1.本发明涉及脂肪检测技术领域，尤其是涉及一种酸水解测定脂肪含量的方法和应用。
背景技术：
2.近年来，随着商品经济的发展，人民生活水平的不断提高，对豆制品的需要量也越来越大，豆制品在改善居民的膳食结构，提高蛋白质的供应水平方面起着重要作用。但是豆制品的脂肪含量多少很多人并不清楚。现有的gb5009.6-2016《食品安全国家标准食品中脂肪的测定》中酸水解法存在脂肪提取不完全、提取液易乳化、水相和有机相分离耗时较长且分离效果不佳。
3.有鉴于此，特提出本发明。
技术实现要素：
4.本发明的目的之一在于提供一种酸水解测定脂肪含量的方法，以缓解现有技术中酸水解法存在脂肪提取不完全、提取液易乳化、水相和有机相分离耗时较长且分离效果不佳的技术问题。
5.为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：
6.本发明的第一方面提供了一种酸水解测定脂肪含量的方法，包括以下步骤：
7.步骤a：在样品中加入盐酸进行酸水解，水解后加入乙醇混合均匀；
8.步骤b：在体系中依次加入乙醚和石油醚进行提取得到混合溶液；
9.步骤c：对混合溶液进行第一分离，得到上清液；将上清液中溶剂经第二分离至恒重得到脂肪，计算得到脂肪含量。
10.可选地，所述酸水解的温度为70℃-80℃。
11.可选地，所述乙醚和所述石油醚的体积比为1:1-2。
12.可选地，所述样品与盐酸的质量体积比为1g：1-2ml。
13.可选地，所述样品与所述乙醇的质量体积比为1g：1-2ml。
14.可选地，所述样品与所述乙醚的质量体积比为1g：2.3-2.7ml。
15.可选地，所述第一分离的方法包括离心或者静置。
16.优选地，所述离心的速率为3000-5000r/min。
17.优选地，所述离心的时间为8min-12min。
18.可选地，步骤c中，所述第二分离先对上清液进行蒸馏再进行烘干。
19.优选地，所述蒸馏的温度为55℃-65℃。
20.优选地，所述烘干的温度为95℃-105℃。
21.可选地，所述脂肪含量的公式为：
22.23.其中，x表示样品中脂肪的含量，单位为g/100g；
24.m1为脂肪和容器的重量，单位为g；
25.m0为容器的重量，单位为g；
26.m2为样品的重量，单位为g。
27.本发明的第二方面提供了所述的酸水解测定脂肪含量的方法在测定饮品脂肪含量中的应用。
28.与现有技术相比，本发明至少具有如下有益效果：
29.本发明提供的酸水解测定脂肪含量的方法，分别使用乙醚和石油醚先后对脂肪进行萃取，使脂肪提取更加完全。本方法能提高脂肪的提取率，相较于国标方法，本方法对脂肪的提取率提高约40％，使脂肪含量数据能反映样品真实情况，结果更加准确。
30.本发明提供的方法在饮品脂肪含量中应用，为饮品中脂肪的检测提供了更准确的方法，适合大规模推广使用。
具体实施方式
31.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。
32.需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
33.本发明中，对温度没有特别说明即为常温下或室温下，即相关操作不需要特别考虑温度影响，不需要加热或制冷处理。
34.本发明的第一方面提供了一种酸水解测定脂肪含量的方法，包括以下步骤：
35.步骤a：在样品中加入盐酸进行酸水解，水解后加入乙醇混合均匀；
36.步骤b：在体系中依次加入乙醚和石油醚进行提取得到混合溶液；
37.步骤c：对混合溶液进行第一分离，得到上清液；将上清液中溶剂经第二分离至恒重得到脂肪，计算得到脂肪含量。
38.本发明提供的酸水解测定脂肪含量的方法，分别使用乙醚和石油醚先后对脂肪进行萃取，使脂肪提取更加完全。本方法能提高脂肪的提取率，相较于国标方法，本方法对脂肪的提取率提高约40％，使脂肪含量数据能反映样品真实情况，结果更加准确。
39.酸水解过程中脂肪会水解成甘油和脂肪酸，再加入乙醇使蛋白质沉淀，促进脂肪球聚合，同时乙醇溶解样品中的碳水化合物和有机酸，降低杂质的干扰。
40.加入乙醚使体系中的脂肪萃取进入乙醚层中，其他杂质停留在水层。因为乙醇可溶于乙醚，再在体系中加入石油醚，降低乙醇在醚层中的溶解度，使分层清晰。
41.可选地，所述酸水解的温度为70℃-80℃。
42.在本发明的一些实施方式中，酸水解的温度典型但不限于70℃、72℃、74℃、76℃、
78℃或80℃。
43.可选地，所述乙醚和所述石油醚的体积比为1:1-2。
44.当乙醚和石油醚的体积比大于1:1时，样品中的脂肪提取率将下降；当乙醚和石油醚的体积比小于1:2时，水相和有机相分离较差并容易出现乳化现象，不利于提取过程的进行。
