一种尿液生化分析用多项复合质控品及其制备方法与流程

本发明涉及体外诊断试剂检测，具体涉及一种尿液生化分析用多项复合质控品及其制备方法。

背景技术：

1、尿液生化检测是医学检测的一种方式，包括尿常规分析、尿液中有形成分分析、尿蛋白成分定量分析、尿酶测定等。通过检测尿液，医生可以获知肾脏疾病的种类以及判断疾病的轻重程度。尿液生化检测在肾功能监测中有着举足轻重的作用。

2、目前国内尿液生化检测试剂多配套单独的质控品，尿液多项复合质控品也主要以酶类尿液多项复合质控品和特种蛋白类尿液多项复合质控品为主，但是这种质控品的稳定性并不理想，对检验机构的日常的质量监测并不友好；且现有技术合并多种类的尿液多项质控品并不多，合并离子类的基本没有相关的报道。

技术实现思路

1、本技术针对现有技术的上述不足，提供一种稳定性好、涵盖项目多，可以包括离子类、酶类以及特定蛋白类尿液生化检测项目，有利于检测机构的日常质量监测的冻干型尿液生化分析用多项复合质控品。

2、为了解决上述技术问题，本技术采用的技术方案为：一种尿液生化分析用多项复合质控品，所述的质控品包括人尿液基质、缓冲基质、质控项目添加物质、稳定物质、冻干添加物质、防腐剂(抗菌剂)；所述的质控项目添加物质至少包括离子类、酶类和蛋白类物质。

3、进一步的，所述的人尿液基质，通过如下方式获得：取0℃以下过夜的人尿液基质液，离心提取上清液，然后过0.22μm孔径滤纸低速抽滤获得。

4、进一步的，所述的质控品的缓冲基质为hepes缓冲液，优选为100mmol/l的hepes缓冲液。

5、进一步的，所述的质控项目添加物质由浓度为10-40mmol/l的无机磷，30-130mmol/l钾离子，60-200mmol/l钠离子，80-250mmol/l氯离子，1.5-4mmol/l钙离子，3-13mmol/l镁离子；150-500mmol/l尿素(urea)，0.7-1.4mmol/l尿酸(ua)，7-16mmol/l肌酐(cr)，3-15mmol/l葡萄糖(glu)，20-150mg/l白蛋白抗原(人白蛋白(alb)抗原)，0.5-10mg/lβ2-微球蛋白(β2-mg)，1.5-10mg/l尿转铁蛋白(utrf)，100-150ng/ml中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(ngal)，160-900u/lα-淀粉酶(α-amy)，8-60u/ln-乙酰-β-d-氨基葡萄糖苷酶(nag)，20-30mg/l免疫球蛋白igg(igg)，0.6-5mg/l视黄醇结合蛋白(retinol-bindingprotein，rbp)，10-50mg/lα-微球蛋白(α1-微球蛋白，α1-mg)，5-40mg/dl人白蛋白(人血清白蛋白)的物质组成。

6、进一步的，所述的稳定物质为蔗糖、甘氨酸、pvp30(聚乙烯吡咯烷酮k30)、hsa(人血清白蛋白)中的一种或多种。

7、更进一步的，所述的稳定物质为蔗糖和甘氨酸两种；优选的，为5g/l蔗糖和100mmol/l甘氨酸两种。

8、进一步的，所述的冻干添加物质为甘露醇、海藻糖、叔丁醇、吐温80中的一种或多种。

9、更进一步的，所述的冻干添加物质为甘露醇和吐温80两种；优选的，为5g/l甘露醇和1ml/l吐温80两种。

10、进一步的，所述的防腐剂为pc300和叠氮钠，优选的，为1ml/l pc300和0.1g/l叠氮钠。

11、进一步的，所述的质控品的ph值为5.5-8.0。

12、本技术还提供了尿液生化分析用多项复合质控品的制备方法，制备步骤包括：

13、(1)配制人尿液基质液：取0℃以下过夜的人尿液基质液，离心提取上清液，然后过0.22μm孔径滤纸低速抽滤获得；

14、(2)配制hepes缓冲液：称量hepes于纯化水中，用naoh调ph，加纯化水补足到1l，2-8℃保存备用；

15、(3)将人尿液基质液与hepes缓冲液按照1:1体积比例混合搅拌均匀，然后依次加入尿酸，氯化钾，氯化钠，磷酸，氯化钙，α-淀粉酶，肌酐，尿素，葡萄糖，稳定物质，β2-微球蛋白，α-微球蛋白，免疫球蛋白igg，白蛋白抗原，尿转铁蛋白，醋酸镁，n-乙酰-β-d-氨基葡萄糖苷酶，视黄醇结合蛋白，中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、人血清白蛋白，冻干添加物质(吐温80，甘露醇)，防腐剂(pc300，叠氮钠),混合均匀后得到尿液生化分析用多项复合质控品基础液；

