用于阻止聚合物染料-抗体缀合物之间的非特异性相互作用的组合物和方法与流程

背景技术：

1、聚合物染料缀合物是明亮的(bright)，并提供可用于多色流式细胞术测定的优异性能。一般而言，聚合物染料缀合物由于其独特且复杂的结构而表现出高亮度。但是其独特且复杂的结构也导致一些显著的限制。

2、聚合物染料是疏水性的，并具有大的表观分子量，这使得它们易于在水性缓冲剂中聚集。因此，当聚合物染料与抗体缀合时，所得缀合物也可具有与彼此相互作用和/或与同一样品中存在的其他聚合物染料缀合物相互作用的倾向。当使用多于一种聚合物染料缀合物对同一样品进行染色时，可发生聚合物染料之间的非特异性相互作用，这可以导致数据欠补偿。

3、可消除聚合物染料缀合物之间非特异性相互作用的专门的染色缓冲剂是高度期望的。

技术实现思路

1、聚合物染料缀合物由于其性质可彼此相互作用，导致非特异性结合。本公开内容提供了用于降低或阻止聚合物染料缀合物之间的非特异性相互作用的组合物。

2、本公开内容提供了能够降低染料缀合物之间的非特异性相互作用的组合物，其包含聚合物染料的一种或更多种非荧光组分和缓冲剂。所述组合物任选地还可包含非离子表面活性剂。所述组合物任选地还可包含蛋白质稳定剂。所述组合物任选地还可包含防腐剂。

3、本公开内容提供了染色缓冲剂组合物，其包含聚合物染料的一种或更多种非荧光组分、非离子表面活性剂和缓冲剂，其中所述组合物能够降低非特异性结合，例如一种或更多种荧光聚合物染料缀合物之间的聚合物-聚合物相互作用。

4、聚合物染料的非荧光组分可以是聚合物染料的单体组分、光漂白的聚合物染料和包含猝灭部分的聚合物染料(例如猝灭的聚合物染料)中的一种或更多种。

5、本公开内容提供了这样的组合物，其包含在缓冲剂中的聚合物染料的单体组分。

6、本公开内容提供了这样的组合物，其包含在缓冲剂中的光漂白的染料。

7、本公开内容提供了这样的组合物，其包含在缓冲剂中的猝灭的聚合物染料。

8、本公开内容提供了这样的组合物，其包含在缓冲剂中的聚合物染料的单体组分和猝灭的聚合物染料。

9、本公开内容提供了这样的组合物，其包含在缓冲剂中的聚合物染料的单体组分和光漂白的染料。

10、本公开内容的组合物任选地还可包含蛋白质稳定剂、非离子表面活性剂和/或防腐剂。例如，本公开内容的工作浓度组合物(1×)还可包含0.1至10mg/ml、0.5至5mg/ml、1至3mg/ml、或约2mg/ml的蛋白质稳定剂。

11、本公开内容的浓缩的染色缓冲剂组合物(10×)还可包含1至100mg/ml、2至50mg/ml、5至40mg/ml、10至30mg/ml、或约20mg/ml的蛋白质稳定剂。在一些实施方案中，蛋白质稳定剂以0.1至100mg/ml、0.2至50mg/ml、1至20mg/ml或1至10mg/ml存在。

12、本公开内容的工作浓度组合物(1×)可包含0.01％至10％、0.01％至4％、0.01％至2％、0.01％至0.4％或约0.02％(重量/体积)的非离子表面活性剂。

13、本公开内容的浓缩的染色缓冲剂组合物(10×)可包含0.1％至40％、0.5％至20％、1％至10％或约5％(重量/体积)的非离子表面活性剂。

14、本公开内容的组合物可任选地还包含0.01％至0.5％、0.03％至0.3％、或0.05％至0.2％、或约0.1％(重量/体积)的防腐剂。

15、例如，本公开内容提供了工作浓度染色缓冲剂组合物(1×)，其包含在生物缓冲剂中的0.3至1.5mg/ml、0.5至1.2mg/ml或约1mg/ml的猝灭的聚合物染料和任选地0.1至10mg/ml或0.2至5mg/ml的蛋白质稳定剂，所述生物缓冲剂例如pbs缓冲剂，其包含0.01％至10％或0.1％至4％(重量/体积)的非离子表面活性剂。

16、本公开内容提供了浓缩的染色缓冲剂组合物(10×)，其包含在生物缓冲剂中的3至15mg/ml、5至12mg/ml、或约10mg/ml的猝灭的聚合物染料和任选地1至100mg/ml或2至50mg/ml的蛋白质稳定剂，所述生物缓冲剂例如pbs缓冲剂，其包含0.1％至40％或1％至10％(重量/体积)的非离子表面活性剂。发现该组合物显著降低了多色染料缀合物组中的非特异性聚合物染料缀合物相互作用。这在fca流式细胞术分析中通过将染色且裂解的血液样品与没有所述猝灭的聚合物染料的情况下的相同样品比较得到证明。

