一种去氧肾上腺素酮咯酸溶液中有关物质的检测方法及其应用与流程

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种去氧肾上腺素酮咯酸溶液中有关物质的检测方法及其应用，尤其涉及一种分离度好的去氧肾上腺素酮咯酸溶液中有关物质的检测方法及其应用。

背景技术：

1、盐酸去氧肾上腺素，简称pe，是一种α肾上腺素受体激动药，用于防治脊椎麻醉、全身麻醉、应用氯丙嗪等原因引起的低血压，也用于室上性心动过速和散瞳检查等。

2、酮咯酸氨丁三醇，简称ke，是一种非甾体抗炎剂，能抑制前列腺素生物合成，生物活性与其s-型有关。动物研究显示酮咯酸氨丁三醇有镇痛作用，无镇静或抗焦虑作用。

3、将盐酸去氧肾上腺素和酮咯酸氨丁三醇制成复方药物得到的去氧肾上腺素酮咯酸溶液是一种复方眼用制剂，由去氧肾上腺素和酮咯酸组成，前者是一种α1-肾上腺素受体激动剂，在眼内通过收缩虹膜放射肌作为瞳孔放大剂；后者是一种非甾体类抗炎药，抑制环氧化酶(cox-1和cox-2)，导致组织中前列腺素浓度降低以减少手术疼痛。同时，酮咯酸可通过抑制继发于眼部手术损伤或虹膜的直接机械刺激的前列腺素合成，防止手术导致的瞳孔缩小。

4、在药物生产过程中，需要检测药物中盐酸去氧肾上腺素的有关物质，以及酮咯酸氨丁三醇的有关物质，以保证临床用药的安全性和有效性。对于去氧肾上腺素酮咯酸溶液，则需要同时测定这两种活性成分的有关物质的有效方法。

5、复方制剂的有关物质来源较为复杂，研究发现，去氧肾上腺素酮咯酸溶液中有十余种杂质，盐酸去氧肾上腺素有关物质4种，酮咯酸氨丁三醇有关物质10种。而现有的方法中只侧重其中一类有关物质的检测，例如欧洲药典ep10.0收录的盐酸去氧肾上腺素检测方法和酮咯酸氨丁三醇检测方法，这两种方法分别检测了盐酸去氧肾上腺素和酮咯酸氨丁三醇中的有关物质，但对于另外的成分的有关物质完全没有涉及。而出于对复方制剂安全性的考虑和检测的便利，如何提供一种能够同时检测去氧肾上腺素酮咯酸溶液中盐酸去氧肾上腺素和酮咯酸氨丁三醇的有关物质的方法，成为了亟待解决的问题。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种去氧肾上腺素酮咯酸溶液中有关物质的检测方法及其应用，尤其提供一种分离度好的去氧肾上腺素酮咯酸溶液中有关物质的检测方法及其应用。本发明提供的检测方法能够对去氧肾上腺素酮咯酸溶液中盐酸去氧肾上腺素和酮咯酸氨丁三醇的有关物质进行同时检测，分离度高，检测效果好。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、一方面，本发明提供了一种去氧肾上腺素酮咯酸溶液中有关物质的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：

4、将待测样品、对照品溶液分别进样进行液相色谱检测，根据检测结果分析计算有关物质的含量。

5、所述有关物质包括去氧肾上腺素有关物质和酮咯酸有关物质。

6、所述去氧肾上腺素有关物质包括如下结构中任意一种或至少两种的组合：

7、。

8、所述酮咯酸有关物质包括如下结构中任意一种或至少两种的组合：

9、。

10、上述特定检测方法能够有效对去氧肾上腺素酮咯酸溶液中盐酸去氧肾上腺素和酮咯酸氨丁三醇的有关物质进行同时检测，分离度高，检测效果好。

11、优选地，所述液相色谱检测的流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为1-辛烷磺酸钠溶液与乙腈的混合溶液，其中1-辛烷磺酸钠溶液的浓度为0.8-2 mg/ml，1-辛烷磺酸钠溶液与乙腈的体积比为(75:25)-(85:15)。

