一种面膜化妆品中测定甘草、人参和黄芩中6种功效成分的方法与流程

本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种面膜化妆品中测定甘草、人参和黄芩中6种功效成分的方法。

背景技术：

1、随着科学技术的发展和人们生活水平的提高，天然绿色、健康安全的化妆品愈发受消费者的青睐，同时国家鼓励和支持运用现代科学技术，结合我国传统优势项目和特色植物资源研究开发化妆品，因此打造源于自然、温和安全性高等特点的植物源化妆品已成为化妆品行业发展的新趋势。据统计，甘草、人参、黄芩是目前使用较广泛的根茎类植物化妆品原料。甘草为中药中的“国老”，具有清热解毒、补脾益气，调和诸药的功效，同时有“美白皇后”之称，其有效成分甘草苷能抑制酪氨酸酶活性，减少黑色素生成，具有预防色斑和美白皮肤的作用；甘草酸具有抗炎、抗氧化、抑菌作用，能有效清除超氧离子和羟基自由基、抑制脂质体过氧化物。人参具有补脾和胃、缓急止痛、解毒等功效，其有效成分人参皂苷rb1、rg1能抑制b16黑色素细胞的增殖，减少人黑素细胞株mv3黑素生成；人参皂苷re能抑制黑色素合成。黄芩具有清热燥湿、泻火解毒的功效，其有效成分黄芩苷能抑制细菌和皮肤黑色素的产生。

2、目前各国都将化妆品的质量控制重点放在了禁、限用成分的风险检测上，功效成分的研究报道相对较少且大多是一种或两种植物源功效成分的测定，张伟清等(超高效液相色谱-串联质谱法(uplc/ms-ms)测定人参化妆品中人参功效成分，日用化学工业,2021,51(6):577-582)采用超高效液相色谱-串联质谱法(uplc/ms-ms)仅对人参化妆品中人参皂苷rg1和人参皂苷re2个组分测定；董亚蕾等(uhplc-ms/ms法测定甘草类化妆品中光甘草定的研究，日用化学工业,2021,51(2):161-165)采用超高效液相色谱-串联质谱法仅对甘草类化妆品中的光甘草定检测；席绍峰等(spe-uplc-q-tofms测定育发化妆品中人参和甘草类功效成分，质谱学报,2015,36(4):341-349)采用超高效液相色谱-串联质谱法(uplc-q-tofms)测定育发化妆品中人参和甘草类中人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rb1、甘草次酸和光甘草定5种功效成分，此方法的检出限较高，且因甘草次酸和光甘草定在甘草提取物中的含量并不是很高，导致并未在育发类化妆品中检出甘草的功效成分。

3、2021年实施的《化妆品监管条例》中明确规定化妆品需进行全成份标识，但是监管的《化妆品安全技术规范》(2015版)中对功效成分的质量控制却是空白，目前尚无法定检验方法以及其他文献方法均无同时测定面膜化妆品中甘草、人参、黄芩的功效成分中的6个活性成分的含量。目前亟需建立化妆品中甘草、人参、黄芩的功效成分的检测方法，为植物源化妆品的科学监管，打击虚假宣传提供技术支撑。

4、本发明以面膜化妆品中甘草、人参、黄芩为研究对象，选取3种人参功效成分(人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rb1)、2种甘草功效成分(甘草酸、甘草苷)和1种黄芩功效成分(黄芩苷)为检测对象，利用uhplc-ms/ms技术，通过优化提取方法，色谱条件及质谱参数，建立面膜化妆品中上述6种化合物的mrm定性定量方法，以弥补植物源化妆品中相关检测方法及标准的缺失与不足。同时通过对市售面膜样品的测定，摸底宣称含有上述植物面膜化妆品中甘草苷、甘草酸、人参皂苷rg1、re、rb1、黄芩苷的含量，为植物源化妆品安全监管提出合理的建议。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是：提供一种面膜化妆品中测定甘草、人参和黄芩中6种功效成分的方法。

2、本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

3、一种面膜化妆品中测定甘草、人参和黄芩中6种功效成分的方法，包括如下步骤：

4、(1)对照品溶液制备；

5、(2)供试品溶液制备；

6、(3)按外标法以定量离子峰面积计算样品中人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rb1、甘草酸、甘草苷和黄芩苷的含量；