45.在本发明的一些实施方式中，所述乙醚和所述石油醚的体积比典型但不限于1:1、1:1.2、1:1.4、1:1.6、1:1.8或1:2。
46.可选地，所述样品与盐酸的质量体积比为1g：1-2ml。
47.当样品与盐酸的质量体积比大于为1g：1ml时，酸水解后试样溶液中盐酸残留较多，并增加水相的体积，为使水相和有机酸能有效分离，将增加有机相(乙醚和石油醚)的使用量；当样品与盐酸的质量体积比小于为1g：2ml时，样品酸水解不完全，最终影响脂肪的提取率。
48.在本发明的一些实施方式中，样品与盐酸的质量体积比典型但不限于1g:1ml、1g:1.2ml、1g:1.4ml、1g:1.6ml、1g:1.8ml或1g:2ml。
49.可选地，所述样品与所述乙醇的质量体积比为1g：1-2ml。
50.当样品与乙醇的质量体积比大于为1g：1ml时，将增加水相的体积，增加有机相(乙醚和石油醚)的使用量；当样品与乙醇的质量体积比小于为1g：2ml时，提取的脂肪会存在杂质，影响结果的准确性。
51.在本发明的一些实施方式中，样品与乙醇的质量体积比典型但不限于1g:1ml、1g:1.2ml、1g:1.4ml、1g:1.6ml、1g:1.8ml或1g:2ml。
52.可选地，所述样品与所述乙醚的质量体积比为1g：2.3-2.7ml。
53.当样品与乙醚的质量体积比大于为1g：2.3ml时，脂肪提取率会下降；当样品与乙醚的质量体积比小于为1g：2.7ml时，水相和有机相分离较差并容易出现乳化现象，不利于提取过程的进行。
54.在本发明的一些实施方式中，样品与盐酸的质量体积比典型但不限于1g:2.3ml、1g:2.4ml、1g:2.5ml、1g:2.6ml或1g:2.7ml。
55.可选地，所述第一分离的方法包括离心或者静置。
56.优选地，所述离心的速率为3000-5000r/min。
57.在本发明的一些实施方式中，所述离心的速率典型但不限于3000r/min、4000r/min或5000r/min。
58.优选地，所述离心的时间为8min-12min。
59.在本发明的一些实施方式中，所述离心的时间典型但不限于8min、9min、10min、11min或12min。
60.可选地，步骤c中，所述第二分离先对上清液进行蒸馏再进行烘干。
61.优选地，所述蒸馏的温度为55℃-65℃。
62.在本发明的一些实施方式中，所述蒸馏的温度典型但不限于55℃、57℃、59℃、61℃、63℃或65℃。
63.优选地，所述烘干的温度为95℃-105℃。
64.在本发明的一些实施方式中，所述烘干的温度典型但不限于95℃、97℃、99℃、101
℃、103℃或105℃。
65.优选地，所述干燥的时间为0.5h-1.5h。
66.优选地，干燥后进行冷却再称量，冷却的时间0.25h-0.75h。
67.优选地，两次称量的结果之差不超过2mg则达到恒重。
68.可选地，所述脂肪含量的公式为：
[0069][0070]
其中，x表示样品中脂肪的含量，单位为g/100g；
[0071]
m1为脂肪和容器的重量，单位为g；
[0072]
m0为容器的重量，单位为g；
[0073]
m2为样品的重量，单位为g。
[0074]
本发明的第二方面提供了所述的酸水解测定脂肪含量的方法在测定饮品脂肪含量中的应用。
[0075]
本发明提供的方法在饮品脂肪含量中应用，为饮品中脂肪的检测提供了更准确的方法，适合大规模推广使用。
[0076]
下面结合实施例，对本发明的一些实施方式作详细说明。在不冲突的情况下，下述的实施例及实施例中的特征可以相互组合。以下实施例、对比例和验证例使用的豆奶为自制样品。
[0077]
自制样品(豆奶)制备方法：以水、大豆为主要原料、添加赤小豆、白砂糖、薏米、食品用香精、经清洗、浸泡磨浆、过滤、煮浆、调配均质、灌装和杀菌工序制成。
[0078]
实施例1
[0079]
本实施例对豆奶中脂肪含量进行测量，包括以下步骤：
[0080]
1)试样酸水解：称取约10g，准确至0.001g，置于50ml试管内，加10ml盐酸。将试管放入75℃水浴中，每隔5min以玻璃棒搅拌1次，至试样消化完全为止，约40min。
[0081]
2)脂肪抽提：取出试管，加入10ml乙醇，混合。冷却后将混合物移入100ml具塞量筒中，以25ml无水乙醚分数次洗试管并倒入量筒后倒入量筒，加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，再加入25ml石油醚加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，装入50ml离心管,于4000转/min离心10min，吸取离心后的上清液于同一蒸发皿，再向离心管中加入10ml石油醚，加塞振摇1min，吸取离心后的上清液于同一蒸发皿。
