一种固体介质中磺胺类抗生素分离富集与测定的方法

1.本发明涉及分离检测技术领域，尤其涉及一种固体介质中磺胺类抗生素分离富集与测定的方法。


背景技术：

2.磺胺类药物(sulfonamides，sas)是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是应用最广、用量最大的一类广谱抑菌药，主要用于畜牧养殖、预防和治疗细菌感染性疾病。自上世纪50年代美国食品与药物管理局(food and administration，fad)第一次批准将抗生素作为饲料添加剂后，由于磺胺类药物在治疗和养殖动物方面显示出快速高效的治疗效果，而被大范围的使用在动物养殖方面。与其它种类抗生素相比，sas抗生素在土壤中吸附系数低，在不同环境介质中具有高流动性，且难以被生物降解。因而在各类环境介质中均有较高的检出浓度。该类药物进入环境后，可抑制原有环境中微生物活性，刺激病原菌产生抗药性，破坏原有的陆生或水生生态平衡。过去由于人们对于抗生素缺乏认知，滥用乱用的现象普遍存在，特别是在畜牧养殖业。研究表明用于动物的sas抗生素中大部分会以原药或代谢产物等形式排出体外，这些抗生素随地表径流、降水和污水处理等多种途径汇入沉积物、土壤或污泥等固体介质中，导致抗生素在这些固体介质中的不断累积，严重威胁着生态环境和人体健康。因此，建立高效、精准的磺胺类抗生素检测方法是研究环境中磺胺类抗生素的迁移转化、毒理效应、风险评估及污染防治的前提条件。
3.固体介质中的抗生素含量较低且基质复杂，无法直接测定，因此需将待测组分从样品基质中提取分离和富集纯化，使其达到分析仪器的检测限。现有的固体介质中磺胺类抗生素提取检测方法普遍存在的回收率低，且由于基质效应明显而导致实验结果不稳定的问题。
4.因此，亟需提供一种回收率高且实验结果稳定的固体介质中磺胺类抗生素分离富集与测定的方法。


技术实现要素：

5.鉴于此，本发明的目的在于提供一种固体介质中磺胺类抗生素分离富集与测定的方法。利用本发明提供的方法，磺胺类抗生素不但回收率高且实验结果稳定。
6.为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
7.本发明提供了一种固体介质中磺胺类抗生素分离富集与测定的方法，包括以下步骤：
8.(1)将固体介质进行加速溶剂萃取，得到萃取液；
9.所述加速溶剂萃取的萃取剂为柠檬酸缓冲液和甲醇的混合液，所述柠檬酸缓冲液和甲醇的体积比为1:1，所述柠檬酸缓冲液的ph＝6.00
±
0.05；
10.(2)将所述步骤(1)得到的萃取液依次进行干燥、复溶、调节ph值和过滤，得到预处理液；
11.所述复溶的试剂为超纯水，所述调节ph＝6.00
±
0.05；
12.(3)将所述步骤(2)得到的预处理液进行固相萃取实现富集纯化，得到洗脱液；
13.所述固相萃取的固相萃取柱为sax+hlb串联固相萃取柱；所述固相萃取的洗脱液依次为乙酸乙酯甲醇混合液和氨水甲醇混合液；
14.(4)将所述步骤(3)得到的洗脱液依次进行干燥、复溶和过滤，得到待测液；所述复溶的试剂为体积百分比为30％的甲醇水溶液；
15.(5)将所述步骤(4)得到的待测液进行超高效液相色谱-三重四极杆质谱测定，得到不同磺胺类抗生素的含量。
16.优选地，所述步骤(1)中固体介质为沉积物、土壤或污泥。
17.优选地，所述步骤(1)中加速溶剂萃取的循环次数为≥2次。
18.优选地，所述步骤(1)中柠檬酸缓冲液为一水柠檬酸、磷酸氢二钠和水的混合物。
19.优选地，柠檬酸缓冲液中一水柠檬酸和磷酸氢二钠的浓度均为0.1mol/l。
