色谱法和设备、尤其是用于超临界液相色谱的方法和设备与流程

本发明涉及一种色谱法、尤其是用于超临界液相色谱的方法，在所述方法中，通过超临界液相色谱法将要分离的起始物质分离成多个级分，并且作为目标产品级分导出具有起始物质的至少一个目标组分的至少一个预先规定的目标含量的至少一个所述级分。此外，本发明还涉及一种用于超临界液相色谱法的设备。

背景技术：

1、上述类型的色谱法是通过实用而已知的。引导要分离的物质混合物通过色谱柱，所述色谱柱具有固定相，所述固定相包括例如所谓的由多孔材料组成的填料。物质混合物中不同的物质在流动通过固定相时受到不同的保留作用，即，由于固定相中不同强度的相互作用，所述物质以不同的速度流动通过固定相。这使得可以进行分离。

2、用于实施超临界液相色谱法(sfc)的方法主要用于从脂肪酸混合物中分离出多不饱和脂肪酸。

技术实现思路

1、本发明的目的是，提出一种前面所述类型的方法，所述方法提供更高的产量。

2、根据本发明，这个目的这样来实现，即，不具有预先规定的目标含量的级分形成剩余级分，并且将至少一种所述剩余级分的至少一部分送入仍要分离的起始物质中。

3、有利的是，剩余级分或剩余级分的至少一些部分在分离过程中循环使用。在单一的色谱法设备中，可以对一种物质多次实施分离方法。有利地可以提高目标产品的产量。

4、在本发明的一个特别优选的设计方案中，将目标组分的含量相比于起始物质的目标组分含量与预先规定的目标含量的偏差更小的至少一种所述剩余级分的至少一部分送入仍要分离的起始物质中。可以理解的是，可以将具有上面提及的目标组分含量的剩余级分必要时可以完全送入还要分离的起始物质中。适宜地的是，只将目标组分的含量相比于起始物质的目标组分含量与预先规定的目标含量更小的剩余级分或将其至少一些部分送入还要分离的起始物质中。

5、目标组分含量相比于起始物质的目标组分含量与预先规定的目标含量的偏差更小的剩余级分的所述部分可以直接在根据本发明的方法之内循环使用，其方式是，将这个部分供应给设定为用于分离的起始物质。由此，一方面，要利用色谱法处理的分离物质中的目标组分含量更大程度地接近目标含量，从而可以实现目标产品的较高产量。另一方面，可以将处于要循环使用的剩余余级分中的目标组分供应给目标产品级分。

6、适宜地导出目标组分含量相比于起始物质的目标组分含量与预先规定的目标含量的偏差更大的剩余级分，以用于进一步的操作，尤其是再处理或/和废弃处理。

7、在本发明的一个实施形式中，预先规定的目标含量是最低含量或/和最高含量。如果与起始物质相比应增大目标产品中的各组分的含量，则预先规定的目标含量通常是最低含量。如果与起始物质相比应降低目标产品中各组分的含量，则预先规定的目标含量通常是最大含量。

8、适宜的是，在目标含量是最低含量的情况下，只将目标组分含量大于起始物质的目标组分含量的剩余级分供应给还要分离的起始物质。

9、优选将目标组分含量小于起始物质的目标组分含量的剩余级分导出，以用于进一步的操作，尤其是用于再处理和/或废弃处理。

10、相反，适宜的是，在目标含量是最高含量的情况下，只将目标组分含量比起始物质的目标组分含量更小的剩余级分供应给还要分离的起始物质。

11、优选然后将目标组分含量大于起始物质的目标组分含量的剩余级分导出，以用于进一步的操作，尤其是用于再处理和/或废弃处理。

12、在本发明的另一个实施形式中，确定起始物质中和级分中的至少两个、必要时多个不同的目标组分的含量，并且优选将剩余级分的不同目标组分含量与起始物质的目标组分含量相比较。有利地可以考虑多个组分的含量。尤其是，对于个别组分的目标组分可以设定最低含量，而对于其他组分设定最高含量。

13、在本发明的一个设计方案中，优选利用适当的测量装置确定起始物质中和各级分中的目标组分含量，优选连续地进行目标组分含量确定。

14、适宜的是，将剩余级分的目标组分含量与起始物质的目标组分含量进行比较。根据比较结果来决定，将所述级分作为目标产品级分还是作为剩余级分来处理，并且尤其是将剩余级分送入起始物质中还是将其导出，以用于进一步的操作。

