一种含有地西泮的鱼肉粉标准物质及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于水产品检测技术领域，具体涉及一种含有地西泮的鱼肉粉标准物质及其制备方法和应用。


背景技术：

2.地西泮，亦称安定，是一种镇静催眠药物，常用于人和动物的镇静和催眠治疗，但是一些不法人员为了减少在运输过程中水产品因应激反应而导致的受伤或死亡现象，在运输水体中违规添加地西泮等镇静剂，造成水产品中地西泮的残留，最终通过食物链被人体摄入，危害健康。
3.水产品中地西泮的测定已经纳入国家卫生健康委食品安全风险监测计划。在检测过程中，为达到更为准确的测量结果，经常使用到对照品(常称为标准物质)，尤其常用到与检测样品基质相似的标准物质，从而减少基质效应(基质效应是指样品中除目标分析物以外的其他成分对待测物测定值的影响)。然而，目前尚无以鱼肉为基质的地西泮标准物质，难以保证鱼肉中地西泮残留检测的准确性和稳定性。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种含有地西泮的鱼肉粉标准物质及其制备方法和应用，制备方法简单、成本低，所制得的含有地西泮的鱼肉粉标准物质具备良好的均匀性和稳定性，能够提高鱼肉中地西泮残留检测的准确性和稳定性。
5.本发明提供了如下的技术方案：
6.第一方面，提供一种含有地西泮的鱼肉粉标准物质的制备方法，包括以下步骤：
7.采用地西泮对活体鱼进行人工染毒，得到地西泮污染的活体鱼；
8.取地西泮污染的活体鱼的可食部分，均质，得到鱼肉糜；
9.对鱼肉糜进行减压干燥，然后研磨、过筛、混匀，得到鱼肉粉；
10.对鱼肉粉进行分装灭菌，经过均匀性和稳定性检验，即得含有地西泮的鱼肉粉标准物质。
11.进一步的，所述活体鱼为昂刺鱼。
12.进一步的，所述人工染毒的方法包括：以含有8～12mg/kg地西泮的饲料饲养活体鱼18～36h，每千克活体鱼投喂35～45g饲料。
13.进一步的，所取地西泮污染的活体鱼的可食部分包括：剔除鱼头、鱼尾、鱼鳍、鱼皮、内脏、筋膜和鱼刺后剩余的部分。
14.进一步的，所述均质的方法包括：将300～500g可食部分置于2l绞肉机中均质3～5min。
15.进一步的，所述减压干燥的方法包括：采用真空干燥机进行干燥，干燥温度为50～60℃，干燥压强为40mb，干燥时间为10～14h。
16.进一步的，所述研磨的方法包括：采用研磨机对干燥后的鱼肉糜进行研磨，研磨速
率为10000～13000rpm，研磨时间为1～3min；所述过筛的方法包括：以30～40目的筛网进行筛分；所述混匀的方法包括：采用混匀机连续混合5～8h。
17.进一步的，所述灭菌的方法包括：采用放射性同位素钴-60产生的γ射线对分装后的鱼肉粉进行灭菌，辐照剂量为4kgy。
18.第二方面，提供一种采用第一方面所述方法制备获得的含有地西泮的鱼肉粉标准物质。
19.第三方面，提供一种第二方面所述的含有地西泮的鱼肉粉标准物质在鱼肉中地西泮残留检测中的应用。
20.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
21.(1)本发明采用地西泮对活体鱼进行人工染毒，得到地西泮污染的活体鱼，再以得到的地西泮污染的活体鱼制备含有地西泮的鱼肉粉标准物质，与向商品鱼肉粉中直接添加地西泮相比，本发明能够最大程度地还原实际工作中受地西泮污染的鱼肉样品，降低本标准样品与实际检测样品间的差异性，提高检测的准确性；
22.(2)本发明通过对地西泮污染的活体鱼进行除杂、均质、减压干燥、研磨、过筛、混匀及分装灭菌制得含有地西泮的鱼肉粉标准物质，操作方法简单、成本低，所制得的含有地西泮的鱼肉粉标准物质在常温保持条件下具备良好的均匀性和稳定性，能够提高鱼肉中地西泮残留检测的准确性和稳定性；
