用于恶性周围神经鞘瘤的鉴别诊断的组合物的制作方法

本发明涉及用于恶性周围神经鞘瘤(malignant peripheral nerve sheathtumor，mpnst)的鉴别诊断的组合物、包含所述组合物的鉴别诊断试剂盒、使用所述组合物提供mpnst的鉴别诊断所需信息的方法以及筛选用于预防、缓解和治疗mpnst的物质的方法。本发明要求2021年3月24日提交的韩国专利申请第10-2021-0037912号和2022年3月18日提交的韩国专利申请第10-2022-0034295号的优先权和权益，其公开内容通过引用整体并入本文。

背景技术：

1、i型神经纤维瘤病(neurofibromatosis type i，以下简称“nf-1”)由fredrichvon recklinghausen于1882年首次描述，是最常见的遗传性疾病之一。nf-1通过常染色体显性遗传来遗传，影响全世界1:3,000人。nf-1的特点是皮肤上的多个咖啡斑和皮肤中的神经纤维瘤。此外，不同程度的神经、骨骼和肿瘤表现也可能影响患者。nf-1患者具有患中枢和周围神经系统肿瘤的风险，包括丛状神经纤维瘤(plexiform neurofibromas，pn；27％)、视神经胶质瘤(optic nerve gliomas；15-20％)、嗜铬细胞瘤(pheochromocytomas；1％)和恶性周围神经鞘瘤(malignant peripheral nerve sheath tumor，mpnst；8-13％)。这比一般人群高出约1,000倍。

2、恶性周围神经鞘瘤(以下简称“mpnst”)是对nf-1患者生存率影响最大的并发症之一。已知它是由pn的恶变引起的，pn是一种良性髓鞘肿瘤，但当出现剧烈疼痛、纤维化面积急剧增大和神经系统症状时必须产生怀疑。

3、到目前为止，18f-氟脱氧葡萄糖正电子发射计算机断层扫描(18f-fluorodeoxyglucose positron emission computerized tomography，18f-fdg-pet)已被用于区分良性肿瘤和mpnst，并且当怀疑为恶性肿瘤时，基于组织学结果诊断mpnst。

4、在大多数mpnst中，组织学上形成梭形细胞(spindle cell)束，观察到具有核分化的细胞并浸润周围组织。为了诊断mpnst，使用s100蛋白染色，其在50％至90％的mpnst中呈阳性，并且此外，leu-7蛋白和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein)在约50％的mpnst中呈阳性。波形蛋白(vimentin)也是用于mpnst诊断的病理标志物，但其对梭形细胞具有特异性，并在mpnst特异性诊断中受到限制。因此，需要能够明确判断nf-1中mpnst进程的病理指标。

5、mpnst是一种诊断后需要手术切除的疾病。手术后，约50％的mpnst有复发风险，并且当手术未能实现完全切除时，可能需要化学治疗和放射治疗。尽管如此，mpnst患者的5年生存率仍保持在20％至50％。

6、在迄今为止还没有可以靶向mpnst的治疗方法的情况下，人们认为寻找可以在血液或尿液中早期诊断mpnst的生物标志物能够有助于提升患者的生存率。

技术实现思路

1、[技术问题]

2、作为对恶性周围神经鞘瘤(mpnst)和良性神经纤维瘤组织进行广泛的定量和定性蛋白质组分析的结果，本发明的发明人鉴定了在mpnst组织中特异性表达的蛋白质，从而完成了本发明。

3、因此，本发明旨在提供一种用于mpnst的鉴别诊断的组合物。

4、本发明还旨在提供一种用于mpnst的鉴别诊断的试剂盒，其包含根据本发明的组合物。

5、本发明还旨在提供一种提供mpnst的鉴别诊断所需信息的方法。

6、本发明还旨在提供一种用于预防、减轻或治疗mpnst的组合物。

7、本发明还旨在提供一种筛选用于预防、减轻或治疗mpnst的物质的方法。

8、然而，本发明要解决的技术问题不限于上述问题，并且本领域普通技术人员从以下描述中将充分理解本文中未描述的其他问题。

9、[技术方案]

