藿朴夏苓汤指纹图谱的构建方法及其应用与流程

本发明涉及药物检测技术，尤其涉及一种藿朴夏苓汤指纹图谱的构建方法及其应用。

背景技术：

1、藿朴夏苓汤方源于《医原》，是治疗四季湿邪的通用方。江南地势低下，雨水较多，空气湿度大，人处其中，每易感受，又南方人喜食肥甘厚味，辛辣炙博，易引起脾胃功能失调而致湿浊内生，内患外感，内外相引，发为湿温。温湿病四季皆可发，以夏秋季较多见，冬春二季亦可发生，多为伏气。因湿邪具有季节性强、病程长、缠绵难愈的特点，临床上多见头昏、头重、身痛，面色淡黄、胸闷、腹胀腹泻、恶心纳差、乏力等症，正如《温病条辨》所云：“头痛恶寒，身重疼痛，胸闷不饥，午后身热，状若阴虚；病难速已，名曰湿温，汗之则神昏耳聋，甚则目瞑不欲言；下之则洞泄；润之则病深不解，长夏深秋冬日同法。”

2、由于国际社会对药品的要求是“安全、有效、可控”，为研究、开发藿朴夏苓汤，对其质量监控的研究就显得必不可少了。目前，特征图谱是国际公认的控制中药或天然药物质量的技术手段，也是当前中药界关注的热点问题。近年来，人们已经逐步认识到，只针对某一化学成分而形成的质量控制方法，已经不能恰当的反映产品的内在质量，中药特征图谱作为一种多指标的质量控制模式，能够更好的控制产品内在质量。因此，构建藿朴夏苓汤的指纹图谱对于控制藿朴夏苓汤的质量尤为重要。

技术实现思路

1、针对上述问题，本发明提供一种藿朴夏苓汤指纹图谱的构建方法及其应用。

2、为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：

3、一种藿朴夏苓汤指纹图谱的构建方法，所述构建方法包括以下步骤：

4、1)取藿朴夏苓汤制备供试品溶液；

5、2)分别取供试品溶液利用超高效液相色谱串联质谱进行检测，得所述藿朴夏苓汤指纹图谱；

6、所述超高效液相色谱检测的流动相a是浓度为0.08～0.12wt％的甲酸乙腈、流动相b是浓度为0.08～0.12wt％的甲酸水溶液；

7、所述超高效液相色谱检测的洗脱方式为梯度洗脱；

8、所述梯度洗脱的洗脱条件为：

9、0～0.50min，2％流动相a，98％流动相b；

10、0.50～4.00min，2％→10％流动相a，98％→90％流动相b；

11、4.00～11.00min，10％→20％流动相a，90％→80％流动相b；

12、11.00～18.00min，20％→80％流动相a，80％→20％流动相b；

13、18.00～20.00min，80％流动相a，20％流动相b；

14、20.00～21.00min，80％→2％流动相a，20％→98％流动相b。

15、进一步的，所述质谱检测分别在正离子模式、负离子模式进行检测。

16、进一步的，所述质谱检测的条件为：干燥气温度为345～355℃、干燥气流速为8～12l/min、雾化气压力为34～36psi、鞘气温度为345～355℃、鞘气流速为11～13l/min、正离子模式的毛细管电压为3900～4100v、负离子模式的毛细管电压为3400～3600v。