20.优选地，所述步骤(1)中加速溶剂萃取的温度为60～100℃，加速溶剂萃取的压力为8～12mpa，加速溶剂萃取的静态萃取时间为5～8min，静态萃取的次数2～3次，加速溶剂萃取的淋洗体积为池体积的40％～80％，加速溶剂萃取的氮吹时间为100～140s。
21.优选地，所述步骤(1)中固体介质的质量为2～6g。
22.优选地，所述步骤(3)中乙酸乙酯甲醇混合液中乙酸乙酯和甲醇的体积比为1:1，所述氨水甲醇混合液中氨水和甲醇的体积比为3:100。
23.优选地，所述步骤(3)中sax+hlb串联固相萃取柱的活化试剂依次为乙酸乙酯甲醇混合液、氨水甲醇混合液和超纯水；所述乙酸乙酯甲醇混合液和氨水甲醇混合液的组成和固相萃取的洗脱液相对应的混合液相同。
24.优选地，所述步骤(5)中超高效液相色谱-三重四极杆质谱测定的条件为，超高效液相色谱条件：色谱柱采用acquityuplc beh c18柱，所述c18柱的规格为100
×
2.1mm，1.7μm；流动相a为体积含量为0.1％甲酸水溶液，流动相b为纯甲醇；柱温40℃；流速0.3ml/min；进样量5μl；梯度洗脱条件为：0～1min，10％～12％b；1～7min，12％～50％b；7～10min，50％～70％b；10～10.1min，70％～10％b；10.1～12min，10％b，其中％为体积百分比；三重四极杆质谱条件为：采用正离子扫描、多时段-多反应检测模式；毛细管电压为2.94kv；脱溶剂温度为600℃；离子源温度为150℃；脱溶剂流速为1000l/h。
25.本发明提供了一种固体介质中磺胺类抗生素分离富集与测定的方法，包括以下步骤：(1)将固体介质进行加速溶剂萃取，得到萃取液；所述加速溶剂萃取的萃取剂为柠檬酸缓冲液和甲醇的混合液，所述柠檬酸缓冲液和甲醇的体积比为1:1，所述柠檬酸缓冲液的ph＝6.00
±
0.05；(2)将所述步骤(1)得到的萃取液依次进行干燥、复溶、调节ph值和过滤，得到预处理液；所述复溶的试剂为超纯水，所述调节ph＝6.00
±
0.05；(3)将所述步骤(2)得到的预处理液进行固相萃取实现富集纯化，得到洗脱液；所述固相萃取的固相萃取柱为sax+hlb串联固相萃取柱；所述固相萃取的洗脱液依次为乙酸乙酯甲醇混合液和氨水甲醇混合液；(4)将所述步骤(3)得到的洗脱液依次进行干燥、复溶和过滤，得到待测液；所述复溶的试剂为体积分数为30％的甲醇水溶液；(5)将所述步骤(4)得到的待测液进行超高效液相色谱-三重四极杆质谱测定，得到不同磺胺类抗生素的含量。本发明通过采用加速溶剂萃取的方法进行了前期萃取，再利用固相萃取进行进一步浓缩提纯，在上述过程中，通过选用柠檬
酸缓冲液和甲醇的混合液作为前期萃取溶剂，乙酸乙酯甲醇混合液和氨水甲醇混合液作为固相萃取的洗脱液，并选用sax+hlb串联固相萃取柱，不但萃取和洗脱效率高，还提高了磺胺类抗生素的回收率，并且明显减弱了基质效应，实验结果稳定，重现性好。实验结果表明，利用本发明提供的方法，磺胺类抗生素的回收率为67.8％～109.8％，相对标准偏差为1.76％～13.00％(n＝3)。
附图说明
26.图1为本发明对固体介质中磺胺类抗生素分离富集与测定的流程图；
27.图2为本发明实施例1中20μg/l的10种磺胺类抗生素混合标准品溶液的离子流图；
28.其中，a为磺胺嘧啶(sd)：2.52min；b为磺胺吡啶(spy)：3.14min；c为磺胺甲基嘧啶(smr)：3.38min；d为甲氧苄啶(tmp):3.95min；e为磺胺二甲嘧啶(sm2)：4.15min；f为磺胺甲氧哒嗪(smp)：4.63min；g为磺胺氯哒嗪(scp)：4.68min；h为磺胺甲恶唑(smz)：4.87min；i为磺胺地索辛(sdm)：6.47min；j为磺胺喹噁啉(sq)：6.77min；