15、可以设定，将至少个别剩余级分或所有剩余级分相互混合，并确定剩余级分混合物的目标组分含量。根据所述剩余级分混合物的目标组分含量决定，将所述剩余级分混合物送入起始物质中还将其导出，以用于进一步的操作。

16、在本发明的优选实施形式中，至少目标组分含量的确定和比较以及剩余级分向要分离的起始物质的供应是自动进行的。根据目标组分含量确定来确认，如何处理相应的级分。如果目标组分含量确定得出，相应的级分具有可以将该级分用作目标产品级分的目标组分含量，则适宜地作为目标产品自动导出相应的级分。如果所述级分具有不同的目标组分含量，则优选将相应的级分自动供应给起始物质或对其进行废弃处理。

17、在本发明的另一个实施形式中，在通过色谱法对起始物质进行分离之前，将剩余级分供应给还要分离的起始物质。优选为此设有容器，在所述容器中将剩余级分送入起始物质中。适宜地在分离之前将起始物质和剩余级分相混合。

18、在本发明的一个设计方案中，根据起始物质中和/或目标产品级分中的目标组分的含量，设置、优选调节在分离起始物质之前供应给还要分离的起始物质剩余级分的流。

19、根据本发明的色谱法已经证实对于实施超临界液相色谱法的特别有利的。此外，所述方法还可有利地用于液相色谱法，尤其是用于薄层色谱法或柱色谱法，尤其是低压液相色谱法、高效液相色谱法(hplc)、凝胶渗透色谱法(gpc)或离子交换色谱法(ic)，或者场流分级法(fff)。

20、根据本发明的色谱法可以按所谓的批量工艺实施。此时，适宜地分步进行分离。尤其是在第一分离步骤中实施的是，分离成多个级分，并且如上面所述处理这些级分。必要时在分离起始物质的情况下，下一个步骤与剩余级分或剩余级分的一部分一起进行。

21、但根据本发明的方法也可以应用在连续实施的色谱法中。在这种色谱法中将多个色谱柱相互连接，这种色谱法例如真移动床色谱法(tmb)和模拟移动床色谱法(smb)。

22、在smb色谱法中，多个色谱柱串联地相互连接。在色谱柱之间的不同连接部位处输入物质混合物和洗脱液。还在其他连接部位处提取萃余液和萃取物，作为萃余液提取在色谱法中受到保留作用较低的一种或必要时多种物质，并且作为萃取物提取在色谱法中受到保留作用较高的一种或必要时物质。因此，可以借助于已知的色谱法工艺根据色谱法的操作将物质混合物分离成两种不同的分物质混合物，其中第一分物质混合物含有受到保留作用较低的物质，且第二分物质混合物含有受到保留作用较高的物质。

23、适宜的是连续实施所述方法。已经证明，模拟移动床(smb)法尤其适于连续实施所述方法。

24、在能溶于用于色谱法的洗脱液中的起始物质适于利用根据本发明方法来处理。

25、尤其是对于超临界液相色谱法，起始物质可以是至少一种物质或多个物质的混合物，所述物质可溶于超临界co2或可溶于由超临界co2和至少一种附加的溶剂、如甲醇或/和乙醇组成的混合物中。

26、如果所述起始物质是或包含脂肪酸的混合物和/或脂肪酸的衍生物的混合物，优选是不饱和脂肪酸、尤其是多不饱和脂肪酸的混合物或/和是其衍生物的混合物，则所述方法已经证实是特别有利的。此时，目标组分可以是多不饱和脂肪酸和/或其衍生物。目标组分特别优选地是二十碳五烯酸(epa)和/或二十二碳六烯酸(dha)。

27、epa的目标组分最低含量适宜地为900mg/g，优选为970mg/g。

28、dha的目标组分最低含量适宜地为850mg/g，优选为900mg/g。

29、此外，起始物质也可以是或包含羧酸和/或其衍生物的混合物，优选地大麻素和/或大麻素衍生物的混合物。目标组分优选是大麻二酚、优选是cbd，或四氢大麻酚(thc)或其衍生物、尤其是其酸，优选是cbd/a、thc/a、cbg/a、cbn/a或/和cbc/a。

30、在本发明的一个实施形式中，起始物质是或包含以下混合物，所述混合物包含多不饱和脂肪酸的代谢物、优选是二十碳五烯酸(epa)和/或二十二碳六烯酸(dha)和/或二十二碳五烯酸(dpa)的代谢物，或包含具有与代谢物相同的组成的物质。