7、所述方法使用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪检测；

8、色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒径1.7或1.8μm；

9、柱温：35±5℃；流速：0.3±0.1ml/min；进样量：1～5μl；

10、流动相a：0.1％甲酸水溶液；

11、流动相b：乙腈；流动相a和流动相b以不同的体积比进行梯度洗脱；

12、所述的功效成分结构式如下：

13、

14、进一步的，所述色谱柱为acquity uplc beh c18 2.1mm×100mm，1.7μm或watersacquity uplc hss t3 2.1mm×100mm，1.8μm。

15、进一步的，所述质谱条件为：离子源：电喷雾离子源(esi)，负离子监测模式；电喷雾电压：4 500±500v(-)；离子源温度：500±50℃；气帘气：35±10psi；雾化气压力：50±10psi；辅助气压力：55±10psi；扫描模式：多反应离子监测(mrm)，检测定性及定量离子。

16、进一步的，所述步骤(1)具体为分别取甘草苷、人参皂苷re、人参皂苷rg1、黄芩苷、人参皂苷rb1、甘草酸对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成人参皂苷re、人参皂苷rg1、人参皂苷rb1、甘草酸浓度为甘草苷、黄芩苷的2～5倍混合对照品溶液。

17、进一步的，所述混合对照品溶液为甘草苷、黄芩苷10mg/l，人参皂苷re、人参皂苷rg1、人参皂苷rb1、甘草酸20mg/l的混合对照品溶液。

18、进一步的，步骤(2)操作为精密称取样品，置于离心管中，加入0.1％甲酸甲醇溶液，涡旋使样品分散均匀，再加入0.1％甲酸甲醇溶液定容，超声提取，离心，取上清液过有机滤膜，滤液作为待测样液备用。

19、进一步的，步骤(2)具体操作为精密称取样品0.3～1g，置于15ml离心管中，加入6～9ml0.1％甲酸甲醇溶液，涡旋30～60s使样品分散均匀，再加入0.1％甲酸甲醇溶液定容至10ml，超声提取30±15min，3800rpm离心5～15min，取上清液过0.22μm有机滤膜，滤液作为待测样液备用；若部分样品待测液中甘草酸含量超出标准曲线上限，需采用0.1％甲酸甲醇溶液稀释至标准曲线范围之内再进样测定。

20、进一步的，所述梯度洗脱程序为：0～1min，95％～75％ a，5％～25％ b；1～4min，75％～65％a，25％～35％ b；4～5min，65％～45％ a，35％～55％ b；5～6min，45％ a，55％ b；6～7min，45％～10％ a，55％～90％ b；7～9min，10％ a，90％ b；9.1～10min，95％ a，5％ b。

21、根据化妆品标签标识提示，人参类化妆品大多添加的是人参根提取物，甘草类化妆品主要添加的是甘草提取物、光果甘草提取物、甘草酸铵和甘草酸二钾，黄芩类化妆品主要添加的是黄芩根提取物。参照《中国药典》(2020年版)及文献资料，确定将具有代表性的人参皂苷rg1、rb1、re作为人参类功效成分测定指标；甘草酸和甘草苷作为甘草类成分的检测指标；黄芩苷作为黄芩类功效成分的检测指标。对于检测结果，参照化妆品标签标识，由于化妆品中植物提取物添加量比较小，因此认为检出其中一种或一种以上标识成分就可初步判定产品中添加了其对应的功效成分提取物。目前化妆品用植物提取物原料没有相应的标准，因此，此方法也适用于对甘草、人参、黄芩类化妆品原料的检测。

22、本发明中化合物的中文命名与结构式有冲突的，以结构式为准；结构式有明显错误的除外。

23、本发明的有益效果在于：本发明首次建立了超高效液相色谱-串联质谱法同时检测面膜化妆品中甘草、人参、黄芩类6种功效成分的检测方法，弥补了植物源化妆品中相关检测方法及标准的缺失与不足。该方法优化了液相色谱、质谱参数及样品前处理方法，10分钟内即完成了对目标化合物的分析检测，在特定的质量浓度范围内线性良好、回收率好、灵敏度高，可操作性强，适用于面膜化妆品中甘草、人参、黄芩功效成分的测定，由于目前化妆品用植物提取物原料没有相应的标准，因此，此方法也适用于对甘草、人参、黄芩类化妆品原料的检测。