12、其中，1-辛烷磺酸钠溶液的浓度可以是0.8 mg/ml、0.9 mg/ml、1 mg/ml、1.1 mg/ml、1.2 mg/ml、1.3 mg/ml、1.4 mg/ml、1.5 mg/ml、1.6 mg/ml、1.7 mg/ml、1.8 mg/ml、1.9mg/ml或2 mg/ml等，1-辛烷磺酸钠溶液与乙腈的体积比可以是75:25、77:23、80:20、83:17或85:15等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。

13、优选地，所述流动相b为1-辛烷磺酸钠溶液与乙腈的混合溶液，其中1-辛烷磺酸钠溶液的浓度为0.8-2 mg/ml，1-辛烷磺酸钠溶液与乙腈的体积比为(45:55)-(55:45)。

14、其中，1-辛烷磺酸钠溶液的浓度可以是0.8 mg/ml、0.9 mg/ml、1 mg/ml、1.1 mg/ml、1.2 mg/ml、1.3 mg/ml、1.4 mg/ml、1.5 mg/ml、1.6 mg/ml、1.7 mg/ml、1.8 mg/ml、1.9mg/ml或2 mg/ml等，1-辛烷磺酸钠溶液与乙腈的体积比可以是45:55、47:53、50:50、53:47或55:45等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。

15、上述特定的流动相通过先将不同溶剂溶液分别按比例配制混合好，再进行洗脱的方式，相比常规的直接采用两种不同流动相进行洗脱的方式能够有效提高检测的灵敏度，降低检出限。

16、优选地，所述液相色谱检测的流动相的流速为1.2-1.8 ml/min。

17、优选地，所述液相色谱检测的柱温为15-30℃。

18、优选地，所述液相色谱检测的检测波长为200-320 nm。

19、其中，流动相的流速可以是1.2 ml/min、1.3 ml/min、1.4 ml/min、1.5 ml/min、1.6 ml/min、1.7 ml/min或1.8 ml/min等，柱温可以是15℃、16℃、17℃、18℃、19℃、20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃等，检测波长可以是200 nm、210nm、220 nm、230 nm、240 nm、250 nm、260 nm、270 nm、280 nm、290 nm、300 nm、310 nm或320nm等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。

20、优选地，所述液相色谱检测的检测波长为250-290 nm。

21、优选地，所述液相色谱检测的检测波长为270 nm。

22、上述特定波长选择能够进一步提高检测的准确度。

23、优选地，所述液相色谱检测的色谱柱为c8色谱柱。

24、优选地，所述液相色谱检测的洗脱程序为梯度洗脱，所述梯度洗脱的具体流程如下：

25、第0-10 min，流动相a的体积分数为100%，流动相b的体积分数为0；

26、第10-20 min，流动相a的体积分数由100%匀速变为50%，流动相b的体积分数由0匀速变为50%；

27、第25-45 min，流动相a的体积分数为50%，流动相b的体积分数为50%；

28、第45-47 min，流动相a的体积分数由50%匀速变为100%，流动相b的体积分数由50%匀速变为0；

29、第47-60 min，流动相a的体积分数为100%，流动相b的体积分数为0。

30、上述特定洗脱程序能够有效将各个有关物质进行区分，有效提高了检测的分离度。

31、另一方面，本发明还提供了如上所述的检测方法在去氧肾上腺素酮咯酸溶液质量控制中的应用。

32、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

33、本发明提供了一种去氧肾上腺素酮咯酸溶液中有关物质的检测方法，其能够有效对去氧肾上腺素酮咯酸溶液中盐酸去氧肾上腺素和酮咯酸氨丁三醇的有关物质进行同时检测，分离度高，检测效果好；并同时通过先将不同溶剂溶液分别按比例配制混合好，再进行洗脱的方式，相比常规的直接采用两种不同流动相进行洗脱的方式能够有效提高检测的灵敏度，降低检出限；且通过选择特定波长范围和洗脱程序有效提高了检测的准确度和分离度。