一种左氧氟沙星制剂中相关物质的检测方法与流程

本技术涉及分析化学的，具体涉及一种左氧氟沙星制剂中相关物质的检测方法。

背景技术：

1、左氧氟沙星属第三代喹诺酮类抗菌药，其抗菌活性约为氧氟沙星的2倍，主要作用机制为抑制细菌dna旋转酶活性，从而抑制细菌dna的复制。左氧氟沙星具有抗菌效力强、安全性高、耐药性低等特点，对多数肠杆菌科细菌，如肺炎克雷白杆菌、变形杆菌属、伤寒沙门菌属、志贺菌属、部分大肠杆菌等有较强的抗菌活性，对部分葡萄球菌、肺炎链球菌、流感杆菌、铜绿假单胞菌、淋球菌、衣原体等也有良好的抗菌作用。

2、由于左氧氟沙星的组成复杂，左氧氟沙星原料中的相关杂质会对左氧氟沙星制剂的安全性和有效性造成不利影响。根据左氧氟沙星原料药各药典标准中杂质列表以及左氧氟沙星原料药的合成工艺路线分析可知，目前左氧氟沙星原料药的相关杂质共有14个(起始物料sm2、杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质g、杂质h、杂质i、杂质j、杂质k、杂质l、右氧氟沙星)。由于起始物料sm2、杂质c、杂质d、杂质h、杂质i、杂质k、杂质l均为原料药的工艺杂质，其在成品原料药中基本不存在，因此上述物质在左氧氟沙星制剂相关杂质的研究中不做考察，故左氧氟沙星制剂的相关物质的研究主要对象为杂质a、杂质b、杂质e、杂质f、杂质g和杂质j。

3、目前，随着左氧氟沙星制剂的相关物质的增多，现有标准中对左氧氟沙星制剂中相关物质的检测方法已经难以达到分离度要求，例如基线分离困难、各峰之间的分离度差、部分杂质未洗脱出来等。因此，为保证左氧氟沙星制剂的使用安全性与有效性，急需提供一种专属性强、灵敏度高、分离度好的左氧氟沙星制剂中相关杂质的检测方法显得至关重要。

技术实现思路

1、为了快速、准确检测左氧氟沙星制剂中的相关杂质(杂质a、杂质b、杂质e、杂质f、杂质g和杂质j)，本技术提供一种左氧氟沙星制剂中相关物质的检测方法。

2、本技术提供的左氧氟沙星制剂中相关物质的检测方法，采用如下的技术方案：

3、一种左氧氟沙星制剂中相关物质的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：配制样品溶液、将所述样品溶液注入液相色谱仪中，采用十八烷基硅烷键合硅胶填料的色谱柱及流动相梯度洗脱方法进行分离检测；所述分离检测过程中，柱温为58-62℃；

4、所述流动相梯度洗脱方法为：0-10min，流动相a为92％，流动相b为8％；10-35min，流动相a由92％线性减少至80％，流动相b由8％线性增加至20％；35-40min，流动相a由80％线性减少至50％，流动相b由20％线性增加至50％；40-50min，流动相a由50％线性增加至92％，流动相b由50％线性减少至8％；50-55min，流动相a为92％，流动相b为8％。

5、本技术中，为了实现左氧氟沙星制剂中杂质a、杂质b、杂质e、杂质f、杂质g和杂质j的同时检测，基于中国药典(chp2020)有关物质方法进行改进，并通过大量实验探究，重新确定了左氧氟沙星制剂中相关物质检测方法中的相关检测条件。因此，本技术提供的检测方法通过采用特定的流动相梯度洗脱方法，并将分离检测过程的柱温控制58-62℃，能够快速、准确地同时检测左氧氟沙星制剂中的杂质a、杂质b、杂质e、杂质f、杂质g和杂质j，并且检测的专属性强、灵敏度高、分离度好；将上述检测方法用于左氧氟沙星制剂生产中，能够实现制剂质量的有效把控。

6、本技术中，左氧氟沙星制剂的相关物质的研究主要对象为杂质a、杂质b、杂质e、杂质f、杂质g和杂质j。其中，杂质a虽为工艺杂质，但在成品原料药中有检出，故各标准中均将杂质a列为特定杂质；杂质b、杂质e、杂质f、杂质g、杂质j均属于光降解杂质；并且杂质b、杂质e、杂质f、杂质g均为各国药典中研究的杂质。

