同时测定红花药物组合物中9种成分的方法与流程

本发明涉及药物检测技术，尤其涉及一种同时测定红花药物组合物中9种成分的方法。

背景技术：

1、红花注射液是由红花药材水提、精制而成的无菌水溶液，具有活血化瘀的功效，用于治疗闭塞心脑血管疾病、冠心病、脉管炎。

2、红花注射液质量标准为国家药品标准ws3-b-3825-98-2012，目前只测定羟基红花黄色素a一种化学成分的含量。查阅文献得知，目前对于红花注射液中有效成分的测定，仅有单独测定山柰酚或槲皮素化合物含量的方法，或同时测定尿嘧啶核苷、鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷三种成分的方法，尚未有同时测定3种以上成分含量的方法。因此，为简便、快捷、多指标控制红花注射液的的质量，本发明了采用高效液相色谱仪、梯度洗脱，同时测定红花注射液中9种化合物的含量，并使其达到良好的分离效果和准确性。

技术实现思路

1、针对上述问题，本发明提供一种同时测定红花药物组合物中9种成分的方法。

2、为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：

3、一种同时测定红花药物组合物中9种成分的方法，所述方法包括以下步骤：

4、取尿嘧啶核苷、鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷、对羟基苯甲酸苷、5-羟甲基糠醛、紫丁香苷和对羟基红花黄色素a共七种成分，制备对照品溶液i；

5、取对羟基肉桂酸和山萘酚3-o-芸香糖苷共两种成分，制备对照品溶液ii；

6、取红花药物组合物制备供试品溶液；

7、分别取对照品溶液i、对照品溶液ii和供试品溶液进行高效液相色谱检测，再利用外标法，分别计算得红花药物组合物中尿嘧啶核苷、鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷、对羟基苯甲酸苷、5-羟甲基糠醛、对羟基肉桂酸、山萘酚3-o-芸香糖苷、紫丁香苷和羟基红花黄色素的含量；

8、其中，检测尿嘧啶苷、鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷、对羟基苯甲酸苷和5-羟甲基糠醛的检测波长为252～256nm；

9、检测对羟基肉桂酸、山柰酚3-o-芸香糖苷和紫丁香苷的检测波长为262～270nm；

10、检测羟基红花黄色素a检测波长为408～412nm。

11、进一步的，所述高效液相色谱检测的洗脱方式为梯度洗脱；

12、所述梯度洗脱的流动相a为乙腈、流动相b为0.1～0.2wt％的冰醋酸水溶液；

13、所述梯度洗脱条件为：

14、0～15min，2％→5％流动相a，98％→95％流动相b；

15、15～30min，5％→25％流动相a，95％→75％流动相b。

16、进一步的，所述高效液相色谱检测的柱温为25～40℃、流速为0.8～1.2ml/min、色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，优选phenomenex gemini-c18，4.6×250mm 5μm；对照品溶液i、对照品溶液ii和供试品溶液的进样体积均为10～30μl。

17、进一步的，对照品溶液i中含有尿嘧啶核苷10～80μg/ml、鸟嘌呤核苷10～60μg/ml、腺嘌呤核苷10～70μg/ml、对羟基苯甲酸苷10～70μg/ml、5-羟甲基糠醛10～70μg/ml、紫丁香苷1～70μg/ml、对羟基红花黄色素a1～65μg/ml；

18、对照品溶液ii中含有对羟基肉桂酸8～50μg/ml和山萘酚3-o-芸香糖苷10～80μg/ml。

19、进一步的，对照品溶液i的溶剂为水；

20、对照品溶液ii的溶剂为48～52vol％的乙腈水溶液；

21、供试品溶液是取红花药物组合物用水稀释2～10倍体积制得；

22、所述高效液相色谱检测过程中9种成分的理论板数均在10000以上。

23、一种同时测定红花药物组合物中9种成分的方法，所述方法包括以下步骤：

24、取尿嘧啶核苷、鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷、对羟基苯甲酸苷、5-羟甲基糠醛、紫丁香苷和对羟基红花黄色素a共七种成分，制备不同浓度的对照品系列溶液i；

25、取对羟基肉桂酸和山萘酚3-o-芸香糖苷共两种成分，制备不同浓度的对照品系列溶液ii；

26、分别取不同浓度的对照品系列溶液i和对照品系列溶液ii进行高效液相色谱检测，并根据不同化学成分的浓度和相应化学成分对应浓度测定的峰面积，绘制不同化学成分对应的标准曲线；

27、取红花药物组合物制备供试品溶液；

28、对供试品溶液进行高效液相色谱检测，所得相应化学成分的峰面积代入相应的标准曲线，经计算，即得所述红花药物组合物中相应化学成分的含量；

29、其中，检测尿嘧啶苷、鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷、对羟基苯甲酸苷和5-羟甲基糠醛的检测波长为252～256nm；