29.图3为本发明实施例1中测定的磺胺嘧啶(sd)的定量离子标准曲线图；
30.图4为本发明实施例1中测定的磺胺吡啶(spy)的定量离子标准曲线图；
31.图5为本发明实施例1中测定的磺胺甲基嘧啶(smr)的定量离子标准曲线图；
32.图6为本发明实施例1中测定的甲氧苄啶(tmp)的定量离子标准曲线图；
33.图7为本发明实施例1中测定的磺胺二甲嘧啶(sm2)的定量离子标准曲线图；
34.图8为本发明实施例1中测定的磺胺甲氧哒嗪(smp)的定量离子标准曲线图；
35.图9为本发明实施例1中测定的磺胺氯哒嗪(scp)的定量离子标准曲线图；
36.图10为本发明实施例1中测定的磺胺甲恶唑(smz)的定量离子标准曲线图；
37.图11为本发明实施例1中测定的磺胺地索辛(sdm)的定量离子标准曲线图；
38.图12为本发明实施例1中测定的磺胺喹噁啉(sq)的定量离子标准曲线图。
具体实施方式
39.本发明提供了一种固体介质中磺胺类抗生素分离富集与测定的方法，包括以下步骤：
40.(1)将固体介质进行加速溶剂萃取，得到萃取液；
41.所述加速溶剂萃取的萃取剂为柠檬酸缓冲液和甲醇的混合液，所述柠檬酸缓冲液和甲醇的体积比为1:1，所述柠檬酸缓冲液的ph＝6.00
±
0.05；
42.(2)将所述步骤(1)得到的萃取液依次进行干燥、复溶、调节ph值和过滤，得到预处理液；
43.所述复溶的试剂为超纯水，所述调节ph＝6.00
±
0.05；
44.(3)将所述步骤(2)得到的预处理液进行固相萃取实现富集纯化，得到洗脱液；
45.所述固相萃取的固相萃取柱为sax+hlb串联固相萃取柱；所述固相萃取的洗脱液依次为乙酸乙酯甲醇混合液和氨水甲醇混合液；
46.(4)将所述步骤(3)得到的洗脱液依次进行干燥、复溶和过滤，得到待测液；所述复溶的试剂为体积分数为30％的甲醇水溶液；
47.(5)将所述步骤(4)得到的待测液进行超高效液相色谱-三重四极杆质谱测定，得
到不同磺胺类抗生素的含量。
48.本发明将固体介质进行加速溶剂萃取，得到萃取液。
49.在本发明中，所述固体介质优选为沉积物、土壤或污泥。本发明主要针对沉积物、土壤或污泥中含有的磺胺类抗生素进行分离富集与测定。
50.在本发明中，所述固体介质使用前优选依次进行除杂、冷冻干燥、研磨和过筛预处理。
51.本发明对所述除杂的方式没有特殊规定，采用本领域技术人员熟知的除杂方式将固体介质中的树叶、石子等大个的杂质挑选出去即可。
52.本发明对所述冷冻干燥的温度和时间没有特殊规定，采用本领域技术人员熟知的干燥温度和时间即可。本发明采用冷冻干燥的方式可以避免高温造成磺胺类抗生素热解。
53.本发明对所述研磨的方式没有特殊规定，采用本领域技术人员熟知的研磨方式将所述固体介质粉碎即可。
54.在本发明中，所述过筛的筛子目数优选为55～65目，更优选为60目。本发明将所述筛子目数限定在上述范围，有利于实现固体介质中磺胺类抗生素的充分提取。
55.在本发明中，所述固体介质的质量优选为2～6g，更优选为2g。本发明将所述固体介质的质量限定在上述范围，有利于加速溶剂萃取的顺利进行。
56.本反应优选将所述预处理后的固体介质进行避光冷藏保存。在本发明中个，所述避光的方式优选为密封于棕色玻璃瓶中。在本发明中，所述冷藏的温度优选为4℃。
57.在本发明中，所述加速溶剂萃取的萃取剂为柠檬酸缓冲液和甲醇的混合液。在本发明中，所述柠檬酸缓冲液和甲醇的体积比为1:1。在本发明中，所述柠檬酸缓冲液的ph＝6.00
±
0.05。本发明通过选用上述萃取剂并将萃取剂的ph限定在上述范围，可以提高萃取的选择性，减少杂质的干扰。
