±5％之内，规定值为峰1：0.28，峰2：0.56，峰3：1.00，峰4：1.19，峰5：1.35，峰6：1.52，峰7：1.76，峰8：2.36，峰9：2.39，峰10：2.61，峰11：2.87，峰12：3.00。

16、在一些实施方式中，在所述黄芪桂枝五物汤制剂的制备方法及其质量控制方法中，所述的黄芪桂枝五物汤制剂的中药组合物由下述原料药按重量份制成：黄芪4份、桂枝2份、白芍3份、生姜6份、大枣3份，其特征在于，黄芪桂枝五物汤制剂由以下方法制备：(1)取黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣，加蒸馏水用闪式提取器提取2次，每次提取的加水量分别为黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣总重量的19倍量，提取时间为1.8min，提取温度为50℃，过滤，合并滤液，得药渣i和滤液a，备用；将药渣i加入9.5倍重量的体积浓度为95％的乙醇浸泡4h，过滤，得滤液b备用；取滤液a蒸馏收集挥发油，55℃减压浓缩至比重为1.13的浸膏，得挥发油c和浸膏d，备用；取挥发油c，加入7倍重量的β-环糊精研磨包合，冷冻干燥，粉碎成过100目筛的细粉，得β-环糊精包合物c，备用；取滤液b，50℃减压回收乙醇，减压浓缩成比重为1.02的浸膏，得浸膏e，冷冻干燥，粉碎成过200目筛的提取物极细粉，得提取物极细粉a，备用；取浸膏d，以孔径为10000分子量的卷式膜过滤，滤液减压回收溶剂，减压浓缩至25℃时比重为1.13的浸膏，冷冻干燥，粉碎成过200目筛的提取物极细粉，得提取物极细粉b，备用；取提取物极细粉a、提取物极细粉b、β-环糊精包合物c混合均匀，加辅料制备成丸剂；所述丸剂中芍药苷的含量不低于175.72mg/g、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量不低于3.78mg/g、肉桂酸的含量不低于10.65mg/g、6-姜辣素的含量不低于8.2mg/g、总挥发油含量不低于0.1％；黄芪桂枝五物汤丸剂的特征图谱及芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、肉桂酸、6-姜辣素4种成分的含量同时测定的方法包括以下步骤：步骤1，黄芪桂枝五物汤丸剂供试品溶液的制备：取黄芪桂枝五物汤丸剂样品适量，加70％甲醇适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，250w，40khz超声处理30min，放至室温，用70％甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；步骤2，混合对照品溶液的制备：精密称定芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷，肉桂酸和6-姜辣素对照品，置于容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液；步骤3，黄芪桂枝五物汤丸剂中4种成分含量的同时测定及特征图谱测定：将步骤1制备的黄芪桂枝五物汤丸剂供试品溶液注入高效液相色谱仪进行分析，测定黄芪桂枝五物汤丸剂样品中4种成分的含量及特征图谱；所述黄芪桂枝五物汤丸剂的特征图谱是由12个共有峰构成，以对照品对照，3号峰为芍药苷、4号峰为毛蕊异黄酮葡萄糖苷、8号峰为肉桂酸、12号峰为6-姜辣素，以芍药苷为参照物，3号峰为参照峰，该标准对照特征图谱具有12个共有特征峰，以参照物峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±5％之内，规定值为峰1：0.28，峰2：0.56，峰3：1.00，峰4：1.19，峰5：1.35，峰6：1.52，峰7：1.76，峰8：2.36，峰9：2.39，峰10：2.61，峰11：2.87，峰12：3.00。

17、在一些实施方式中，在所述黄芪桂枝五物汤制剂的制备方法及其质量控制方法中，所述的黄芪桂枝五物汤制剂的特征图谱及4种成分同时测定的检测方法的液相色谱条件为：乙腈(a)-0.2％甲酸水溶液(b)，梯度洗脱；检测波长278nm，柱温30℃，流速1.0ml/min，色谱柱thermo syncronis c18柱，梯度洗脱程序为：

18、0-5分钟，流动相a为4％，流动相b为96％；

19、5-10分钟，流动相a为4％-5％，流动相b为96％-95％；

20、10-15分钟，流动相a为5％-8％，流动相b为95％-92％；

21、15-20分钟，流动相a为8％-12％，流动相b为92％-88％；

22、20-25分钟，流动相a为12％-16％，流动相b为88％-84％；

23、25-65分钟，流动相a为16％-20％，流动相b为84％-80％；

24、65-70分钟，流动相a为20％-27％，流动相b为80％-73％；

25、70-80分钟，流动相a为27％-29％，流动相b为73％-71％；

26、80-85分钟，流动相a为29％-32％，流动相b为71％-68％；

27、85-95分钟，流动相a为32％-50％，流动相b为68％-50％；

28、95-110分钟，流动相a为50％-90％，流动相b为50％-10％；

29、其中，所述流动相a和b的比例均为体积百分比。

30、本发明优点在于：

31、1、2020年版《中国药典》中收载的桂枝中桂皮醛的含量测定方法，未收载相关成分肉桂酸的含量测定方法。经典名方临床应用时采用古代煎煮方法，桂皮醛属于挥发性物质，在煎煮规程中易挥发，在含量测定中不易测得，本发明测定肉桂酸的含量，填补了现行版药典中缺乏对桂枝肉桂酸含量测定的空白。

32、2、建立了黄芪桂枝五物汤中4种成分芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、肉桂酸、6-姜辣素同时测定的方法，弥补了现有技术的不足，从整体上控制黄芪桂枝五物汤物质基准及其制剂的质量属性。

33、3、建立黄芪桂枝五物汤制剂的特征图谱，从整体上评价黄芪桂枝五物汤制剂的化学物质种类及其含量。

34、4、本发明黄芪桂枝五物汤制剂的制备工艺最大程度上保留了其处方药材中的挥发性成分。