OSBPL3作为生物标志物在结直肠癌预后评估中的应用的制作方法

本发明属生物，具体涉及osbpl3作为生物标志物在结直肠癌预后评估中的应用。

背景技术：

1、结直肠癌(colorectal cancer，crc)是世界上最常见的消化系统癌症，其发病率位居全休恶性肿瘤的第三位，且死亡率位居第二。正因为它较高的死亡率(9.4％)，2020年，crc在全世界造成了193万例新确诊病例和93.5万例死亡。手术是crc的关键技术，但术后复发和转移导致预后不良。此外，由于症状出现较晚及转移发生较早，许多crc患者初诊时已经为肿瘤晚期。化疗和放疗是晚期crc的重要治疗手段，然而由于其非特异性细胞毒性，它们具有副作用，如中性粒细胞减少、腹泻、呕吐和放射性肠炎。免疫疗法已成为晚期crc治疗的一种新选择，尤其是对化疗耐药患者，但由于遗传异质性，不同免疫治疗患者的预后不确定。因此，识别能够预测免疫治疗效果和crc患者存活率的潜在预后生物标志物对于crc的治疗和预后评价具有重要作用。

2、氧化甾醇结合蛋白样蛋白3(oxidative sterol binding protein like protein3，osbpl3)作为氧化甾醇蛋白结合蛋白(oxidative sterol binding proteins，osbp)家族之一，是一组细胞内脂质受体。它具有c端osbp结构域和n端pleckstrin homology(ph)结构域。osbpl3主要在人的内质网和质膜中表达，已证实参与一些生理过程，如细胞粘附和脂质信号。此外，转录组分析显示osbpl3与肿瘤发生有关，包括crc、胰管癌、胰头癌、胃癌和转移性乳腺癌。目前，osbpl3基因异常表达对crc的预后评估意义尚不清楚。因此，从临床角度来看，研究osbpl3基因在crc中的异常表达，对crc的预后评价极其重要。

技术实现思路

1、本发明第一方面的目的，在于提供osbpl3作为生物标志物的应用。

2、本发明第二方面的目的，在于提供检测osbpl3的物质在制备产品中的应用。

3、本发明第三方面的目的，在于提供osbpl3作为靶点在筛选治疗或预防结直肠癌的药物中的应用。

4、本发明第四方面的目的，在于提供用于结直肠癌早期诊断、预后评估的甲基化位点。

5、本发明第五方面的目的，在于提供本发明第四方面的甲基化位点在制备诊断结直肠癌预后和/或预测结直肠癌患者死亡风险的试剂中的用途。

6、本发明第六方面的目的，在于提供一种用于结直肠癌诊断、预后和/或预测结直肠癌患者死亡风险的检测试剂盒。

7、为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

8、本发明的第一个方面，提供osbpl3作为生物标志物的应用，所述应用包括(1)～(6)中的至少一种；

9、(1)制备用于评价或预测结直肠癌的预后风险的产品；

10、(2)制备用于预测结直肠癌免疫治疗适用性的产品；

11、(3)制备用于预测结直肠癌患者生存率的产品；

12、(4)筛选用于结直肠癌治疗的产品；

13、(5)制备用于结直肠癌早期筛选的产品；

14、(6)结直肠癌的药物敏感性评估。

15、优选地，所述结直肠癌包括结肠癌和/或直肠癌。

16、本发明的第二个方面，提供检测osbpl3物质在(7)～(11)中任一项中的应用；

17、(7)制备用于评价或预测结直肠癌的预后风险的产品；

18、(8)制备用于预测结直肠癌免疫治疗适用性的产品；

19、(9)制备用于预测结直肠癌患者生存率的产品；

20、(10)制定结直肠癌患者的治疗/用药方案；

21、(11)制备用于结直肠癌早期筛选的产品。

22、优选地，所述结直肠癌包括结肠癌和/或直肠癌。

23、优选地，所述检测osbpl3的物质包含定量检测osbpl3的物质。

24、优选地，所述检测osbpl3的物质包括在基因和/或蛋白水平上检测osbpl3的物质。

25、优选地，所述物质包括通过酶联免疫吸附试验、免疫荧光法、放射免疫测定法、免疫共沉淀法、免疫印迹法、高效液相色谱法、毛细管凝胶电泳法、近红外光谱法、质谱法、免疫化学发光法、胶体金免疫技术、荧光免疫层析技术、表面等离子共振技术、免疫-pcr技术、生物素-亲和素技术、pcr或生物芯片法检测所述osbpl3表达量的物质。

26、优选地，所述检测osbpl3的物质选自：对osbpl3具有特异性的物质、osbpl3特异性的探针、基因芯片、pcr引物。

27、优选的，所述pcr引物的上游引物如seq id no.1所示，下游引物如seq id no.2所示。

28、优选地，所述对osbpl3具有特异性的物质为(b1)～(b3)中的任一种：

29、(b1)特异性结合osbpl3的抗体；

30、(b2)特异性结合osbpl3的配体蛋白或多肽；

31、(b3)特异性识别osbpl3的非蛋白类化合物。

32、优选地，所述的抗体包括多克隆抗体、单克隆抗体、单链抗体、功能性抗体片段、抗体fab区，纳米抗体、嵌合抗体、多特异性抗体中的至少一种。

33、优选地，所述产品包括但不限于试剂、试剂盒、试纸、芯片。

34、优选地，所述产品的受试样品选自待测对象的体液、组织、细胞、排泄物中的至少一种。

35、本发明的第三个方面，提供osbpl3作为靶点在筛选治疗或预防结肠癌的药物中的应用。

36、优选地，所述结直肠癌包括结肠癌和/或直肠癌。

37、本发明的第四个方面的，提供用于结直肠癌早期诊断、预后评估的甲基化位点，所述甲基化位点包括cg10661002、cg23191354、cg20455570和cg15041658中的一种或多种的组合。

38、本发明的第五个方面，提供本发明第四个方面的甲基化位点在制备诊断结直肠癌预后和/或预测结直肠癌患者死亡风险的试剂中的用途。

39、本发明的第六个方面，提供用于结直肠癌诊断、预后和/或预测结直肠癌患者死亡风险的检测试剂盒，包括：用于扩增本发明第四方面所述甲基化位点的特异性引物和探针。

40、优选的，所述试剂盒还包括转化液、结合液、洗涤液、纯化液、洗脱液、dna提取试剂、pcr扩增试剂。

41、本发明的有益效果是：

42、本发明探讨了osbpl3表达与crc的预后和临床病理特征之间的关系，结果表明，与正常组织相比，osbpl3在crc肿瘤组织中表达明显增加。osbpl3的分析和验证揭示了其与临床预后价值、dna甲基化、免疫细胞浸润和药物敏感性的相关性，提示osbpl3可作为crc早期筛查或预后的生物标志物，作为临床试验的治疗靶点。

43、osbpl3的高表达预示着更差的os、dfs和fps，gse17538队列和自测验证数据验证了osbpl3与结直肠癌不良预后相关，提示osbpl3对结直肠癌有预后价值。虽然osbpl3可能受到分期和体重的影响，但高表达组和低表达组的os在分期和体重亚组中有显著性差异。为了进一步探索osbpl3的临床价值，使用独立的预后因素(pt和osbpl3)构建了一个列线图，结果表明，osbpl3可能是一种有效的结直肠癌预后生物标志物。