10、为了实现本发明的目的，本发明提供了一种用于mpnst的鉴别诊断的组合物，其包含作为活性成分的试剂，所述试剂测量选自由内皮唾液酸蛋白(endosialin)、sparc样蛋白1(sparc-like protein 1)和中性粒细胞胶原酶(neutrophil collagenase)组成的组中的一种或多种蛋白质的表达水平或其mrna的表达水平。

11、在本发明的一个实施方案中，所述组合物可以从i型神经纤维瘤病(nf-1)中诊断mpnst，并将其与nf-1区分开。

12、在本发明的另一个实施方案中，测量蛋白质的表达水平的试剂可以是对该蛋白质具有特异性的抗体或适体，但本发明不限于此。

13、在本发明的又一个实施方案中，测量mrna的表达水平的试剂可以是与该mrna特异性结合的引物组或探针，但本发明不限于此。

14、另外，本发明提供了用于mpnst的鉴别诊断的试剂盒，其包含根据本发明的组合物。

15、在本发明的一个实施方案中，试剂盒可以包含说明书，该说明书用于当检测到选自由内皮唾液酸蛋白、sparc样蛋白1和中性粒细胞胶原酶组成的组中的一种或多种蛋白质的表达或其mrna的表达时，或当其表达水平高于良性神经纤维瘤样品的表达水平时，将病例确定为mpnst。

16、另外，本发明提供了一种提供mpnst的鉴别诊断所需信息的方法，包括测量从受试者分离的生物样品中的选自由内皮唾液酸蛋白、sparc样蛋白1和中性粒细胞胶原酶组成的组中的一种或多种蛋白质的表达水平或其mrna的表达水平。

17、另外，本发明提供了一种进行mpnst的鉴别诊断的方法，包括测量从受试者分离的生物样品中的选自由内皮唾液酸蛋白、sparc样蛋白1和中性粒细胞胶原酶组成的组中的一种或多种蛋白质的表达水平或其mrna的表达水平。

18、在本发明的一个实施方案中，所述方法还可以包括当检测到选自由内皮唾液酸蛋白、sparc样蛋白1和中性粒细胞胶原酶组成的组中的一种或多种蛋白质的表达或其mrna的表达时，或当其表达水平高于从nf-1患者分离的生物样品的表达水平时，将病例诊断为mpnst。

19、在本发明的另一个实施方案中，受试者可以是怀疑患有mpnst或诊断患有nf-1的患者。

20、在本发明的另一个实施方案中，生物样品可以是选自由以下组成的组中的一种或多种：血液、全血、血浆、尿液、组织、细胞、器官、骨髓、微针抽吸样本、微针冲洗液、核心针活检(core needle biopsy)样本和唾液，但本发明不限于此。

21、在本发明的另一个实施方案中，蛋白质表达水平可以通过选自由以下组成的组中的一种或多种方法测量：蛋白质印迹(western blotting)、酶联免疫吸附测定(elisa)、放射免疫测定(ria)、放射免疫扩散、ouchterlony免疫扩散(ouchterlonyimmunodiffusion)、rocket免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis)、组织免疫染色、免疫沉淀测定、补体固定测定、质谱(mass spectrometry)、荧光激活细胞分选(facs)和蛋白质芯片，但本发明不限于此。

22、在本发明的另一个实施方案中，mrna表达水平可以通过选自由以下组成的组中的一种或多种方法测量：pcr、rna酶保护测定、rna印迹(northern blotting)、dna印迹(southern blotting)、原位杂交和dna芯片，但本发明不限于此。

23、另外，本发明提供了一种用于预防或治疗mpnst的药物组合物，其包含作为活性成分的参与选自由tgf-β信号传导途径、ilk信号传导途径、肌动蛋白-细胞骨架(actin-cytoskeleton)信号传导途径和rhogdi信号传导途径组成的组中的信号传导途径的一种或多种蛋白质的活性的抑制剂，或编码所述蛋白质的基因的表达的抑制剂。

