一种福莫特罗有关物质的分离检测方法与流程

1.本发明属于分析化学领域，具体为一种福莫特罗有关物质的分离检测方法。


背景技术：

2.慢性阻塞性肺病(copd)是发病率和死亡率的主要原因，目前是世界第四大死因，预计到2020年将成为第三大死因。长效β2受体激动剂(labas（如福莫特罗）是单独或与长效毒蕈碱拮抗剂（lamas）和/或吸入性皮质类固醇（ics）联合治疗copd的主要药物，具体取决于患者的症状和恶化史。自1990年代初以来，福莫特罗已被用于治疗copd，并且对β2
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肾上腺素受体具有高选择性和非常高的亲和力。
3.福莫特罗是一种长效β2-肾上腺素受体激动剂，具有支气管扩张作用和快速起效。福莫特罗由于作用时间延长而出现在夜间治疗和运动性哮喘方面，比短效β-2激动剂更有效。福莫特罗具有相对较高的水溶性和中等的亲脂性，可快速递送至支气管平滑肌细胞以进行快速支气管扩张。平滑肌内中，福莫特罗逐渐渗出，与β2的活性位点相互作用，延长其作用时间。吸入福莫特罗作为单一疗法或与其他药物联合使用，对于中重度copd患者是一种有效且安全的治疗选择。
4.目前，国内外药典均收载了富马酸福莫特罗原料药有关物质的检测方法，方法中均采用辛基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；例如，中国专利文献cn104655786b公开了一种测定福莫特罗中间体及其有关物质的方法，并指明福莫特罗中间体、有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质5，该发明公开了一种用液相色谱法分离测定福莫特罗中间体有关物质化学纯度的方法，该方法以苯基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液有机相为流动相，可以定量测定福莫特罗中间体及其有关物质的含量，上述专利文献提供一种用液相色谱法分离测定福莫特罗中间体有关物质化学纯度的方法，但是该方法检测灵敏度底，分离度差，耐用性差，分析操作复杂，不适合用于高效液相色谱检测。
5.本发明公开了一种用液相色谱法分离测定福莫特罗有关物质的方法，该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以ph3.1磷酸盐缓冲液和乙腈为流动相，柱温为23℃，检测波长214nm，流速0.5ml/min。该方法可以定量测定福莫特罗有关物质，从而有效控制福莫特罗成品质量。本方法灵敏度高，分离度好，耐用性好，分析操作简单。