7、在一些实施方案中，所述柱温为58-60℃或60-62℃。

8、在一个具体的实施方案中，所述柱温为58℃、60℃或62℃。

9、优选地，所述分离检测过程中，检测波长为230-300nm。

10、在一些实施方案中，所述检测波长可以为236-240nm、254-258nm或292-296nm。

11、在一个具体的实施方案中，所述检测波长可以为238nm、256nm或294nm。

12、优选地，所述分离检测过程中，流动相流速为0.8-1.2ml/min。

13、在一个具体的实施方案中，所述流动相流速为1ml/min。

14、优选地，所述分离检测过程中，进样量为10-15μl。

15、在一个具体的实施方案中，所述进样量为10μl。

16、优选地，所述流动相a为醋酸铵高氯酸钠溶液，流动相b为乙腈。

17、在一个具体的实施方式中，所述醋酸铵高氯酸钠溶液的制备方法为：取醋酸铵4.0g和高氯酸钠7.0g，加水1300ml使溶解，并用磷酸调节ph值至2.0-2.4。

18、优选地，所述醋酸铵高氯酸钠溶液的ph为2.0-2.4。

19、在一些实施方案中，所述醋酸铵高氯酸钠溶液的ph为2.0-2.2或2.2-2.4。

20、在一个具体的实施方案中，所述醋酸铵高氯酸钠溶液的ph为2.2。

21、优选地，所述相关物质选自杂质a、杂质b、杂质e、杂质f、杂质g和杂质j。

22、本技术提供的左氧氟沙星制剂中相关物质的检测方法能够检测杂质a、杂质b、杂质e、杂质f、杂质g和杂质j中的一种或多种，并且检测方法的专属性好、灵敏度高、检测谱图中各物质之间的分离度好。

23、通过利用本技术提供的方法对检测杂质a、杂质b、杂质e、杂质f、杂质g、杂质j和左氧氟沙星，获得的各物质的定量限与检测限如下：

24、杂质a在294nm下的定量限为0.066μg/ml，检测限为0.020μg/ml；

25、杂质a在238nm下的定量限为0.028μg/ml，检测限为0.008μg/ml；

26、杂质b在294nm下的定量限为0.073μg/ml，检测限为0.022μg/ml；

27、杂质e在294nm下的定量限为0.050μg/ml，检测限为0.015μg/ml；

28、杂质f在294nm下的定量限为0.046μg/ml，检测限为0.014μg/ml；

29、杂质g在294nm下的定量限为0.040μg/ml，检测限为0.012μg/ml；

30、杂质j在294nm下的定量限为0.270μg/ml，检测限为0.081μg/ml；

31、杂质j在256nm下的定量限为0.173μg/ml，检测限为0.052μg/ml；

32、左氧氟沙星在294nm下的定量限为0.041μg/ml，检测限为0.012μg/ml。

33、优选地，所述十八烷基硅烷键合硅胶填料的色谱柱为thermo hypersil gold c18色谱柱，规格为4.6mm×250mm，5μm。

34、综上所述，本技术具有以下有益效果：

35、1.本技术提供了一种左氧氟沙星制剂中相关物质的检测方法，该检测方法将柱温控制在58-62℃之间，并调整流动相梯度洗脱方法至特定条件，能够快速、准确地同时检测左氧氟沙星制剂中的杂质a、杂质b、杂质e、杂质f、杂质g和杂质j，并且检测的专属性强、灵敏度高、分离度好。

36、2.本技术提供的左氧氟沙星制剂中相关物质的检测方法获得的检测谱图的各峰的对称性好、峰高适宜、出峰位置居中、各物质的出峰位置相差较远，分离效果明显。

37、3.本技术提供的左氧氟沙星制剂中相关物质的检测方法解决了相关技术中存在的基线分离困难、各峰之间的分离度差、部分杂质未洗脱出来等问题，利用上述检测方法检测左氧氟沙星制剂中的相关物质，能够实现左氧氟沙星制剂质量的有效把控。