58.在本发明中，所述柠檬酸缓冲液优选为一水柠檬酸、磷酸氢二钠和水的混合物。在本发明中，所述柠檬酸缓冲液中一水柠檬酸和磷酸氢二钠的浓度均优选为0.1mol/l。在本发明中，所述柠檬酸缓冲液提供所需的ph值。
59.在本发明中，所述加速溶剂萃取的温度优选为60～100℃，更优选为80℃。在本发明中，所述加速溶剂萃取的压力优选为8～12mpa，更优选为10mpa。在本发明中，所述加速溶剂萃取的静态萃取时间优选为5～8min，更优选为5min。所述加速溶剂萃取的静态萃取的循环次数优选为2～3次，更优选为2次。在本发明中，所述加速溶剂萃取的淋洗体积优选为池体积的40％～80％，更优选为50％。所述加速溶剂萃取的氮吹时间优选为100～140s，更优选为120s。本发明将所述加速溶剂萃取的参数限定在上述范围，有利于实现对磺胺类抗生素的充分萃取。
60.在本发明中，所述加速溶剂萃取的循环次数优选为≥2次，更优选为2次。本发明通过2次循环萃取，有利于实现对磺胺类抗生素的充分萃取。
61.在本发明中，所述加速溶剂萃取优选在快速溶剂萃取仪中进行。本发明对所述快速溶剂萃取仪的规格和型号没有特殊规定，常规选择即可。
62.在本发明中，所述加速溶剂萃取的上样操作优选为：将所需量的预处理过的固体介质装入快速溶剂萃取仪的萃取池中，装样前萃取池底部先铺设一定量的硅藻土，待测样品均匀装载好后，再用硅藻土填满萃取池。在本发明中，所述萃取池的规格优选为33～
35ml，更优选为34ml。在本发明中，所述硅藻土的厚度优选为0.4～0.6，更优选为0.5cm。本发明通过在萃取池中铺设硅藻土用来提高萃取效率。
63.得到萃取液后，本发明优选将所述萃取液依次进行干燥、复溶、调节ph值和过滤，得到预处理液。
64.在本发明中，所述干燥的方式优选为旋蒸。在本发明中，所述旋蒸的温度优选为50～60℃。本发明对所述旋蒸的方式没有特殊规定，采用本领域技术人员熟知的旋蒸方式即可。本发明通过旋蒸可以将萃取液中的萃取剂充分去除，将旋蒸温度限定在上述范围，可以避免高温导致磺胺类抗生素热解。
65.在本发明中，所述复溶的试剂为超纯水。本发明对所述超纯水的用量没有特殊规定，按照本领域技术人员熟知的用量常规选择即可。本发明将所述复溶剂限定为超纯水是为了后续进行固相萃取的有效进行。
66.在本发明中，所述调节ph＝6.00
±
0.05。本发明将所述调节ph限定在上述范围可以提高样品的回收率。
67.本发明对所述调节ph的试剂没有没有特殊规定，采用本领域技术人员熟知的常用于调节ph值的酸碱试剂即可。
68.在本发明中，所述过滤的方式优选为膜过滤。本发明对所述膜过滤的方式没有特殊规定，采用本领域技术人员熟知的膜过滤方式实现固液分离即可。本发明对所述膜的材质没有特殊规定，常规选择即可。在本发明中，所述膜的孔径大小优选为0.45μm。本发明将所述膜的孔径大小限定在上述范围，可以避免萃取柱堵塞，同时避免用时过长。
69.得到预处理液后，本发明将所述预处理液进行固相萃取实现富集纯化，得到洗脱液。
70.在本发明中，所述固相萃取的洗脱液依次为乙酸乙酯甲醇混合液和氨水甲醇混合液。在本发明中，所述乙酸乙酯甲醇混合液中乙酸乙酯和甲醇的体积比为优选为1:1。在本发明中，所述氨水甲醇混合液中氨水和甲醇的体积比为优选为3:100。本发明对所述洗脱液的用量没有特殊规定，按照本领域技术人员熟知的用量常规选择即可。本发明选用上述试剂作为固相萃取的洗脱液可以提高洗脱效果。
71.在本发明中，所述固相萃取的固相萃取柱为sax+hlb串联固相萃取柱。在本发明中，所述固相萃取的方式优选为：先将所述sax+hlb串联固相萃取柱进行活化，然后让预处理液依次流经sax柱和hlb柱，然后去除sax柱，依次对所述hlb柱子进行洗涤和干燥，完成磺胺类抗生素富集过程，最后对hlb柱依次进行洗涤、干燥和洗脱完成纯化过程。本发明通过选用sax+hlb串联固相萃取柱进行固相萃取，并将固相萃取的方式限定在上述范围，可以减少水样中的基质效应，提高萃取效率。在本发明，所述sax柱可以减少水样中的基质效应，提高萃取效率。