24、此外，本发明提供了一种预防或治疗mpnst的方法，包括向有此需要的受试者施用参与选自由tgf-β信号传导途径、ilk信号传导途径、肌动蛋白-细胞骨架信号传导途径和rhogdi信号传导途径组成的组中的信号传导途径的一种或多种蛋白质的活性的抑制剂，或编码所述蛋白质的基因的表达的抑制剂。

25、此外，本发明提供了参与选自由tgf-β信号传导途径、ilk信号传导途径、肌动蛋白-细胞骨架信号传导途径和rhogdi信号传导途径组成的组中的信号传导途径的一种或多种蛋白质的活性的抑制剂或者编码所述蛋白质的基因的表达的抑制剂用于预防或治疗mpnst的用途。

26、另外，本发明提供了一种用于预防或改善mpnst的保健功能食品组合物，其包含作为活性成分的参与选自由tgf-β信号传导途径、ilk信号传导途径、肌动蛋白-细胞骨架信号传导途径和rhogdi信号传导途径组成的组中的信号传导途径的一种或多种蛋白质的活性的抑制剂，或编码所述蛋白质的基因的表达的抑制剂。

27、在本发明的一个实施方案中，信号传导蛋白可以是激酶(kinase)，但本发明不限于此。

28、在本发明的另一个实施方案中，激酶可以是由选自由cdk4、stk10、cdk5、map2k1、alpk3、pnkp、pdk3、phkg1、cfl1和pacsin3组成的组中的一种或多种基因编码的激酶，但本发明不限于此。

29、在本发明的另一个实施方案中，所述蛋白质活性抑制剂可以是选自由以下组成的组中的一种或多种：与所述蛋白质特异性结合的肽、抗体、适体和化合物，但本发明不限于此。

30、在本发明的另一个实施方案中，信号传导蛋白活性抑制剂可以是选自由以下组成的组中的一种或多种：司美替尼(selumetinib)、夫拉平度(alvocidib)、purvalanol、帕博西利(palbociclib)、瑞博西利(ribociclib)、阿贝西利(abemaciclib)、福他替尼(fostamatinib)、比美替尼(binimetinib)、根赤壳菌素(radicicol)、azd-8330、二氢硫辛酸(dihydrolipoic acid)、阿特波龙(alsterpaullone)、hymenialdisine、靛玉红-3'-单肟(indirubin-3'-monoxime)、olomoucine、su9516和6-苯基[5h]吡咯并[2,3-b]吡嗪，但本发明不限于此。

31、在本发明的另一个实施方案中，所述基因表达抑制剂可以是选自由以下组成的组中的一种或多种：与该基因的mrna互补结合的mirna、sirna、shrna、核酶(ribozyme)、dna酶、肽核酸(peptide nucleic acid，pna)和反义寡核苷酸，但本发明不限于此。

32、另外，本发明提供了一种筛选用于预防、减轻或治疗mpnst的物质的方法，包括：(a)使候选物质与分离的细胞或组织接触；(b)测量所述细胞或组织中参与选自由tgf-β信号传导途径、ilk信号传导途径、肌动蛋白-细胞骨架信号传导途径和rhogdi信号传导途径组成的组中的信号传导途径的一种或多种信号传导蛋白的活性，或编码所述蛋白质的基因的表达水平；和(c)当与所述候选物质接触的细胞或组织中所述蛋白质的活性或编码所述蛋白质的基因的表达水平低于与所述候选物质接触之前的水平时，将所述候选物质确定为用于预防、减轻或治疗mpnst的物质。

33、在本发明的一个实施方案中，信号传导蛋白可以是激酶，但本发明不限于此。

34、在本发明的另一个实施方案中，激酶可以是由选自由cdk4、stk10、cdk5、map2k1、alpk3、pnkp、pdk3、phkg1、cfl1和pacsin3组成的组中的一种或多种基因编码的激酶，但本发明不限于此。

35、在本发明的又一个实施方案中，分离的细胞或组织可以是神经细胞或神经组织，但本发明不限于此。

36、[有益效果]

37、本发明涉及一种用于恶性周围神经鞘瘤(mpnst)的鉴别诊断的组合物，并且本发明的能够检测蛋白质标志物的组合物可用于预测、诊断和治疗i型神经纤维瘤病(nf-1)患者中的恶性肿瘤。