30、检测对羟基肉桂酸、山柰酚3-o-芸香糖苷和紫丁香苷的检测波长为262～270nm；

31、检测羟基红花黄色素a检测波长为408～412nm。

32、进一步的，所述高效液相色谱检测的洗脱方式为梯度洗脱；

33、所述梯度洗脱的流动相a为乙腈、流动相b为0.1～0.2wt％的冰醋酸水溶液；

34、所述梯度洗脱条件为：

35、0～15min，2％→5％流动相a，98％→95％流动相b；

36、15～30min，5％→25％流动相a，95％→75％流动相b。

37、进一步的，所述高效液相色谱检测的柱温为25～40℃、流速为0.8～1.2ml/min、色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，优选phenomenex gemini-c18，4.6×250mm 5μm；对照品溶液i、对照品溶液ii和供试品溶液的进样体积均为10～30μl；检测器为二极管阵列检测器。

38、进一步的，不同对照品系列溶液i中尿嘧啶核苷的浓度在10.01～60.05μg/ml之间、鸟嘌呤核苷的浓度在8.99～53.93μg/ml之间、腺嘌呤核苷的浓度在9.44～56.61μg/ml之间、对羟基苯甲酸苷的浓度在9.82～58.91μg/ml之间、5-羟甲基糠醛的浓度在9.60～57.62μg/ml之间、紫丁香苷的浓度在11.80～70.82μg/ml之间、对羟基红花黄色素a的浓度在1～65μg/ml之间；

39、不同对照品系列溶液ii中对羟基肉桂酸的浓度在9.23～55.38μg/ml之间、山萘酚3-o-芸香糖苷的浓度在12.22～73.33μg/ml之间；

40、对照品系列溶液i的溶剂为水；

41、对照品系列溶液ii的溶剂为48～52vol％的乙腈水溶液；

42、供试品溶液是取红花药物组合物用水稀释2～10倍体积制得；

43、所述高效液相色谱检测过程中9种成分的理论板数均在10000以上。

44、进一步的，所述不同化学成分对应的标准曲线如下：

45、尿嘧啶核苷对应的标准曲线为y＝46.13562x+1.73333，r2＝0.99992；

46、鸟嘌呤核苷对应的标准曲线为y＝42.86719x-0.26667，r2＝0.99995；

47、腺嘌呤核苷对应的标准曲线为y＝50.50161x+4.46667，r2＝0.99997；

48、对羟基苯甲酸苷对应的标准曲线为43.57603x-2.06667，r2＝0.99994；

49、5-羟甲基糠醛对应的标准曲线为y＝43.04129x-3.60000，r2＝0.99994；

50、对羟基肉桂酸对应的标准曲线为y＝105.70592x+19.66667，r2＝0.99993；

51、山萘酚3-o-芸香糖苷对应的标准曲线为y＝15.47304x-0.06667，r2＝0.99992；

52、紫丁香苷对应的标准曲线为y＝40.00366x+1.46667，r2＝0.99992；

53、羟基红花黄色素a对应的标准曲线为y＝40.31518x-18.93333，r2＝0.99946。

54、本发明的同时测定红花药物组合物中9种成分的方法的有益效果为：

55、本发明利用高效液相色谱一次性检测红花药物组合物中尿嘧啶核苷、鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷、对羟基苯甲酸苷、5-羟甲基糠醛、对羟基肉桂酸、山萘酚3-o-芸香糖苷、紫丁香苷、羟基红花黄色素a共9种化学成分的含量测定方法，实现对红花药物组合物中多个指标成分的控制；

56、本发明通过紫外扫描上述9种成分的紫外吸收，确定了不同成分所适宜的检测波长，其中，尿嘧啶苷、鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷、对羟基苯甲酸苷和5-羟甲基糠醛的检测波长为252～256nm；对羟基肉桂酸、山柰酚3-o-芸香糖苷、紫丁香苷的检测波长为262～270nm；羟基红花黄色素a检测波长为408～412nm。

57、本发明采用通过调整洗脱过程中的工艺参数，能够同时测定红花药物组合物中9种成分的含量，可实现良好的分离效果，且相互之间无干扰，测定结果准确，达到了多指标控制红花药物组合物质量的目的，且操作简单，快捷，易于掌握；

58、本发明的方法专属性强、准确度高、精密度高、且线性关系良好；

59、本发明仅通过一次测定，即完成了9种成分的含量测定，能够快速、简便的获知红花药物组合物的质量情况，解决了现有技术的检测方法仅能够测定3种以内成分的含量，无法全面控制红花药物组合物质量的问题，从而实现了通过测定9种化学成分的含量来控制红花药物组合物质量的目的。