一种评价三七抗氧化活性的方法

本技术涉及中草药质量控制，尤指一种评价三七抗氧化活性的方法。

背景技术：

1、三七是五加科植物panax notoginseng(burk.)f.h.chen的干燥根及根茎，常用于活血化瘀、消肿定痛，与其药效活性相关的成分为皂苷类成分，包括三七皂苷r1、人参皂苷rg1、rb1、re、rd等。现代药理研究表明，三七在心脑血管系统、神经系统、血液系统、免疫系统及抗衰老、抗肿瘤等方面具有明显功效。

2、三七作为临床大宗药材，如何有效评价和控制三七的质量，对于保证其临床疗效、促进其产品开发具有重要意义。临床功效是评价中药质量的金指标，而生物活性评价便是关联中药临床功效的重要方法，例如《中国药典》2020年版中对水蛭的评价方法便是通过检测其抗凝血酶活性来反映其质量。但传统生物评价方法也存在一定局限性，如部分生物评价方法需要使用动物组织或器官，若每批药材都使用该方法，势必会造成生物资源的浪费；另外，传统生物评价方法相较化学指标成分定量分析而言，其准确度、专属性和精密度较低；且由于中药成分复杂，又使生物评价指标缺乏适宜标准品。

技术实现思路

1、以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制本技术的保护范围。

2、本技术以三七临床功效为导向，选择三七抗氧化活性为切入点，建立了一种基于整合评价指数(integrated evaluation index,iei)评价三七抗氧化活性的方法，该方法既能准确反映其生物活性，又简便易行，兼具准确度、专属性和精密度，这对三七及其相关产品的质控标准提升和完善具有重要意义。

3、本技术实施例提供了一种评价三七抗氧化活性的方法，所述方法包括：

4、(1)选择人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3作为三七中的抗氧化活性成分；

5、(2)测试所述人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3中的其中一种的含量；

6、(3)根据步骤(2)测得的一种人参皂苷的含量，得出所述人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3中的另外五种的含量；

7、(4)根据步骤(2)和步骤(3)得到的所述三七中所述人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3的含量，分别计算所述人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3对所述三七的抗氧化活性贡献值；

8、(5)根据步骤(4)得到的所述三七中所述人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3对所述三七的抗氧化活性贡献值，计算所述三七的抗氧化整合评价指数；

9、(6)根据步骤(5)得到的所述三七的抗氧化整合评价指数评价所述三七的抗氧化活性。

10、在本技术的实施例中，步骤(3)可以包括：根据步骤(2)测得的所述一种人参皂苷的含量，采用一标多测法计算出人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3中的另外五种人参皂苷的含量。

11、在本技术的实施例中，步骤(2)可以包括：采用高效液相色谱法测试所述三七中人参皂苷rg1的含量；

12、所述步骤(3)可以包括：根据步骤(2)测得的所述人参皂苷rg1的含量，利用下述公式1至公式5计算所述三七中人参皂苷re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3的含量：

13、公式1：xre＝(are*xrg1)/(f(rg1/re)*arg1)

14、公式2：xr-rh1＝(ar-rh1*xrg1)/(f(rg1/r-rh1)*arg1)

15、公式3：xrd＝(ard*xrg1)/(f(rg1/rd)*arg1)

16、公式4：xrk3＝(ark3*xrg1)/(f(rg1/rk3)*arg1)

17、公式5：xr-rg3＝(ar-rg3*xrg1)/(f(rg1/r-rg3)*arg1)

18、其中，所述arg1、are、ar-rh1、ard、ark3和ar-rg3分别为采用所述高效液相色谱法测得的所述三七中人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3的峰面积；

19、所述xrg1、xre、xr-rh1、xrd、xrk3和xr-rg3分别为所述三七中人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3的含量；

20、所述f(rg1/re)、f(rg1/r-rh1)、f(rg1/rd)、f(rg1/rk3)和f(rg1/r-rg3)分别为所述一标多测法中所述三七中人参皂苷re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3相对于内参物人参皂苷rg1的相对校正因子。

21、在本技术的实施例中，

22、所述公式1为：xre＝(are*xrg1)/(0.648*arg1)

23、所述公式2为：xr-rh1＝(ar-rh1*xrg1)/(1.404*arg1)

24、所述公式3为：xrd＝(ard*xrg1)/(1.024*arg1)

25、所述公式4为：xrk3＝(ark3*xrg1)/(3.896*arg1)

26、所述公式5为：xr-rg3＝(ar-rg3*xrg1)/(0.352*arg1)。

27、在本技术的实施例中，步骤(4)可以包括：根据步骤(2)和步骤(3)得到的所述三七中所述人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3的含量，利用下述公式6至公式11分别计算所述人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3对所述三七的抗氧化活性贡献值：

28、公式6：eirg1＝wrg1xrg1

29、公式7：eire＝wrexre＝wre(are*xrg1)/(f(rg1/re)*arg1)

30、公式8：eir-rh1＝w(r)-rh1xr-rh1＝w(r)-rh1(ar-rh1*xrg1)/(f(rg1/r-rh1)*arg1)

31、公式9：eird＝wrd xrd＝wrd(ard*xrg1)/(f(rg1/rd)*arg1)

32、公式10：eirk3＝wrk3xrk3＝wrk3(ark3*xrg1)/(f(rg1/rk3)*arg1)

33、公式11：eir-rg3＝w(r)-rg3xr-rg3＝w(r)-rg3(ar-rg3*xrg1)/(f(rg1/r-rg3)*arg1)

