一种伊多塞班中间体2对映异构体的检测方法与流程

1.本发明属于医药技术领域，涉及一种药物的分析检测方法，特别涉及一种伊多塞班中间体2及其有关物质的测定方法。


背景技术：

2.伊多塞班，又名依度沙班，它是日本第一三共株式会社研制的小分子口服抗凝药，为凝血因子x(fxa)抑制剂。凝血过程中，活化的凝血因子x(fxa)将凝chemicalbook血酶原(fii)激活成为凝血酶(fiia)，促使纤维蛋白形成，由此形成血栓，因而fxa已成为开发新一代抗凝药物的主要靶点。
3.伊多塞班中间体2，又名依度沙班杂质a(单草酸盐)、依度沙班中间体2，英文名称为tert-butyl [(1r,2s,5s)-2-amino-5-[(dimethylamino)carbonyl]cyclohexyl]carbamate oxalate，化学名称为[(1r,2s,5s)-2-氨基-5-[(二甲基氨基)羰基]环己基]氨基甲酸叔丁酯草酸盐，分子式为c
16h29
n3o7，分子量为375.42，cas号为1210348-34-7，化学结构式如下：。
[0004]
依据源头控制、过程控制理念，制备伊多塞班，伊多塞班中间体2也需建立有效的检测方法实行严格控制。经检索，目前未见伊多塞班中间体2的对映异构体检测方法的相关专利或公开文献报道。