72.在本发明中，所述sax+hlb串联固相萃取柱的活化试剂依次为乙酸乙酯甲醇混合液、氨水甲醇混合液和超纯水。在本发明中，所述乙酸乙酯甲醇混合液和氨水甲醇混合液的组成优选和固相萃取的洗脱液相对应的混合液相同。本发明对所述活化试剂的用量没有特殊规定，采用本领域技术人员熟知的用量常规选择即可。本发明通过对sax+hlb串联固相萃取柱进行活化，可以实现对浸润填料、以便样品溶液能流过萃取柱，同时可以清洗柱上面的干扰杂质以及溶剂残留。
73.在本发明中，所述hlb柱的洗涤试剂优选为超纯水。在本发明中，所述干燥的方式优选为氮吹。本发明对所述氮吹的方式没有特殊规定，采用本领域技术人员熟知的氮吹方式即可。本发明通过利用超纯水对hlb柱进行洗涤，将残留的活化剂洗掉；通过干燥避免超纯水对hlb柱洗脱影响。
74.得到洗脱液后，本发明优选将所述洗脱液依次进行干燥、复溶和过滤，得到待测液。
75.在本发明中，所述干燥的方式优选为氮吹。本发明对所述氮吹的方式没有特殊规定，采用本领域技术人员熟知的氮吹方式即可。本发明通过干燥可以得到洗脱液中的固体成分。
76.在本发明中，所述复溶的试剂为体积分数为30％的甲醇水溶液。本发明通过选用体积分数为30％的甲醇水溶液进行复溶，复溶效果较好，色谱峰型效果较佳，样品加标回收率也较好。在本发明中，所述复溶的试剂的用量优选为300～400ml。本发明将所述复溶剂的用量限定在上述范围，加标回收率较高。
77.在本发明中，所述过滤的方式优选为膜过滤。本发明对所述膜过滤的方式没有特殊规定，采用本领域技术人员熟知的膜过滤方式实现固液分离即可。本发明对所述膜的材质没有特殊规定，常规选择即可。在本发明中，所述膜的孔径大小优选为0.22μm。本发明将所述膜的孔径大小限定在上述数值，可以满足超高效液相色谱串联质谱仪要求。
78.得到待测液后，本发明将所述待测液进行超高效液相色谱-三重四极杆质谱测定，得到不同磺胺类抗生素的含量。
79.在本发明中，所述待测液进行超高效液相色谱-三重四极杆质谱测定前，优选将所述待测液放入棕色进样瓶中。
80.在本发明中，所述超高效液相色谱-三重四极杆质谱测定的条件优选为，超高效液相色谱条件：色谱柱采用acquityuplc beh c18柱，所述c18柱的规格为100
×
2.1mm，1.7μm；流动相a为体积含量为0.1％甲酸水溶液，流动相b为纯甲醇；柱温40℃；流速0.3ml/min；进样量5μl；梯度洗脱条件为：0～1min，10％～12％b；1～7min，12％～50％b；7～10min，50％～70％b；10～10.1min，70％～10％b；10.1～12min，10％b，其中％为体积百分比；三重四极杆质谱条件为：采用正离子扫描、多时段-多反应检测模式；毛细管电压为2.94kv；脱溶剂温度为600℃；离子源温度为150℃；脱溶剂流速为1000l/h。本发明将所述超高效液相色谱-三重四极杆质谱测定的条件限定在上述范围，可以缩短测定时间，同时提高保留时间的稳定性。
81.在本发明中，所述磺胺类抗生素的标准样品优选为磺胺嘧啶(sd)、磺胺吡啶(spy)、磺胺甲基嘧啶(smr)、甲氧苄啶(tmp)、磺胺二甲嘧啶(sm2)、磺胺甲氧哒嗪(smp)、磺胺氯哒嗪(scp)、磺胺甲恶唑(smz)、磺胺地索辛(sdm)和磺胺喹噁啉(sq)。本发明对所述磺胺类抗生素的标准样品的浓度没有特殊规定，常规选择即可。
