一种胶体金免疫层析速测卡检测荔枝农药残留的前处理方法与流程

1.本发明涉及果蔬中农药残留的检测方法，具体涉及一种胶体金免疫层析速测卡检测荔枝农药残留的前处理方法。


背景技术：

2.目前，我国新鲜果蔬中农药残留检测的定性检测方法主要有酶抑制法和纸片法，检测技术标准为gb/t 5009.199-2003。但是，这两种速测法只能进行有机磷类和氨基甲酸酯类农药残留的检测，不能满足《食品安全国家标准食品中农药残留最大残留量》(gb 2763-2021)中规定的其他类型农药残留的测定，如荔枝中需要检测的毒死蜱、吡唑醚菌酯、啶虫脒(也称啶虫咪)、甲霜灵、氟虫腈、吡虫啉、阿维菌素、多菌灵、苯醚甲环唑等9种农药残留，上述两种速测法均不能给出有效的检测结果。
3.胶体金检测，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，在生物、医学各领域得到了日益广泛的应用。将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。这种方法现已发展成为试纸条，使用十分方便。
4.胶体金免疫层析速测卡(也称胶体金免疫层析试剂卡或胶体金免疫层析试纸条)是按照gb 2763-2021或国际农药残留限量标准设定cutoff值，能半定量检测出最大限量标准值的快速检测果蔬中农药残留的试纸条，其检测结果与传统的核心或中心实验室的检测结果一致或相似。采用胶体金免疫层析速测卡对果蔬中农药残留进行检测时，都需要对果蔬进行前处理。对于水果而言，其前处理方法通常是将水果样品破碎或捣碎后匀浆(也可以在匀浆后加入少量氯化钠除水)即可。本技术人在实践工作中发现，采用这种常规的前处理方法对荔枝进行前处理，在后续胶体金对荔枝农残的检测时常常显示无效(对照线c线未出现)，申请人经过分析认为，可能是荔枝中糖分含量过高，干扰速测卡中提取液成分从而影响结果测定，导致速测卡测定无效。