31、目标组分适宜地是多不饱和脂肪酸的代谢物、优选是二十碳五烯酸(epa)和/或二十二碳六烯酸(dha)和/或二十二碳五烯酸(dpa)的代谢物，或者是具有与代谢物相同的组成的物质。

32、在本发明的另一个设计方案中，所述起始物质是或包括以下混合物，所述混合物包含至少一种促炎症消退介质(prm)和/或特异性促炎症消退介质(spm)，所述促炎症消退介质和/或特异性促炎症消退介质优选衍生自epa、dha或/和dpa。

33、所述目标组分适宜地是从所述物质混合物中分离出的至少一种促炎症消退介质(prm)和/或特异性促炎症消退介质(spm)，所述促炎症消退介质和/或特异性促炎症消退介质优选衍生自epa、dha或/和dpa。

34、在本发明的另一个设计方案中，所述起始物质是或包括：促炎症消退介质(prm)的混合物，所述促炎症消退介质优选是18-hepe、17-hdha和/或14-hdha，和/或特异性促炎症消退介质(spm)的混合物，所述特异性促炎症消退介质优选是脂氧素、消退素、保护素和/或maresins。

35、所述目标组分适宜地是至少一种促炎症消退介质(prm)，所述促炎症消退介质优选是18-hepe、17-hdha和/或14-hdha，和/或是特异性促炎症消退介质(spm)，所述特异性促炎症消退介质优选是脂氧素、消退素、保护素和/或maresin。

36、所述促炎症消退介质(prm)优选是以下物质组中的至少一种物质：18-hepe、17-hdha、14-hdha。

37、所述特异性促炎症消退介质(spm)优选是以下物质组中的至少一种物质：脂氧素、消退素、保护素、maresin。

38、所述脂氧素优选是以下物质组中的至少一种物质：lxa4(5s、6r、15s-三羟基-7e、9e、11z、13e-ete)、lxb4(5s、14r、15s-三羟基-6e、8z、10e、12e-ete)、15-epi-lxa4(5s、6r、15r-三羟基-7e、9e、11z、13e-二十碳四烯酸)、15-epi-lxb4(5s、14r、15r-三羟基-6e、8z、10e、12e-二十碳三烯酸)。

39、所述消退素适宜地衍生自epa、dha或/和dpa。所述消退素优选至少是：

40、-以下物质组中的至少一种物质：rve1(5s、12r、18r-三羟基-6z、8e、10e、14z、16e-epa)、18s-rve1(5s、12r、18s-三羟基-6z、8e、10e、14z、16e-epa)、rve2(5s、18r-二羟基-6e、8z、11z、14z、16e-epa)、rve3(17r、18r/s-二羟基-5z、8z、11z、13e、15e-epa)，

41、和/或

42、-以下物质组中的至少一种物质：rvd1(7s、8r、17s-三羟基-4z、9e、11e、13z、15e、19z-dha)、rvd2(7s、16r、17s-三羟基-4z、8e、10z、12e、14e、19z-dha)、rvd3(4s、11r、17s-三羟基-5z、7e、9e、13z、15e、19z-dha)，rvd4(4s、5r、17s-三羟基-6e、8e、10z、13z、15e、19z-dha)，rvd5(7s、17s-二羟基-4z、8e、10z、13z、15e、19z-dha)，rvd6(4s、17s-二羟基-5e、7z、10z、13z、15e、19z-dha)，

43、和/或

44、-以下物质组中的至少一种物质：rvt1(7、13r、20-三羟基-8e、10z、14e、16z、18e-dpa)、rvt2(7、8、13r-三羟基-9e、11e、14e、16z、19z-dpa)，rvt3(7、12、13r-三羟基-8z，10e，14e，16z、19z-dpa)，rvt4(7、13r-二羟基-8e、10z、14e、16z、19z-dpa)。

45、所述保护素适宜地衍生自dha或/和dpa。

46、所述保护素优选至少是：

47、-以下物质组中的至少一种物质：pd1或npd1(10r、17s-二羟基-4z、7z、11e、13e、15z、19z-dha)、pdx(10s、17s-二羟基-4z、7z、11e、13z、15e、19z-dha)、22-羟基-pd1(10r、17s、22-三羟基-4z、7z、11e、13e、15z、19z-dha)、17-epi-pd1或at-pd1(10r、17r-二羟基-4z、7z、11e、13e、15z、19z-dha)、10-epi-pd1或ent-at-npd1(10s、17s-二羟基-4z、7z、11e、13e、15z、19z-dha)，