82.本发明通过采用加速溶剂萃取的方法进行了前期萃取，再利用固相萃取进行进一步浓缩提纯，在上述过程中，通过选用柠檬酸缓冲液和甲醇的混合液作为前期萃取溶剂，乙酸乙酯甲醇混合液和氨水甲醇混合液作为固相萃取的洗脱液，并选用sax+hlb串联固相萃取柱，不但萃取和洗脱效率高，还提高了磺胺类抗生素的回收率，并且明显减弱了基质效应，实验结果稳定，重现性好。
83.图1为本发明对固体介质中磺胺类抗生素分离富集与测定的流程图，固体介质先经加速溶剂快速萃取和固相萃取双柱富集纯化，最后进行超高效液相色谱-三重四级杆质谱分析。
84.下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
85.本发明提供的对固体介质中不同磺胺类抗生素的分离检测方法流程图见图1。固体介质依次经过经加速溶剂萃取和固溶萃取后然后进行超高效液相色谱-三重四极杆质谱分析。
86.实施例1
87.一种固体介质中磺胺类抗生素分离富集与测定的方法，由以下步骤组成：
88.(1)将固体介质进行加速溶剂萃取，得到萃取液；
89.固体介质预处理：将野外采集新鲜的河流表层沉积物，去除树叶、石子等杂质，然后进行冷冻干燥，研磨后过60目筛，密封于棕色玻璃瓶中于4℃温度下保存待用；
90.加速溶剂萃取：在快速溶剂萃取仪的萃取池(34ml)底部先铺设0.5cm厚的硅藻土，然后装入2g预处理后的固体介质，再用硅藻土填满萃取池，然后进行2次循环加速溶剂萃取；
91.其中，萃取剂为柠檬酸缓冲液和甲醇混合液(v＝1:1)，ph＝6.00
±
0.05；柠檬酸缓冲液为一水柠檬酸、磷酸氢二钠和水的混合物(一水柠檬酸和磷酸氢二钠的浓度均为0.1mol/l)；加速溶剂萃取条件为：温度为80℃，压力为10mpa，静态萃取时间为5min，静态萃取的次数2次，淋洗体积为池体积的50％，氮吹时间为120s；
92.(2)将所述步骤(1)得到的萃取液依次进行干燥、复溶、调节ph值和过滤，得到预处理液；
93.将萃取液在55℃条件下进行旋蒸，用超纯水复溶至300ml，调节ph至6.00
±
0.05(质量分数为10％的盐酸)，再用0.45μm玻璃纤维滤膜过滤，得到预处理液；
94.(3)将所述步骤(2)得到的预处理液进行固相萃取实现富集纯化，得到洗脱液；
95.活化萃取柱：依次用5.5ml乙酸乙酯-甲醇(v:v，1:1)混合液、5.5ml氨水-甲醇(v:v，3:100)混合液和5ml的超纯水活化sax+hlb串联固相萃取柱；
96.富集过程：将预处理液以3ml/min流速依次流过sax柱和hlb柱，过然后移除串联柱中的sax柱，用6ml超纯水淋洗hlb柱，经氮气吹扫干燥40min，完成富集过程；
97.纯化过程：依次用5.5ml乙酸乙酯-甲醇(v:v，1:1)混合液、5.5ml氨水-甲醇(v:v，3:100)混合液洗脱hlb固相萃取柱，得到洗脱液；
98.(4)将所述步骤(3)得到的洗脱液依次进行干燥、复溶和过滤，得到待测液；
99.将收集到的洗脱液缓慢氮吹至近干，再加入体积分数为30％的甲醇水溶液复溶定容至1ml，过0.22μm尼龙滤膜后转入棕色进样瓶，得到待测液；
100.(5)将所述步骤(4)得到的待测液进行超高效液相色谱-三重四极杆质谱测定，得到不同磺胺类抗生素的含量；
101.超高效液相色谱条件：色谱柱采用acquityuplc beh c18柱，所述c18柱的规格为
100
×
2.1mm，1.7μm；流动相a为体积含量为0.1％甲酸水溶液，流动相b为纯甲醇；柱温40℃；流速0.3ml/min；进样量5μl；梯度洗脱条件如表1：
102.表1梯度洗脱条件
[0103][0104][0105]
表1中百分比(％)为体积百分比
[0106]