技术实现要素：

6.为了克服现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是一种比较灵敏并高效的使各杂质峰与主峰分离检测方法，本方法具有灵敏度高，分离度好，耐用性好，分析操作简单，比较适合用于高效液相色谱检测。
7.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种福莫特罗有关物质的分离检测方法，包括：s1、取稀释剂：磷酸盐缓冲液ph=6.0
±
0.1-乙腈（84:16）；
s2、取系统适用性溶液：称取富马酸福莫特罗系统适用性杂质对照品（含义杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质g、杂质h）适量，加稀释剂溶解并稀释制成含福莫特罗浓度为0.2mg/ml、各杂质溶液浓度为2μg/ml；s3、取供试品溶液：取本品适量，精密称定，加稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液；s4、将上述溶液室温4小时内进样，或4℃24小时内进样。
8.其中，流动相a：乙腈；流动相b：磷酸盐缓冲液ph=3.1
±
0.1；其中，色谱柱为alphasilvc-c184.6x250mm,5
µ
m；其中，梯度洗脱：0
→
10min时，流动a为16：流动相b为84；10
→
37min时，流动a为70：流动相b为30；37
→
40min时，流动a为16：流动相b为84；40
→
55min时，流动a为16：流动相b为84。
9.其中福莫特罗杂质a指的是化学名称为1-（3-氨基-4-羟基苯基）-2-[[2-（4-甲氧基苯基）-1-甲基乙基]氨基]乙醇。
[0010]
进一步的，福莫特罗杂质b指的是化学名称为n-[2-羟基-5-[（1rs）-1-羟基-2-[[2-（4-甲氧基苯基）乙基]氨基]乙基]苯基]甲酰胺。
[0011]
进一步的，福莫特罗杂质c指的是化学名称为n-[2-羟基-5-[1-羟基-2-[[2-（4-甲氧基苯基）-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]乙酰胺。
[0012]
进一步的，福莫特罗杂质d指的是化学名称为n-[2-羟基-5-[1-羟基-2-[甲基[2-（4-甲氧基苯基）-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]甲酰胺。
[0013]
进一步的，福莫特罗杂质e指的是化学名称为n-[2-羟基-5-[1-羟基-2-[[2-（4-甲氧基-3-甲基苯基）-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]甲酰胺。
[0014]
进一步的，福莫特罗杂质g指的是化学名称为（2rs）-1-（4-甲氧基苯基）-2-丙基胺。
[0015]
进一步的，福莫特罗杂质h指的是化学名称为n-[2-羟基-5-[（1rs）-1-羟基-2-[[（1sr）-2-（4-甲氧苯基）-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]甲酰胺。
[0016]
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提供一种比较灵敏并高效的使各杂质峰与主峰分离检测方法，本方法应具有灵敏度高，分离度好，耐用性好，分析操作简单，比较适合用于高效液相色谱检测。
附图说明
[0017]
图1是空白溶液的高效液相色谱图。
[0018]
图2是柱温为23℃、流速为0.5ml/min、检测波长为214nm的高效液相色谱图（sst溶液色谱图）。
[0019]
图3是布地奈德福莫特罗粉吸入剂中福莫特罗的高效液相色谱图。
具体实施方式
[0020]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实
施例，都属于本发明保护的范围。
[0021]
本实施方式的方法的执行主体为终端，所述终端可以为手机、平板电脑、掌上电脑pda、笔记本或台式机等设备，当然，还可以为其他具有相似功能的设备，本实施方式不加以限制。
[0022]
实施例1本发明提供一种福莫特罗有关物质的分离检测方法，包括：s1、取稀释剂：磷酸盐缓冲液ph=6.0
±
0.1-乙腈（84:16）；s2、取系统适用性溶液：称取富马酸福莫特罗系统适用性杂质对照品（含义杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质g、杂质h）适量，加稀释剂溶解并稀释制成含福莫特罗浓度为0.2mg/ml、各杂质溶液浓度为2μg/ml；s3、取供试品溶液：取本品适量，精密称定，加稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液；s4、将上述溶液室温4小时内进样，或4℃24小时内进样。
[0023]
其中，流动相a：乙腈；流动相b：磷酸盐缓冲液ph=3.1
±
0.1；其中，色谱柱为alphasilvc-c184.6x250mm,5
µ
m；其中，梯度洗脱：0
→
10min时，流动a为16：流动相b为84；10
→
37min时，流动a为70：流动相b为30；37
→
40min时，流动a为16：流动相b为84；40
→
55min时，流动a为16：流动相b为84。
[0024]
其中福莫特罗杂质a指的是化学名称为1-（3-氨基-4-羟基苯基）-2-[[2-（4-甲氧基苯基）-1-甲基乙基]氨基]乙醇。
[0025]
实施例2进一步的，福莫特罗杂质b指的是化学名称为n-[2-羟基-5-[（1rs）-1-羟基-2-[[2-（4-甲氧基苯基）乙基]氨基]乙基]苯基]甲酰胺。
[0026]
进一步的，福莫特罗杂质c指的是化学名称为n-[2-羟基-5-[1-羟基-2-[[2-（4-甲氧基苯基）-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]乙酰胺。
[0027]
进一步的，福莫特罗杂质d指的是化学名称为n-[2-羟基-5-[1-羟基-2-[甲基[2-（4-甲氧基苯基）-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]甲酰胺。
[0028]
进一步的，福莫特罗杂质e指的是化学名称为n-[2-羟基-5-[1-羟基-2-[[2-（4-甲氧基-3-甲基苯基）-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]甲酰胺。
[0029]
进一步的，福莫特罗杂质g指的是化学名称为（2rs）-1-（4-甲氧基苯基）-2-丙基胺。
[0030]
进一步的，福莫特罗杂质h指的是化学名称为n-[2-羟基-5-[（1rs）-1-羟基-2-[[（1sr）-2-（4-甲氧苯基）-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]甲酰胺。
[0031]
实验例：仪器与条件：watersarc2998型高效液相色谱仪及empower系统工作站；自动进样系统；色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱。
[0032]
实验步骤：按上述配制稀释剂步骤配制稀释剂作为空白溶剂，并按在上述条件下进行高效液
相色谱分析，结果见图1；按上述配制系统适用性溶液步骤配制系统适用性溶液作为sst溶液，并按在上述条件下进行高效液相色谱分析，出峰顺序依次为福莫特罗杂质g、福莫特罗杂质a、福莫特罗杂质b、福莫特罗、福莫特罗杂质c、福莫特罗杂质d、福莫特罗杂质e和福莫特罗杂质h，结果见图2；取布地奈德福莫特罗粉雾吸入剂约100mg置10ml量瓶中，加2.5ml稀释剂超声溶解，用0.45
µ
m滤膜滤过，即得供试品溶液。取供试品溶液在上述条件下进行高效液相色谱分析，结果见图3。
[0033]
另外，还需要说明的是，本案中各技术特征的组合方式并不限本案权利要求中所记载的组合方式或是具体实施例所记载的组合方式，本案所记载的所有技术特征可以以任何方式进行自由组合或结合，除非相互之间产生矛盾。
[0034]
需要注意的是，以上列举的仅为本发明的具体实施例，显然本发明不限于以上实施例，随之有着许多的类似变化。本领域的技术人员如果从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应属于本发明的保护范围。
[0035]
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。