[0082]
3)称量：蒸发皿于60℃水浴蒸发回收乙醚和石油醚至上清液近干，再于100℃干燥蒸发皿1h，放干燥器内冷却0.5h后称量。重复以上操作直至恒重(直至两次称量的差不超过2mg)。
[0083]
实施例2
[0084]
本实施例对豆奶中脂肪含量进行测量，包括以下步骤：
[0085]
1)试样酸水解：称取约10g，准确至0.001g，置于50ml试管内，加20ml盐酸。将试管放入75℃水浴中，每隔5min以玻璃棒搅拌1次，至试样消化完全为止，约40min。
[0086]
2)脂肪抽提：取出试管，加入10ml乙醇，混合。冷却后将混合物移入100ml具塞量筒中，以25ml无水乙醚分数次洗试管并倒入量筒后倒入量筒，加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，再加入25ml石油醚加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，装入50ml离心管,于4000转/
min离心10min，吸取离心后的上清液于同一蒸发皿，再向离心管中加入10ml石油醚，加塞振摇1min，吸取离心后的上清液于同一蒸发皿。
[0087]
3)称量：蒸发皿于60℃水浴蒸发回收乙醚和石油醚至上清液近干，再于100℃干燥蒸发皿1h，放干燥器内冷却0.5h后称量。重复以上操作直至恒重(直至两次称量的差不超过2mg)。
[0088]
实施例3
[0089]
本实施例对豆奶中脂肪含量进行测量，包括以下步骤：
[0090]
1)试样酸水解：称取约10g，准确至0.001g，置于50ml试管内，加10ml盐酸。将试管放入75℃水浴中，每隔5min以玻璃棒搅拌1次，至试样消化完全为止，约40min。
[0091]
2)脂肪抽提：取出试管，加入20ml乙醇，混合。冷却后将混合物移入100ml具塞量筒中，以25ml无水乙醚分数次洗试管并倒入量筒后倒入量筒，加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，再加入25ml石油醚加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，装入50ml离心管,于4000转/min离心10min，吸取离心后的上清液于同一蒸发皿，再向离心管中加入10ml石油醚，加塞振摇1min，吸取离心后的上清液于同一蒸发皿。
[0092]
3)称量：蒸发皿于60℃水浴蒸发回收乙醚和石油醚至上清液近干，再于100℃干燥蒸发皿1h，放干燥器内冷却0.5h后称量。重复以上操作直至恒重(直至两次称量的差不超过2mg)。
[0093]
实施例4
[0094]
本实施例对豆奶中脂肪含量进行测量，包括以下步骤：
[0095]
1)试样酸水解：称取约10g，准确至0.001g，置于50ml试管内，加10ml盐酸。将试管放入75℃水浴中，每隔5min以玻璃棒搅拌1次，至试样消化完全为止，约40min。
[0096]
2)脂肪抽提：取出试管，加入10ml乙醇，混合。冷却后将混合物移入100ml具塞量筒中，以25ml无水乙醚分数次洗试管并倒入量筒后倒入量筒，加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，再加入50ml石油醚加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，装入50ml离心管,于4000转/min离心10min，吸取离心后的上清液于同一蒸发皿，再向离心管中加入10ml石油醚，加塞振摇1min，吸取离心后的上清液于同一蒸发皿。
[0097]
3)称量：蒸发皿于60℃水浴蒸发回收乙醚和石油醚至上清液近干，再于100℃干燥蒸发皿1h，放干燥器内冷却0.5h后称量。重复以上操作直至恒重(直至两次称量的差不超过2mg)。
[0098]
实施例5
[0099]
本实施例对豆奶中脂肪含量进行测量，包括以下步骤：
[0100]
1)试样酸水解：称取约10g，准确至0.001g，置于50ml试管内，加10ml盐酸。将试管放入75℃水浴中，每隔5min以玻璃棒搅拌1次，至试样消化完全为止，约40min。
[0101]
2)脂肪抽提：取出试管，加入10ml乙醇，混合。冷却后将混合物移入100ml具塞量筒中，以23ml无水乙醚分数次洗试管并倒入量筒后倒入量筒，加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，再加入25ml石油醚加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，装入50ml离心管,于4000转/min离心10min，吸取离心后的上清液于同一蒸发皿，再向离心管中加入10ml石油醚，加塞振摇1min，吸取离心后的上清液于同一蒸发皿。