16、(4)将上述配制好的多项复合质控品基础液用连续分液枪分装到冷冻瓶中，使用冷冻干燥机进行冷冻干燥，完成后得到尿液生化分析用多项复合质控品成品。

17、进一步的，所述的步骤(1)配制人尿液基质液，具体为：取一升-8℃冰箱中过夜后的人尿液基质液，3500转/分钟离心15分钟，提取上清液，0.22μm孔径滤纸低速抽滤，即得。

18、进一步的，所述的步骤(2)配制hepes缓冲液，具体为：称量hepes 23.83g于980ml纯化水中，用naoh调ph，加纯化水补足到1l，2-8℃保存备用。

19、进一步的，所述的步骤(3)中的稳定物质为蔗糖和甘氨酸，所述的蔗糖在葡萄糖添加之后添加，所述的甘氨酸在醋酸镁添加之后添加。

20、进一步的，所述的步骤(3)中的冻干添加物质为吐温80和甘露醇，所述的吐温80和甘露醇在人血清白蛋白添加之后顺次添加。

21、更进一步的，所述的步骤(3)的操作过程具体为：将人尿液基质液与hepes缓冲液按照1:1比例混合搅拌均匀，依次加入尿酸，氯化钾，氯化钠，磷酸，氯化钙，α-淀粉酶，肌酐，尿素，葡萄糖，蔗糖，β2-微球蛋白，α-微球蛋白，免疫球蛋白igg，白蛋白抗原，尿转铁蛋白，醋酸镁，甘氨酸，n-乙酰-β-d-氨基葡萄糖苷酶，视黄醇结合蛋白，中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、人血清白蛋白，吐温80，甘露醇，pc300，叠氮钠混合均匀后得到尿液生化分析用多项复合质控品基础液。

22、本技术的优点和技术效果：

23、1.本技术首次将尿液离子类检测项目与尿液酶类检测项目以及尿液特定蛋白类项目的质控物质汇合在一起，从而获得一种稳定性好、涵盖项目多的质控品。

24、2.本技术的质控品，在配制中使用人尿液基质加入缓冲液的方法可以有效地提高质控品复融和稳定性；磷酸，氯化钙能够更好的促进α-淀粉酶的溶解；葡萄糖，蔗糖，可以有效地减少蛋白的失活；醋酸镁，甘氨酸能够有效增加n-乙酰-β-d-氨基葡萄糖苷酶的稳定性；甘露醇等可以有效调高冻干过程中塌陷温度，利于冻干品的稳定性；吐温80等的加入可以利于质控品冻干复融后活性的提高；加入pc300搭配叠氮钠可以使得质控物复融后抗菌能力大大增加，也有助于复融稳定性。因此，本技术这种特定组成的质控品，是通过不断地调整试剂添加物质以及物质加样顺序，使得质控物质很好的溶解在一起并达到稳定的目的，通过添加冻干保护剂，使得质控物质冻干得率有效增加；得到的质控品冻干品稳定性良好。添加抗菌物质有助于质控品复融稳定性。便于检测机构的日常使用。

25、3.本技术的质控品为冻干型尿液生化多项符合质控品，这种质控品更加稳定，涵盖检测项目更广，便于检测机构日常质量监测使用。

26、4.由于酶类以及蛋白很容易受到离子强度的影响而导致稳定性下降，而本技术通过添加一些稳定物质以及调整物质的加入顺序和各种物质的浓度范围，使离子类物质做到不影响酶类以及蛋白的稳定，真正实现了离子类，酶类，蛋白类质控物质的稳定共存，将很多不易溶解的离子类物质与酶类质控物质以及蛋白类质控物质很好的溶解在溶液中；此外本技术加入特定的抗菌类物质，进一步增加了复合质控在复融后的稳定性。