17、进一步的，所述质谱检测过程中，一级质谱选用ms模式、质量扫描范围100～1200m/z，二级质谱选用auto-msms模式。

18、进一步的，所述质谱检测采用四级杆-飞行时间串联质谱仪。

19、进一步的，所述超高效液相色谱的检测波长为208～212nm。

20、进一步的，所述超高效液相色谱检测的柱温为30～40℃、流速为0.3～0.5ml/min。

21、进一步的，所述供试品溶液是取藿朴夏苓汤加至75～85wt％甲醇水溶液中溶解，滤过，制得。

22、进一步的，步骤2)中，还需分别对处方单味饮片样品液或/和对照品溶液进行超高效液相色谱串联质谱检测；

23、所述处方单味饮片样品液是由藿朴夏苓汤中所用药材的各单味饮片分别加水煎煮后，滤过，干燥，再分别加入75～85wt％甲醇水溶液中溶解，滤过制得；

24、所述对照品溶液分别是利用和厚朴酚、厚朴酚或苦杏仁苷制得。

25、一种利用上述构建方法获得的藿朴夏苓汤的标准指纹图谱在藿朴夏苓汤的研究/开发/生产/临床应用全过程质量评价或控制中的应用。

26、本发明的藿朴夏苓汤指纹图谱的构建方法及其应用的有益效果为：

27、本发明采用超高效液相色谱串联质谱技术分析效率高、速度快，能够得到藿朴夏苓汤中准确的分子结构信息，可以获得各个化合物的一级和多级质谱信息，为鉴定藿朴夏苓汤这种复杂中药体系的多指标成分分析提供了良好的技术手段；

28、本发明采用uplc-q-tof-ms方法对藿朴夏苓汤基准物质的化学成分进行定性分析，为藿朴夏苓汤物的物质基础研究提供科学依据，同时阐明其主要化学组成；

29、本发明的构建方法，能够共同检出藿朴夏苓汤全方中几乎所有的药材成分；

30、本发明通过改变洗脱体系，利用藿朴夏苓汤中不同有效成分理化性质不同的特点，改变色谱条件，从而达到将藿朴夏苓汤中不同有效成分很好分离的目的；

31、本发明通过选择特定的色谱条件和质谱条件，能够获得出峰更好的藿朴夏苓汤的指纹图谱；

32、本发明的构建方法还具有良好的可行性、稳定性和重现性；

33、本发明的构建方法能够检测出并明确53个峰物质的药味来源归属及主要色谱峰的定性，除通草以外的10个药味能得到基准物质液质指纹图谱中的峰归属；其中，共鉴定了8个生物碱类化合物，均为厚朴中的成分，分别为甜菜碱、木兰剑毒碱、tembetarine、magnoflorine、magnaldehyde、oblogine、木兰花碱、asimilobine、罗默碱；共鉴定了10个黄酮类化合物，大部分为淡豆豉、土藿香中成分，分别为isorhamnetin、3,7-o-di-beta-d-glucopyranoside、大豆素、黄豆素、椴素、藿香苷、异藿香苷、刺槐黄素、金合欢素-7-o-(6"-o-丙二酰基)-葡萄糖苷、染料木素苷、金合欢素-7-o-(4"-乙酰基)-葡萄糖苷.；共鉴定了6个木脂素类化合物，为厚朴、泽泻的特征成分，分别为6'-o-methylhonokiol、obovatol、和厚朴酚、厚朴酚、magnolignan a、magnolignan c；共鉴定了3个氰苷素类化合物，为燀苦杏仁的特征成分，分别为d-苦杏仁苷、l-苦杏仁苷、野樱苷。

34、利用本发明所获得的藿朴夏苓汤标准指纹图谱中共有特征峰的有无及特征，可以全面监控藿朴夏苓汤原料药材、半成品和成品的质量，通过色谱指纹特征相似程度的比较，评价藿朴夏苓汤的优劣、考察稳定性和一致性，弥补了现行质量控制方法的不足，同时还可以监控藿朴夏苓汤生产工艺的稳定性，保证其质量的稳定、均一、可控；

35、本发明所获得的藿朴夏苓汤标准指纹图谱提高了藿朴夏苓汤成品、半成品的质量监控标准，有效防止了产品伪造事件的发生，保证了藿朴夏苓汤的正常生产、流通秩序；在本发明的基础上，还可以开展指纹图谱信息与药效活性信息的相关性研究，从而深入地阐明藿朴夏苓汤的内在化学成分与该制剂疗效的相关性。