一种尿素制剂中低含量活性成分晶型的鉴别方法与流程

1.本发明涉及药剂分析技术领域，特别是涉及一种尿素制剂中低含量活性成分晶型的鉴别方法。


背景技术：

2.晶型影响药物的溶出、贮存稳定性、生物利用度等关键指标，对原料药晶型的研究是仿制药研究工作的重要环节，国家药品监管机构要求固体制剂多晶型药物的研究者对制剂中主药成分在研制、生产和贮存过程中的晶型进行表征，此外，原料药的晶型研究也是主药成分指标表征的重要流程。目前，药物晶型表征的分析方法有多种，其中x射线粉末衍射法是对药物晶型进行直接检测的常规手段，但是，此类方法适用于制剂中原料药含量高的情况，对于制剂中原料药(活性成分)含量占比较低的情形，特别是处方中辅料种类多，辅料组分对主药pxrd(x-射线粉末衍射)检测有干扰时，制剂中原料药的特征峰信号弱，辅料峰信号干扰大，主成分特征峰不易被观测到，且特征峰位置重复性差(如附图1所示)，将增大药物晶型表征分析的难度。针对此种情形，为观察在影响因素条件下原料药晶型的变化情况，需要对固体药品制剂采用一定的分离富集技术来提取其中的原料药，即提高原料药含量，以利用pxrd等技术对其晶型进行研究，此种方式将增加药物晶型表征分析的流程，增大操作难度。