技术实现要素：

[0005]
本发明的目的在于提供一种伊多塞班中间体2的对映异构体检测方法，该方法专属性强，线性良好，重复性佳，供试品溶液稳定性良好，可应用于伊多塞班中间体2杂质控制。
[0006]
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种伊多塞班中间体2对映异构体的检测方法，所述伊多塞班中间体2化学名称为[(1r,2s,5s)-2-氨基-5-[(二甲基氨基)羰基]环己基]氨基甲酸叔丁酯草酸盐，分子式为c
16h29
n3o7，结构式为，采用正相高效液相色谱法，使用紫外检测器，hplc检测条件如下：色谱柱：chiralpak@ox-h，250*4.6mm，5μm，多糖衍生物正相涂敷型手性色谱柱，硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)，柱温为35℃，常规温度，适用于大多数仪器；流动相：正己烷-乙醇-二乙胺混合溶液；流速为0.7ml/min；洗脱程序：等度洗脱10min；检测波
长：220nm为最大吸收波长；包括以下步骤：（1）取伊多塞班中间体2消旋体用乙醇作为稀释剂溶解，并定量稀释制成每1ml稀释剂含1.2mg伊多塞班中间体2消旋体的消旋体溶液；（2）取伊多塞班中间体2用乙醇作为稀释剂溶解，并定量稀释制成每1ml稀释剂含2.0mg伊多塞班中间体2的供试品溶液；（3）取5μl消旋体溶液、供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，完成伊多塞班中间体2的对映异构体的检测。
[0007]
进一步，所述的流动相为正己烷：乙醇：二乙胺=500：500：1（v/v/v）。
[0008]
本发明的有益效果是：本发明采用chiralpak@ox-h，多糖衍生物正相涂敷型手性色谱柱，硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)，非常用手性柱，解决伊多塞班中间体2与其对映异构体分离难的问题；本发明色谱柱柱温35℃，常规温度，适用于大多数仪器，避免多数工厂因仪器配制不够而无法检测的问题；本发明检测时间10min，大大提高检测效率。
附图说明
[0009]
图1为本发明实施案例消旋体溶液与样品叠图；图2为本发明实施案例专属性叠图；图3为本发明对比例1混合溶液在色谱柱ad/od/oj/as筛选叠图；图4为本发明对比例2混合溶液在ad/oj在甲醇：乙醇：二乙胺=40：60：0.3（v/v/v）的筛选叠图。
具体实施方式
[0010]
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步的说明。
[0011]
本发明对色谱柱、流动相进行筛选，最终本实施案例色谱条件能将其与对映异构体有效分离，建立的检测方法将分析时间控制在10分钟内，主成分及对映异构体与其相邻峰的分离度均≥3.9，方法专属性好，灵敏度高，线性良好，重复性佳，有一定的溶液稳定性，方法准确可靠，达到上述发明目的。
[0012]
具体hplc检测色谱条件如下：色谱柱：chiralpak ox-h，250*4.6mm，5μm，多糖衍生物正相涂敷型手性色谱柱，硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)，柱温为35℃。
[0013]
流动相：正己烷：乙醇：二乙胺=500：500：1（v/v/v）；流速为0.7ml/min。
[0014]
洗脱程序：等度洗脱，10min。
[0015]
检测波长：220nm。
[0016]
包括以下步骤：（1）取伊多塞班中间体2消旋体用乙醇作为稀释剂溶解，并定量稀释制成每1ml稀释剂含伊多塞班中间体2消旋体1.2mg的消旋体溶液；（2）取伊多塞班中间体2用乙醇作为稀释剂溶解，并定量稀释制成每1ml稀释剂含2.0mg伊多塞班中间体2的供试品溶液；（3）取伊多塞班中间体2用乙醇作为稀释剂溶解，并定量稀释制成每1ml稀释剂含
伊多塞班中间体0.004mg的灵敏度溶液；（4）取5μl消旋体溶液、供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，完成伊多塞班中间体2的对映异构体的检测。消旋体溶液与样品叠图参照图1所示。
[0017]
按照上述实验条件进行预验证考察，具体实施如下：（1）专属性考察：在上述步骤溶液配制的基础上，另外分别配制其他已知杂质溶液（m06，m07，m08，py）。取其他已知杂质，用乙醇作为稀释剂溶解，并定量稀释制成每1ml稀释剂各已知杂质2.0mg的混合定位溶液。结果如图4所示：伊多塞班中间体2与其对映异构体与相邻峰完全基线分离，且空白、其他已知杂质对两色谱峰均无干扰。
[0018]
（2）灵敏度考察：取上述步骤3的灵敏度溶液，取5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，完成灵敏度的考察。结果：主成分s/n=12，满足接受标准（s/n＞10）。
[0019]
（3）线性考察：取伊多塞班中间体2用乙醇作为稀释剂溶解，并定量稀释制成一系列的在样品浓度0.2%～120%水平的线性溶液。取5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，完成线性的考察。结果：线性方程为y=54.2038x-0.6768相关系数=0.9999;截距b与100x时y的比值=0.5%，线性关系良好。
[0020]
（4）重复性：取伊多塞班中间体2用乙醇作为稀释剂溶解，并定量稀释制成每1ml稀释剂含伊多塞班中间体2.0mg的供试品溶液；平行配制3份。结果：3份样品溶液异构体%area的rsd=0.0%，重复性佳。
[0021]
（5）溶液稳定性：取伊多塞班中间体2用乙醇作为稀释剂溶解，并定量稀释制成每1ml稀释剂含伊多塞班中间体2.0mg的供试品溶液，室温放置12.8h后，重新进样。结果：样品溶液室温放置12.8小时内稳定。
[0022]
从上述数据表明，本发明方法准确可靠，如附图1，其中1号峰为对映异构体峰，2号峰为伊多塞班中间体2色谱峰。
[0023]
对比例1色谱柱筛选，hplc检测色谱条件如下：色谱柱：chiralpak ad-h、od-h、oj-h、as-h四大柱进行筛选，尺寸均为250*4.6mm，5μm，柱温为30℃。
[0024]
流动相：正己烷：异丙醇=60：40（v/v）；流速为0.5ml/min。
[0025]
洗脱程序：等度洗脱，30min。
[0026]
检测波长：220nm、254nm。
[0027]
包括以下步骤：（1）取伊多塞班中间体2消旋体样品用甲醇作为稀释剂溶解，并定量稀释制成每1ml稀释剂含消旋体1.2mg的开发溶液。
[0028]
（2）取5μl开发溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，完成伊多塞班中间体2对映异构体方法的开发。
[0029]
结果如图3所示：分离度差。
[0030]
对比例2流动相体系优化，hplc检测色谱条件如下：色谱柱：chiralpak oj-h、ad-h，尺寸均为250*4.6mm，5μm，柱温为30℃。
[0031]
流动相：甲醇：乙醇：二乙胺=40：60：0.3（v/v/v）；流速为0.5ml/min。
[0032]
洗脱程序：等度洗脱，60min。
[0033]
检测波长：220nm、254nm。
[0034]
包括以下步骤：（1）取伊多塞班中间体2消旋体样品用甲醇作为稀释剂溶解，并定量稀释制成每1ml稀释剂含消旋体1.2mg的开发溶液。
[0035]
（2）取20μl开发溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，完成伊多塞班中间体2对映异构体方法的开发。
[0036]
结果如图2所示：分离度差。
[0037]
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，以及部分运用的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明原理和构思的前提下，还可以进行多种变化、修改、替换和变型，这些都属于本发明的保护范围。