技术实现要素：

5.本发明要解决的技术问题是提供一种胶体金免疫层析速测卡检测荔枝农药残留的前处理方法，该方法简单易操作，可避免速测卡出现测定无效的情况，且速测卡的检测结果与常规液质联用的测定结果一致。
6.为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
7.一种胶体金免疫层析速测卡检测荔枝农药残留的前处理方法，其特征是，取荔枝样品，加入乙腈后破碎、匀浆，然后加入氯化钠，过滤，滤液经振荡、静置后收集上清液，吸取一定量上清液氮吹至近干，即为待测样品。
8.本发明所述前处理方法中，乙腈的加入量优选按1g荔枝样品加入2～3ml乙腈的基准计算，更优选是按1g荔枝样品加入2ml乙腈的基准计算。
9.本发明所述前处理方法中，氯化钠的加入量为现有技术中的常规加入量，具体可以是按1g荔枝样品加入0.2～0.3g氯化钠的基准计算，进一步优选按1g荔枝样品加入0.25g氯化钠的基准计算。
10.本发明所述前处理方法中，在吸取上清液氮吹至近干时，按10g荔枝样品吸取1～1.1ml上清液进行氮吹至近干的基准计算，更优选是按10g荔枝样品吸取1ml上清液的基准计算。
11.本发明中所述的荔枝样品是指采摘的新鲜荔枝在去除枝柄和果核后的剩余物。
12.在完成前处理得到待测样品后，根据胶体金免疫层析速测卡的说明书对待测样品进行操作以完成对荔枝中农残的检测。
13.与现有技术相比，本发明通过在荔枝样品中加入乙腈即可去除基质效应，使荔枝样品在进行简单的前处理后采用胶体金免疫层析法进行检测即可避免因荔枝糖分过高导致速测卡出现测定无效的情况，且速测卡的检测结果与常规液质联用的测定结果吻合，非常适用于现场快速检测。
附图说明
14.图1为本发明实施例1中用胶体金免疫层析速测卡检测吡虫啉残留的速测卡照片。
15.图2为本发明实施例1中用胶体金免疫层析速测卡检测多菌灵残留的速测卡照片。
16.图3为本发明实施例1中用胶体金免疫层析速测卡检测吡唑醚菌酯残留的速测卡照片。
17.图4为本发明实施例1中用胶体金免疫层析速测卡检测甲霜灵残留的速测卡照片。
18.图5为本发明实施例1中用胶体金免疫层析速测卡检测毒死蜱残留的速测卡照片。
19.图6为本发明对比例1中用胶体金免疫层析速测卡检测吡虫啉残留的速测卡照片。
20.图7为本发明对比例1中用胶体金免疫层析速测卡检测多菌灵残留的速测卡照片。
21.图8为本发明对比例1中用胶体金免疫层析速测卡检测吡唑醚菌酯残留的速测卡照片。
22.图9为本发明对比例1中用胶体金免疫层析速测卡检测甲霜灵残留的速测卡照片。
23.图10为本发明对比例1中用胶体金免疫层析速测卡检测毒死蜱残留的速测卡照片。
具体实施方式
24.为了更好的解释本发明的技术方案，下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
25.以下实施例及对比例中的荔枝样品均通过以下方法获得：
26.由钦州市农产品质量安全检测中心检测员采样，采样方法参照ny/t789-2004执行；采样地点为钦州市钦南区荔枝种植基地，随机抽样1kg采摘回来的荔枝，去除枝柄和果核，混合均匀后作为荔枝样品，冷藏保存备用。
27.实施例1
28.室温下，取20g荔枝样品，置于高速分散机中，加入乙腈40ml，以12000r/min匀浆后，加入6g氯化钠，搅拌均匀后，用滤纸过滤，收集滤液，滤液振荡1min后静置10min，吸取上清液2ml置于氮吹仪上氮吹至近干，得到待测样品。
29.所得待测样品用胶体金免疫层析速测卡(包括检测吡虫啉、多菌灵、吡唑醚菌酯、甲霜灵和毒死蜱等5种农药残留的速测卡，速测卡的生产厂家为广州食源生物科技有限公司)按其说明书操作进行滴卡测定，将完成测定的速测卡按速测卡说明书中的说明人工读取结果，完成人工读取结果后随即送入hsy-yq-t701手持式胶体金读卡仪(广州食源生物科技有限公司)读取结果。
30.人工读取的结果和便携式胶体金读数仪读取的结果一致。结果显示，荔枝样品中吡唑醚菌酯超标，吡唑醚菌酯胶体金快速检测卡结果显示阳性(如图3所示)，其余项目吡虫啉、多菌灵、甲霜灵和毒死蜱4种农药胶体金快速检测卡结果显示阴性(如图1、2、4和5所示)。
31.为检测本发明所述方法的准确性，取与实施例1同一来源的荔枝样品按gbgb23200.121-2021中的要求制作待测样品并按其中要求的设备和方法对其中的吡虫啉、多菌灵、吡唑醚菌酯、甲霜灵和毒死蜱等5种农药残留进行检测，结果如下述表1所示：
32.表1：
[0033][0034][0035]
可见，采用本发明所述方法对荔枝样品进行前处理后再采用胶体金进行滴卡检测，不仅没有出现检测无效的情况，且检测结果与国标中的液质联用仪确证的结果一致。
[0036]
对比例1
[0037]
采用常规的前处理方法对与实施例1同一来源的荔枝样品进行前处理，具体如下：
[0038]
室温下，取20g荔枝样品置于高速分散机中，以12000r/min匀浆后，加入6g氯化钠，搅拌均匀后，用滤纸过滤，收集滤液，得到待测样品。
[0039]
所得待测样品用胶体金免疫层析速测卡(包括检测吡虫啉、多菌灵、吡唑醚菌酯、甲霜灵和毒死蜱等5种农药残留的速测卡，速测卡的生产厂家为广州食源生物科技有限公司)按其说明书操作进行滴卡测定，将完成测定的速测卡按速测卡说明书中的说明人工读取结果，同时也送入hsy-yq-t701手持式胶体金读卡仪(广州食源生物科技有限公司)读取结果。
[0040]
结果显示，吡虫啉、多菌灵、吡唑醚菌酯、甲霜灵和毒死蜱等5种农药残留速测卡都显示检测无效(如图6至图10所示)，基于此无法送入便携式胶体金读数仪读取结果。