技术实现要素：

3.基于此，有必要针对因活性成分含量太低、辅料种类多、辅料干扰太大导致无法观测到主成分特征峰，且需要对原料药进行分离富集，操作复杂的技术问题，提供一种可有效观测到主成分特征峰、操作简单的尿素制剂中低含量活性成分晶型的鉴别方法。
4.一种尿素制剂中低含量活性成分晶型的鉴别方法，包括以下步骤：
5.s1、采用拉曼成像法分别定位活性成分和辅料的集中分布区域；
6.s2、采用拉曼成像法对活性成分集中分布区域多次单点检测，并采集活性成分；采用拉曼成像法对辅料集中分布区域多次单点检测，并采集辅料的拉曼信号；
7.s3、扣除辅料的拉曼信号，以优化制剂中活性成分的特征峰信号。
8.在其中一个实施例中，所述鉴别方法所基于的装置包括拉曼光谱仪、近红外二极管激光源以及rencam电荷耦合器件硅检测器。
9.在其中一个实施例中，步骤s1前包括：
10.s01、对待检测尿素制剂横切，以得到检测样品。
11.在其中一个实施例中，步骤s01后还包括：
12.s02、将检测样品置于拉曼光谱仪的载玻片上，于20倍物镜下聚焦观察并做拉曼成像检测。
13.在其中一个实施例中，步骤s02中，拉曼成像检测的检测波长介于750-850nm，检测范围center 1300cm-1
，激光强度100％、曝光时间0.1s。
14.在其中一个实施例中，步骤s2中，检测样品于拉曼光谱仪20倍物镜下聚焦观察并做拉曼单点检测。
15.在其中一个实施例中，步骤s2中，单点检测的检测波长为750-800nm，检测范围为100cm-1-4000cm-1
，激光强度100％，曝光时间3s。
16.在其中一个实施例中，步骤s3中，重复多次单点检测，并将拉曼成像检测的图像与单点检测的图像叠加，以扣除辅料的拉曼信号。
17.实施本发明的尿素制剂中低含量活性成分晶型的鉴别方法，采用先定位制剂中活性成分位置，再多次应用单点检测优化信号的方法，精确采集活性成分的拉曼信号，通过采用辅料信号扣除的方法得到几乎无干扰的原料药特征信号峰，避免了因活性成分含量、辅料种类多，辅料对活性成分特征峰的影响，可有效观测到主成分特征峰；无需对制剂进行分离富集，降低了活性成分晶型分析的操作难度。
附图说明
18.图1为传统分析方式中原料药与制剂的信号对比图；
19.图2为本发明的一个实施例中鉴别方法的流程图；
20.图3为本发明的一个实施例中原料药与4种辅料的信号对比图；
21.图4为本发明的一个实施例中原料药与制剂的信号对比图。
具体实施方式
22.为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
23.本发明公开了一种可有效观测到主成分特征峰、操作简单的尿素制剂中低含量活性成分晶型的鉴别方法，该方法通过在拉曼成像中扣除辅料的拉曼信号，排除辅料峰信号的干扰，使得最终成像的活性成分的特征峰信号显著。需要说明的是，本发明的鉴别方法基于拉曼成像技术，其所基于的装置包括拉曼光谱仪、近红外二极管激光源以及rencam电荷耦合器件硅检测器，其中，拉曼光谱仪用于提供拉曼成像装置，以最终生成拉曼信号。拉曼成像是描绘样品上或内部不同点的光谱信息的改变，拉曼逐点扫描成像采集的是一个光谱的超立方体，而不是一个简单的强度图像，通过分析该超立方体来生成拉曼图像。拉曼光谱信号反映了样品的分子振动信息，具有指纹特性。优选的，本实施例的拉曼光谱仪为雷尼绍显微拉曼光谱仪。近红外二极管激光源为拉曼成像作业提供光源，由于近红外的激光激发效率不高(拉曼信号强度与激发波长的四次方成反比)，将导致检测的灵敏度降低；但是，采用近红外的激光源所激发的波长可以很好地抑制荧光干扰。故此，采用本方法进行信号优化后，可以在灵敏度相对较低的激发波长下，获得显著的主成分特征信号峰。rencam电荷耦合器件(charge-coupled device，简称ccd)硅检测器，是一种利用半导体特性，将接收到的光信号转变为电信号的半导体功能器件，也就是说，在本实施例中，尿素制剂晶型分析的过程中，由近红外二极管激光源发出的激光被rencam电荷耦合器件硅检测器感应到，并由rencam电荷耦合器件硅检测器将光信号转变为电信号传输至拉曼光谱仪进行处理和成像，
以获得拉曼图像信号。
24.具体的，请参阅图2，本实施例的尿素制剂中低含量活性成分晶型的鉴别方法包括以下步骤：
25.s1、采用拉曼成像法分别定位活性成分和辅料的集中分布区域。
26.本实施例中，通过拉曼光谱仪对预设区域(比如200μm*150μm)范围内的样品进行逐点扫描。获取批量信号后，通过选择监督式或非监督式分析选项，例如采用主成分分析法(pca)定位已知和未知物种。具体的，对于组分信号未知的情况，采用主成分分析法(pca)将信号分类为若干个主成分信号，并在主成分集中区域进行单点扫描，根据单点扫描结果得到若干个组分的信号，根据组分信号的整体情况推测几个可能的目标组分并设定，优化采集到的信号并与可能的几个目标组分进行对比判断，从而确定不同组分的集中分布区域。对于已知的组分的集中分布区域，可采用主成分分析法(pca)结合最小二乘法(dcls)进行拟合，获取已知组分的集中分布区域，并在集中区域进行单点扫描，优化采集到的信号与已知组分的信号进行对比判断，进一步印证已知组分的集中分布区域。
27.本实施例中，通过主成分分析，可实现药剂中主成分的粒径大小和分布分析，其边界范围一般选择为与主成分的信号的相似度大于等于95％的范围。
28.进一步的，一实施例中，步骤s1前包括：
29.s01、对待检测尿素制剂横切，以得到检测样品。
30.通过对尿素制剂横切，即切片，可以使得尿素制剂内部成分裸露出来，避免了在直接检测制剂表面时，因制剂表面长期与环境接触造成的其表面性质变化问题，使得检测到的指标能够更加真实的反映尿素制剂的晶型特征。
31.步骤s01后还包括：
32.s02、将检测样品置于拉曼光谱仪的载玻片上，于20倍物镜下聚焦观察并做拉曼成像检测。当然，在拉曼成像过程中，还包括了近红外二极管激光源以及rencam电荷耦合器件硅检测器的启动及配合作业。
33.另外，在步骤s02中，拉曼成像检测的检测波长介于750-850nm，检测范围center 1300cm-1
，激光强度100％、曝光时间0.1s。
34.s2、采用拉曼成像法对活性成分集中分布区域多次单点检测，并采集活性成分；采用拉曼成像法对辅料集中分布区域多次单点检测，并采集辅料的拉曼信号。
35.步骤s2中，检测样品于拉曼光谱仪20倍物镜下聚焦观察并做拉曼单点检测。
36.另外，在步骤s2中，单点检测的检测波长为750-800nm，检测范围为100cm-1-4000cm-1
，激光强度100％，曝光时间3s。
37.s3、扣除辅料的拉曼信号，以优化制剂中活性成分的特征峰信号。
38.步骤s3中，重复多次单点检测，并将拉曼成像检测的图像与单点检测的图像叠加，以扣除辅料的拉曼信号，最终得到优化后的活性成分特征峰信号。
39.具体的，依据光谱的线性可叠加性质，雷尼绍显微拉曼光谱仪可通过数据处理功能(data arithmetic)，实现辅料定量扣除。由于无法确定辅料的具体含量，采用目视法，排除辅料干扰，即通过将自制和参比采集到的拉曼信号与已知辅料的拉曼信号进行对比判断，从而确认自制和参比之间的信号差异。
40.以下以具体实例说明本鉴别方法的操作过程。
41.实施例1
42.将制剂样品横切，置于拉曼光谱仪的显微镜载玻片上，于20倍物镜下聚焦观察并做拉曼成像检测，在检测波长785nm、检测范围center 1300cm-1
、激光强度100％、曝光时间0.1s条件下，定位制剂中主成分的集中区域；然后于20倍物镜下聚焦观察并做拉曼单点检测，检测波长785nm，检测范围为100cm-1-4000cm-1
，激光强度100％，曝光时间3s，进行2次累加。
43.实施例2
44.将制剂样品横切，置于拉曼光谱仪的显微镜载玻片上，于20倍物镜下聚焦观察并做拉曼成像检测，在检测波长830nm、检测范围center 1300cm-1
、激光强度100％、曝光时间0.1s条件下，定位制剂中主成分的集中区域；然后于20倍物镜下聚焦观察并做拉曼单点检测，检测波长785nm，检测范围为100cm-1-4000cm-1
，激光强度100％，曝光时间3s，进行2次累加。
45.本实施例的鉴别方法，首先应用拉曼成像方法，在成像后，找到活性成分在制剂中分布较为集中的区域，定位制剂中活性成分的位置，再多次应用该方法单点检测，精确采集活性成分的拉曼信号；同时，采用相同步骤对制剂中的4种辅料进行定位和精确检测、信号优化(见图3)，以便于在制剂中扣除辅料信号干扰；扣除辅料信号干扰后，制剂中原料药的特征峰信号显著，辅料信号对原料药主峰几乎无干扰(见图4)。
46.实施本发明的尿素制剂中低含量活性成分晶型的鉴别方法，采用先定位制剂中活性成分位置，再多次应用单点检测优化信号的方法，精确采集活性成分的拉曼信号，通过采用辅料信号扣除的方法得到几乎无干扰的原料药特征信号峰，避免了因活性成分含量、辅料种类多，辅料对活性成分特征峰的影响，可有效观测到主成分特征峰；无需对制剂进行分离富集，降低了活性成分晶型分析的操作难度。
47.以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
48.以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。