48、和/或

49、-以下物质组中的至少一种物质：pd1n-3(10、17-二羟基-7、11、13、15、19-dpa)、pd2n-3(16、17-二羟基-7、10、12、14、19-dpa)。

50、所述maresin适宜地衍生自dha或/和dpa。

51、马来素优选地至少是

52、-以下物质组中的至少一种物质：mar1(7r、14s-二羟基-4z、8e、10e、12z、16z、19z-dha)、mar2(13r、14s-二羟基-4z、7z、9e、11e、16z、19z-dha)、7-epi-mar1(7s、14s-二羟基-4z、8e、10z、12e、16z、19z-dha)、mar-l1(14s、22-二羟基-4z、7z、10z、12e、16z、19z-dha)、mar-l2(14r、22-二羟基-4z、7z、10z、12e、16z、19z-dha)，

53、和/或

54、-以下物质组中的至少一种物质：mar1n-3(7s、14s-二羟基-8e、10e、12z、16z、19z-dpa)、mar2n-3(13、14-二羟基-7、9、111、16、19-dpa)、mar3n-3(13、14-二羟基-7、9、111、16、19-dpa)。

55、作为用于超临界液相色谱法(sfc)的洗脱液，优选使用超临界二氧化碳、丙烷、正戊烷、三氟甲烯酮、水或氨。洗脱液可以具有溶剂作为共溶剂，优选是乙醇、甲醇、异丙醇、乙腈、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯和/或三氟乙酸。

56、适宜的是，在实施分离后，将色谱法的洗脱液重新用于实施色谱法，如例如这本身对于超临界液相色谱法(sfc)由现有技术已知的那样。为此，在根据实施液相色谱法进行分离之后将所述洗脱液导入洗脱液贮存器，从所述洗脱液贮存器中供应洗脱液，以用于实施液相色谱法。

57、前面所述的设备包括本身已知的色谱法设备、尤其是用于超临界液相色谱法的设备的典型结构。

58、所述设备尤其是包括：分离柱、分离物质贮存器、洗脱液贮存器和用于提取所述级分的装置。分离物质贮存器和洗脱液贮存器与分离柱连接，使得相应的分离物质和洗脱液可以受监控地，优选受控制地和/或受调节地供应给分离柱。所述级分提取装置与分离柱连接，使可以尤其是受调节地和/或受控制地可以从分离柱中提取得相应的级分。此外，级分提取装置还这样分离柱相连，即，使得在实施分离之后可以将洗脱液或洗脱液混合物再次送入洗脱液贮存器中。为了提取不同的级分，所述设备优选设有多个级分分离柱，可以相应的级分导入所述级分分离柱中。分离物质贮存器优选与起始物质贮存器相连，并且优选连续地向分离物质贮存器供应起始物质。此外，分离物质贮存器适宜设置成用于供应目标组分含量大于起始物质的目标组分含量的剩余级分。为此，可以在级分提取装置和分离物质贮存器之间设置管道，可以通过所述管道将相应的剩余级分供应给分离物质贮存器。

59、在本发明的一个特别优选的实施形式中，级分提取装置的设置成用于，尤其是根据相应的目标组分含量以不同的方式传送目标产品级分和剩余级分。为此，级分提取装置适宜地具有多个设有阀的管道，通过这些管路可以选择性地传送级分。优选将目标产品级分导入为此设置的目标产品容器中。将适当的剩余级分导入分离物质容器。将其他剩余级分导入用于进一步操作的容器中。

60、所述设备适宜地包括用于测量起始物质中的目标组分含量的装置和用于测量级分中的目标组分含量的装置。此外，还可以设有用于测量处于分离容器中的分离物质中的目标组分含量的装置，在所述分离容器中，将剩余级分送入起始物质。

61、在本发明的一个设计方案中，所述设备设置成，使得级分提取装置根据利用测量装置得到的测量结果相应地传送级分。为此，所述设备可以设有调节和/或控制装置，所述调节和/或控制装置读取和评估测量值，并根据相应的评估结果尤其是在操作阀的情况下下设置级分提取装置，使得实现期望的物质传送。