三重四极杆质谱条件为：采用正离子扫描(esi+)、多时段-多反应检测(mrm)模式；毛细管电压2.94kv；脱溶剂温度600℃；离子源温度150℃；脱溶剂流速1000l/h。
[0107]
测试标准样品为：磺胺嘧啶(sd)、磺胺吡啶(spy)、磺胺甲基嘧啶(smr)、甲氧苄啶(tmp)、磺胺二甲嘧啶(sm2)、磺胺甲氧哒嗪(smp)、磺胺氯哒嗪(scp)、磺胺甲恶唑(smz)、磺胺地索辛(sdm)和磺胺喹噁啉(sq)。
[0108]
上述10种目标抗生素的质谱参数见表2。
[0109]
表2 10种目标抗生素的质谱参数
[0110][0111]
*为定量离子
[0112]
绘制10种磺胺类抗生素定量离子标准曲线
[0113]
配制1.0、2.0、5.0、10.0、50.0、100、200、300μg/l系列浓度的10种磺胺类抗生素混合标准溶液，绘制工作曲线，采用外标法进行定量。10种磺胺类抗生素定量离子标准曲线见图3～12。
[0114]
运用实施例1提供的方法，测定了桂林某湿地30个采样点的表层沉积物中磺胺类抗生素，具体测定结果如表3所示。
[0115]
表3桂林某湿地沉积物磺胺类抗生素检出浓度
[0116][0117]
nd：表示未检出；σsas：表示10种磺胺类抗生素总浓度。
[0118]
由表3可知，本发明实施例1提供的方法适用于沉积物等固体介质中磺胺类抗生素的批量测定要求。
[0119]
验证本发明提供的方法的线性范围、检出限、回收率和精准度
[0120]
取自远离人口聚集区的河流表层沉积物，按实施例1提供的方法，均未发现10种目标磺胺类抗生素，将此河流表层沉积物作为空白固体样品。
[0121]
对空白固体样品进行1ng/g的目标抗生素加标实验，设定8个平行(n＝8)，按照实施例1中的方法对空白加标样品进行预处理，然后通过超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪(uplc-ms/ms)进行测定标准系列工作曲线和加标平行样品。10种磺胺类抗生素的线性方程、线性范围、相关系数、检出限和定量限见表4。
[0122]
表4 10种磺胺类抗生素的线性方程、线性范围、相关系数、检出限和定量限
[0123][0124]
由表4可知，本发明提供的方法，10种目标磺胺类抗生素具有良好的线性关系，检出限和定量限较低，方法的灵敏度较高。
[0125]
为了验证方法的有效性，对空白固体样品配制10ng/g、50ng/g、100ng/g三个浓度水平进行加标回收率试验，每个加标水平设置3个平行(n＝3)，加标土样的回收率和相对标准偏差(rsd)如表5所示。结果表明该方法对实际沉积物样品的10种磺胺类抗生素的回收率为67.8％～109.8％，相对标准偏差(rsd)介于1.13％～13.23％之间，测定结果较为准确和可靠。
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表5 10种磺胺类抗生素空白沉积物实际样品加标回收率和相对标准偏差(n＝3)
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[0129][0130]
由表5可知，本发明提供的方法，样品加标回收率较好、相对标准偏差较小，因此，本方法的准确性较高、重现性较好。
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从上述实验结果可以看出，利用本发明提供的方法，对固体介质中不同磺胺类抗生素进行分离测定时，不但回收率高且实验结果稳定。
[0132]
所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。