23.(3)本发明提供的含有地西泮的鱼肉粉标准物质，可用于食品检测中方法评价、质量控制、能力验证、技术比武和技术仲裁，提高检测机构鱼肉中地西泮检测结果的可靠性，进而对保障食品安全有着极其重大的社会效益。
附图说明
24.图1是本发明实施例中含有地西泮的鱼肉粉标准物质制备方法的流程示意图。
具体实施方式
25.下面结合附图对本发明作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。
26.实施例1
27.如图1所示，本实施例提供一种含有地西泮的鱼肉粉标准物质的制备方法，包括以下步骤：
28.(1)以含有10mg/kg地西泮的饲料饲养昂刺鱼24h，每千克昂刺鱼投喂40g饲料，得到地西泮污染的活体鱼。选用昂刺鱼作为鱼肉来源，原因是其无鳞刺少，便于解剖处理。
29.(2)将地西泮污染的活体鱼剔除鱼头、鱼尾、鱼鳍、鱼皮、内脏、筋膜和鱼刺，保留可食部分，然后将400g可食部分置于2l绞肉机中均质3min，得到鱼肉糜。
30.(3)采用真空干燥机对鱼肉糜进行减压干燥，干燥温度为60℃，干燥压强为40mb，干燥时间为12h，得到干燥后的鱼肉糜。
31.(4)采用研磨机对干燥后的鱼肉糜进行研磨，研磨速率为12000rpm，研磨时间为1min；然后将研磨得到的鱼肉粉以35目的筛网进行筛分，再采用10l混匀机连续混合6h，得到均匀的鱼肉粉。
32.(5)采用me204e/02型万分之一电子分析天平(梅特勒-托利多科技中国有限公司)称取鱼肉粉，将鱼肉粉分装于20ml白色样品瓶中，每瓶 4.0g。
33.(6)采用辐照灭菌，即放射性同位素钴-60产生的γ射线对分装后的鱼肉粉进行灭菌，辐照剂量为4kgy，即得含有地西泮的鱼肉粉标准物质。
34.实施例2
35.本实施例提供一种含有地西泮的鱼肉粉标准物质的制备方法，包括以下步骤：
36.(1)以含有8mg/kg地西泮的饲料饲养昂刺鱼36h，每千克昂刺鱼投喂 45g饲料，得到地西泮污染的活体鱼。
37.(2)将地西泮污染的活体鱼剔除鱼头、鱼尾、鱼鳍、鱼皮、内脏、筋膜和鱼刺，保留可食部分，然后将300g可食部分置于2l绞肉机中均质4min，得到鱼肉糜。
38.(3)采用真空干燥机对鱼肉糜进行减压干燥，干燥温度为50℃，干燥压强为40mb，干燥时间为14h，得到干燥后的鱼肉糜。
39.(4)采用研磨机对干燥后的鱼肉糜进行研磨，研磨速率为10000rpm，研磨时间为3min；然后将研磨得到的鱼肉粉以30目的筛网进行筛分，再采用混匀机连续混合5h，得到均匀的鱼肉粉。
40.(5)采用me204e/02型万分之一电子分析天平(梅特勒-托利多科技中国有限公司)称取鱼肉粉，将鱼肉粉分装于20ml白色样品瓶中，每瓶 4.0g。
41.(6)采用辐照灭菌，即放射性同位素钴-60产生的γ射线对分装后的鱼肉粉进行灭菌，辐照剂量为4kgy，即得含有地西泮的鱼肉粉标准物质。
42.实施例3
43.本实施例提供一种含有地西泮的鱼肉粉标准物质的制备方法，包括以下步骤：
44.(1)以含有12mg/kg地西泮的饲料饲养昂刺鱼18h，每千克昂刺鱼投喂35g饲料，得到地西泮污染的活体鱼。
45.(2)将地西泮污染的活体鱼剔除鱼头、鱼尾、鱼鳍、鱼皮、内脏、筋膜和鱼刺，保留可食部分，然后将500g可食部分置于2l绞肉机中均质5min，得到鱼肉糜。
46.(3)采用真空干燥机对鱼肉糜进行减压干燥，干燥温度为55℃，干燥压强为40mb，干燥时间为10h，得到干燥后的鱼肉糜。
47.(4)采用研磨机对干燥后的鱼肉糜进行研磨，研磨速率为13000rpm，研磨时间为1min；然后将研磨得到的鱼肉粉以40目的筛网进行筛分，再采用混匀机连续混合8h，得到均匀的鱼肉粉。
48.(5)采用me204e/02型万分之一电子分析天平(梅特勒-托利多科技中国有限公司)称取鱼肉粉，将鱼肉粉分装于20ml白色样品瓶中，每瓶 4.0g。