[0102]
3)称量：蒸发皿于60℃水浴蒸发回收乙醚和石油醚至上清液近干，再于100℃干燥
蒸发皿1h，放干燥器内冷却0.5h后称量。重复以上操作直至恒重(直至两次称量的差不超过2mg)。
[0103]
实施例6
[0104]
本实施例对豆奶中脂肪含量进行测量，包括以下步骤：
[0105]
1)试样酸水解：称取约10g，准确至0.001g，置于50ml试管内，加10ml盐酸。将试管放入75℃水浴中，每隔5min以玻璃棒搅拌1次，至试样消化完全为止，约40min。
[0106]
2)脂肪抽提：取出试管，加入10ml乙醇，混合。冷却后将混合物移入100ml具塞量筒中，以25ml无水乙醚分数次洗试管并倒入量筒后倒入量筒，加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，再加入37.5ml石油醚加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，装入50ml离心管,于4000转/min离心10min，吸取离心后的上清液于同一蒸发皿，再向离心管中加入10ml石油醚，加塞振摇1min，吸取离心后的上清液于同一蒸发皿。
[0107]
3)称量：蒸发皿于60℃水浴蒸发回收乙醚和石油醚至上清液近干，再于100℃干燥蒸发皿1h，放干燥器内冷却0.5h后称量。重复以上操作直至恒重(直至两次称量的差不超过2mg)。
[0108]
对比例1
[0109]
本对比例对豆奶中脂肪含量进行测量，包括以下步骤：
[0110]
1)试样酸水解：称取约10g，准确至0.001g，置于50ml试管内，加10ml盐酸。将试管放入75℃水浴中，每隔5min以玻璃棒搅拌1次，至试样消化完全为止，约40min。
[0111]
2)脂肪抽提：取出试管，加入10ml乙醇，混合。冷却后将混合物移入100ml具塞量筒中，以25ml无水乙醚分数次洗试管，一并倒入量筒中。待无水乙醚全部倒入量筒后，加塞振摇1min,小心开塞，放出气体，再塞好，静置12min，小心开塞，并用乙醚冲洗塞及量筒口附着的脂肪。静置10min～20min，待上部液体清晰，吸出上清液于已恒重的铝锥形瓶内，再加5ml无水乙醚于具塞量筒内，振摇，静置后，仍将上层乙醚吸出，放入锥形瓶内。
[0112]
3)称量：取锥形瓶回收乙醚，待瓶内溶剂剩余1ml～2ml时在海水浴上蒸干，再于100℃干燥1h，放干燥器内冷却0.5h后称量。重复以上操作直至恒重(直至两次称量的差不超过2mg)。
[0113]
对比例2
[0114]
本对比例对豆奶中脂肪含量进行测量，包括以下步骤：
[0115]
1)试样酸水解：称取约10g，准确至0.001g，置于50ml试管内，加10ml盐酸。将试管放入75℃水浴中，每隔5min以玻璃棒搅拌1次，至试样消化完全为止，约40min。
[0116]
2)脂肪抽提：取出试管，加入10ml乙醇，混合。冷却后将混合物移入100ml具塞量筒中，以50ml混合醚溶液分数次洗试管，一并倒入量筒中。混合醚溶液中乙醚和石油醚的体积比为1:1。待混合醚全部倒入量筒后，加塞振摇1min,小心开塞，放出气体，再塞好，静置12min，小心开塞，并用乙醚冲洗塞及量筒口附着的脂肪。静置10min～20min，待上部液体清晰，吸出上清液于已恒重的铝锥形瓶内，再加5ml混合醚于具塞量筒内，振摇，静置后，仍将上层混合醚吸出，放入锥形瓶内。
[0117]
3)称量：取锥形瓶回收乙醚，待瓶内溶剂剩余1ml～2ml时在海水浴上蒸干，再于100℃干燥1h，放干燥器内冷却0.5h后称量。重复以上操作直至恒重(直至两次称量的差不超过2mg)。
[0118]
验证例
[0119]
将样品发送至广州检验检测认证集团有限公司进行脂肪含量的测定，使用thermo fisher的nir光谱仪对豆奶中脂肪含量进行测定，检测结果为1.1g/100g。
[0120]
将实施例1-6和对比例1-2以及验证例测量得到的脂肪含量列于表1中。
[0121]
表1脂肪含量数据
[0122] 脂肪含量(g/100g)实施例11.1实施例21.0实施例31.1实施例41.1实施例51.0实施例61.1对比例10.7对比例20.8验证例1.1
[0123]
从表1可以看出，实施例1-6检测结果相似，与使用thermo fisher的nir光谱方法检测结果一致。实施例1-6采用的测量方法得到的脂肪含量更靠近真实值，适合推广使用。
[0124]
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。