34、其中，所述arg1、are、ar-rh1、ard、ark3和ar-rg3分别为采用所述高效液相色谱法测得的所述三七中人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3的峰面积；

35、所述xrg1、xre、xr-rh1、xrd、xrk3和xr-rg3分别为所述三七中人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3的含量；

36、所述eirg1、eire、eir-rh1、eird、eirk3和eir-rg3分别为所述人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3对所述三七的抗氧化活性贡献值；

37、所述wrg1、wre、w(r)-rh1、wrd、wrk3、w(r)-rg3分别为所述人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3对所述三七的抗氧化活性的药效权重；

38、所述f(rg1/re)、f(rg1/r-rh1)、f(rg1/rd)、f(rg1/rk3)和f(rg1/r-rg3)分别为所述一标多测法中所述三七中人参皂苷re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3相对于内参物人参皂苷rg1的相对校正因子。

39、在本技术的实施例中，

40、所述公式6为：eirg1＝0.1983xrg1

41、所述公式7为：eire＝0.1453xre＝0.1453(are*xrg1)/(0.648*arg1)

42、所述公式8为：eir-rh1＝0.1609xr-rh1＝0.1609(ar-rh1*xrg1)/(1.404*arg1)

43、所述公式9为：eird＝0.1754xrd＝0.1754(ard*xrg1)/(1.024*arg1)

44、所述公式10为：eirk3＝0.1752xrk3＝0.1752(ark3*xrg1)/(3.896*arg1)

45、所述公式11为：eir-rg3＝0.1448xr-rg3＝0.1448(ar-rg3*xrg1)/(0.352*arg1)。

46、在本技术的实施例中，步骤(5)可以包括：根据步骤(4)得到的所述三七中所述人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3对所述三七的抗氧化活性贡献值，利用下述公式12计算所述三七的抗氧化整合评价指数：

47、公式12：iei抗氧化＝eirg1+eire+eir-rh1+eird+eirk3+eir-rg3

48、其中，所述eirg1、eire、eir-rh1、eird、eirk3和eir-rg3分别为所述人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3对所述三七的抗氧化活性贡献值；

49、所述iei抗氧化为所述三七的抗氧化整合评价指数。

50、在本技术的实施例中，所述高效液相色谱法的色谱条件可以包括：

51、色谱柱：welchrom c18(250mm×4.6mm)；

52、流动相a：水，流动相b：乙腈；

53、检测波长：203nm；

54、进样量：1μl至50μl；

55、流速：1.0ml/min；

56、柱温：30℃至35℃；

57、梯度洗脱程序为：0min至30min，80体积％a，20体积％b；30min至62min，53体积％a，47体积％b；62min至80min，20体积％a，80体积％b；80min至95min，0体积％a，100体积％b；95min至110min，80体积％a，20体积％b。

58、本技术实施例还提供另一种评价三七抗氧化活性的方法，所述方法包括：

59、(1’)选择人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3作为三七中的抗氧化活性成分；

60、(2’)测试所述人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3中的其中一种的含量；

61、(3’)根据步骤(2’)测得的一种人参皂苷的含量，采用一标多测法计算出所述人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3中的另外五种的含量；

62、(4’)根据步骤(2’)和步骤(3’)得到的所述三七中所述人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3的含量，利用下述公式13计算所述三七的抗氧化整合评价指数：

63、公式13：iei抗氧化＝0.1983xrg1+0.1453xre+0.1609xr-rh1+0.1754xrd+0.1752xrk3+0.1448xr-rg3

64、(5’)根据步骤(4’)得到的所述三七的抗氧化整合评价指数评价所述三七的抗氧化活性。

65、在本技术的实施例中，步骤(2’)可以包括：测试三七中人参皂苷rg1的含量；

66、步骤(3’)可以包括：根据步骤(2’)测得的所述人参皂苷rg1的含量，采用一标多测法得出所述三七中人参皂苷re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3的含量。

67、本技术所建立的基于整合评价指数评价三七抗氧化活性的方法，是针对现有三七品质评价存在的问题所建立的方法，经验证该方法能较好地表征三七抗氧化活性。基于化学成分分析和效应检测综合加权的质量评价指标，以集成量化的形式来解决之前使用多指标评价三七品质时出现的贡献度差异问题。由于直接给每个活性成分分配了药效权重系数，系数越大，则该成分对三七抗氧化效应的代表性越强。在临床使用评控三七品质时，可直接通过检测成分含量去体现该批三七的“效”，不增加质量标准的施行难度，实现三七质量评控模式的简单易行、科学有效。综上，本技术实施例提供的基于整合评价指数评价三七抗氧化活性的方法，使三七质量评价更加综合全面、科学有效成为可能。

68、本技术实施例的评价三七抗氧化活性的方法具有下述优势:

69、1、本技术实施例的方法仅通过测试三七中人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3中的其中一种的含量，例如人参皂苷rg1的含量，便可以利用相关公式快速、准确地计算出其他多个人参皂苷成分的含量，节省了对照品资源、时间成本和劳动成本；

70、2、本技术实施例的方法仅通过测试三七中人参皂苷rg1、re、r-rh1、rd、rk3和r-rg3中的其中一种的含量，例如人参皂苷rg1的含量，便可以利用相关公式快速、有效计算出其抗氧化活性值，与样品实测抗氧化效应相关性高，准确反映关联了其生物活性；

71、3、本技术实施例的方法无需添加生物效应指示剂，无需对各个样品进行生物活性测定，施行简易可重复，可操作性强，避免了动物资源的浪费。

72、本技术的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本技术而了解。本技术的其他优点可通过在说明书以及附图中所描述的方案来实现和获得。