49.(6)采用辐照灭菌，即放射性同位素钴-60产生的γ射线对分装后的鱼肉粉进行灭菌，辐照剂量为4kgy，即得含有地西泮的鱼肉粉标准物质。
50.性能评估
51.采用实施例1制得的含有地西泮的鱼肉粉标准物质进行均匀性和稳定性评估。
52.1.地西泮的检测方法
53.前处理：准确称取2.0g(精确至0.001g)待测样品于50ml聚丙烯离心管中，加入50μl浓度为200μg/l的内标应用液(d5-地西泮)，加入10ml 乙腈，涡旋30min，超声20min。加入
1g氯化钠和4g硫酸钠，温度4℃，以4700r/min离心6min，转移全部上清液至15ml聚丙烯离心管中，残渣用 5ml乙腈重复提取一次，合并上清液。40℃水浴中氮气吹干，用3ml 40％甲醇水溶液复溶，待净化。hlb柱依次用3ml甲醇和3ml水活化，提取液离心后过柱，用3ml 40％甲醇水溶液淋洗，抽干柱内液体后用3ml甲醇洗脱于小试管中，40℃水浴中氮气吹于，用40％甲醇水溶液定容至1ml，过0.22μm滤膜后待hplc-ms/ms分析。
54.仪器分析：ab sciex qtrap-5500；色谱柱：acquity beh c18 (1.7μm，2.1mm
×
50mm)；柱温：40℃；进样量：5μl；流动相：a相：水 +0.1％甲酸；b相：甲醇；流速为0.3ml/min。梯度洗脱程序：0～0.5min， 60％a；0.5～3.0min，60％a～30％a；3.0～3.5min，30％a～5％a；3.5～4min， 5％a；4～4.1min，5％a～60％a；4.1～6.0min，60％a。
55.质谱条件：正离子扫描方式；多反映监测(mrm)；电喷雾离子源(esi)；离子源温度：500℃；雾化气、干燥气均为高纯氮气，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；定性离子对、定量离子对、去簇电压 (dp)、碰撞能量(ce)的条件见表1。
56.表1地西泮的定量/定性离子对及质谱相关工作参数
[0057][0058]
注：*定量离子对。
[0059]
2.均匀性评估
[0060]
从含有地西泮的鱼肉粉标准物质的200个样品瓶中随机抽取15个，每个样品瓶取3个子样，进行瓶间和瓶内均匀性检验，最小取样量为0.4g。按照前述的液相色谱同位素稀释质谱法(lc-idms/ms)进行检测，使用单因素方差分析检验样品的均匀性，均匀性检验结果见表2。
[0061]
表2含有地西泮的鱼肉粉标准物质中地西泮的均匀性分析结果
[0062]
[0063][0064]
3.稳定性评估
[0065]
对于含有地西泮的鱼肉粉标准物质，采取同步稳定性评估的方法，按先密后疏的原则，考察在规定保存条件(18-22℃)下保存0、1、2、4、6 个月后样品的稳定性。按照如前所述的lc-idms/ms方法进行测试，每次取3个样品瓶，每个样品瓶取一个子样，测3次，计算平均值，把3个样品瓶的测量结果平均值作为检测结果。采用回归曲线方法对含有地西泮的鱼
肉粉标准物质的稳定性监测数据进行判断。由于没有物理或化学模型能够真实地描述鱼肉粉中地西泮的降解机理，故可选用线性模型作为该候选标准物质的稳定性评估模型。稳定性评估结果见表3。
[0066]
表3含有地西泮的鱼肉粉标准物质中地西泮的稳定性评估结果
[0067][0068][0069]
由表2和表3可知，本发明制备的含有地西泮的鱼肉粉标准物质，其均匀性和稳定性良好，可用于水产品中地西泮痕量残留检测中分析方法的评价、分析过程的质量控制及
实验室能力考核。
[0070]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本发明的保护范围。