17、本公开内容提供了工作浓度染色缓冲剂组合物(1×)，其包含在生物缓冲剂中的20至40mg/ml、或约30mg/ml的聚合物染料的单体组分；0.2至0.8mg/ml或0.3至0.7mg/ml的猝灭的聚合物染料；以及0.01％至10％或0.1％至4％的非离子表面活性剂。工作浓度组合物(1×)还可包含0.1至10mg/ml、0.5至5mg/ml的蛋白质稳定剂。

18、本公开内容提供了浓缩的染色缓冲剂组合物(10×)，其包含在生物缓冲剂中的200至400mg/ml、或约300mg/ml的聚合物染料的单体组分；2至8mg/ml或3至7mg/ml猝灭的聚合物染料；以及0.1％至40％或1％至20％的非离子表面活性剂。浓缩的组合物(10×)还可包含1至100mg/ml或5至50mg/ml的蛋白质稳定剂。

19、发现该组合物显著降低了多色染料缀合物组中的非特异性聚合物染料缀合物相互作用。这在fca流式细胞术分析中通过将染色且裂解的全血样品与没有所述单体组分且没有所述猝灭的聚合物染料的情况下的相同样品比较得到证明。

20、本公开内容提供了工作浓度染色缓冲剂组合物(1×)，其包含在生物缓冲剂中的20至40mg/ml、或约30mg/ml的聚合物染料的单体组分；0.2至0.8mg/ml、0.3至0.7mg/ml、或约0.5mg/ml的光漂白的聚合物染料；以及0.01％至10％或0.1％至4％的非离子表面活性剂。工作浓度组合物(1×)还可包含0.1至10mg/ml或0.5至5mg/ml的蛋白质稳定剂。

21、本公开内容提供了浓缩的染色缓冲剂组合物(10×)，其包含在生物缓冲剂中的200至400mg/ml、或约300mg/ml的聚合物染料的单体组分，2至8mg/ml、3至7mg/ml、或约5mg/ml的光漂白的聚合物染料，以及0.1％至40％或1％至20％的非离子表面活性剂。浓缩的组合物(10×)还可包含1至100mg/ml或2至50mg/ml的蛋白质稳定剂。

22、发现该组合物显著降低了多色染料缀合物组中的非特异性聚合物染料缀合物相互作用。这在fca分析中通过将染色且裂解的全血样品与没有所述单体组分且没有所述光漂白的聚合物染料的情况下的相同样品比较得到证明。

23、提供了用于与至少一种荧光聚合物染料一起使用以用于对生物样品染色的组合物，所述荧光聚合物染料与结合配偶体缀合，所述组合物包含非离子表面活性剂和生物缓冲剂；其中所述组合物与不存在所述组合物的情况下的至少一种荧光聚合物染料缀合物相比，降低了所述至少一种荧光聚合物染料缀合物的非特异性结合。非离子表面活性剂可以是泊洛沙姆(poloxamer)。

24、提供了用于检测样品中分析物的方法，其包括：将至少一种或至少两种聚合物染料缀合物添加至根据本公开内容的染色缓冲剂组合物以形成聚合物染料缀合物组合物；使怀疑包含分析物的生物样品与聚合物染料缀合物组合物接触以与分析物形成荧光聚合物染料缀合物复合物；将可激发至少一种或至少两种荧光聚合物染料缀合物复合物的光源施加于样品；以及检测从荧光聚合物染料缀合物复合物发射的光。检测光可包括通过流式细胞术进行分析以获得第一流式细胞术图，其中当与包括使生物样品与不含非离子表面活性剂并且不含第一聚合物染料的非荧光组分的组合物接触而获得的第二流式细胞术图相比时，所述第一流式细胞术图表现出由以下组成的组中的一者或更多者：聚合物染料缀合物的非特异性相互作用降低；和聚合物染料缀合物的聚集减少。

25、生物样品可以是血液、骨髓、脾细胞、淋巴细胞、骨髓吸出物、尿液、血清、唾液、脑脊液、尿液、羊水、间质液、粪便、黏液、组织样品或细胞培养样品。生物样品可以是全血样品。

26、来自光源的光的波长可为约340nm至约800nm，或约340nm至约450nm。

27、本公开内容提供了包含根据本公开内容的染色缓冲剂组合物的试剂盒，其中所述试剂盒包含单独的容器，所述单独的容器包含所述第一聚合物染料的一种或更多种非荧光组分；和所述至少一种荧光聚合物染料缀合物。染色缓冲剂组合物可包含在包含一种或更多种非荧光组分的同一容器中的非离子表面活性剂。染色缓冲剂组合物可包含在一个容器中的第一聚合物染料的两种或更多种非荧光组分和任选地非离子表面活性剂；以及在单独容器中的至少一种荧光聚合物染料缀合物。