一种用于D-二聚体磁微粒酶促化学发光试剂盒的血浆样本稀释液及其制备方法与流程

本技术涉及检测稀释液领域，更具体地说，它涉及一种用于d-二聚体磁微粒酶促化学发光试剂盒的血浆样本稀释液及其制备方法。

背景技术：

1、磁微粒化学发光免疫分析仪中，发光原理为形成“磁微粒-包被抗体—待测样本—抗体酶标记物”免疫复合物。引入磁场，经过磁吸附-洗涤-分离系列过程，洗去未结合的组分；再向免疫复合物中加入化学发光底物液，底物液被碱性磷酸酶催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，激发态中间体回到基态时释放出光子，利用发光仪检测到发光强度。

2、其中待测样本的吸样量的准确度对结果影响很大，全自动免疫分析仪因其操作简单，自动化程度高，检测速度快，重复性好，精密度高，可以在不需要分离的条件下，可以分别单独定量测定存在于血清或血浆样本中数十种具有临床意义的微量蛋白质。但是，临床检验中许多免疫学指标由于方法学的局限性和生物学差异性，需要进行一定比例稀释才能得到精确的检测结果。而且在实际实验中我们所需要的样本量很少，而机器的精密度不能到达。

3、因此，为了解决这一个问题，通常是将样本量增加后进行稀释，而稀释液的选用是否合适则会直接影响结果的准确性和可靠性。常见的是利用pbs、tris缓冲液、生理盐水、去离子水、等建立的稀释液体系，但这些在早期的报道中检测出来的值于实际值存在较大的误差。因此，还有待改善。

技术实现思路

1、为了提高检测结果的准确性，本技术提供一种用于d-二聚体磁微粒酶促化学发光试剂盒的血浆样本稀释液及其制备方法。

2、第一方面，本技术提供一种用于d-二聚体磁微粒酶促化学发光试剂盒的血浆样本稀释液，采用如下的技术方案：

3、一种用于d-二聚体磁微粒酶促化学发光试剂盒的血浆样本稀释液，包括以下组分：

4、4-8g/l三羟基氨基甲烷（tris）；

5、3-6g/l氨基磺酸；

6、5-10g/l无机盐；

7、10-20g/l牛血清白蛋白；

8、50-75g/l抗原稳定剂；

9、0-0.50ml/l防腐剂；

10、35-70ml/l表面非离子活性剂；

11、水；

12、血浆样本稀释液的ph为7.0-7.8。

13、三羟基氨基甲烷可以为4g/l、5g/l、6g/l、7g/l、8g/l。

14、氨基磺酸可以为3g/l、4g/l、5g/l、6g/l。

15、牛血清白蛋白可以为10g/l、11g/l、12g/l、13g/l、14g/l、15g/l、16g/l、17g/l、18g/l、19g/l、20g/l。

16、表面非离子活性剂可以为40ml/l、45ml/l、50ml/l、55ml/l、60ml/l、65ml/l。

17、无机盐可以为nacl、kcl、cacl2、mgcl2、zncl2、fecl2、fecl3、cucl2、agcl、bacl2、nh4cl、alcl3中的一种。

18、通过采用上述技术方案，在三羟基氨基甲烷与氨基磺酸的共同配合下，可以长效稳定维持ph7.0-7.8的一个缓冲环境，在该环境下，有利于使d-dimer待测物保持天然的状态，不凝集或裂解成片段。

19、并且，该配方中含有牛血清白蛋白，三羟基氨基甲烷与氨基磺酸的配合同时也使牛血清白蛋白可以维持强劲的生物活性状态。进一步促进牛血清白蛋白作为d-dimer维持正常形态的保护蛋白，进一步提高后续的检测d-dimer的结果准确性和可靠性。

20、本技术技术方案提供了一种新的缓冲体系。本技术方案作为血浆样本稀释液，为d-dimer待测物提供了一个蛋白电荷、渗透压等环境条件都更适宜的保存条件，有利于维持d-dimer待测物的形态及稳定性。同时，血浆样品稀释液为待检样本提供了较佳的抗原抗体反应所需胶体渗透压环境(250~380m0sm/kg)，从而更好地提高了稀释后样本检测准确度和精密度。

21、优选的，所述三羟基氨基甲烷与氨基磺酸的质量比为1：（0.7-1.0）。

22、通过采用上述技术方案，进一步限定三羟基氨基甲烷与氨基磺酸之间的比例关系，有利于加强两者之间的配合关系，进一步加强对牛血清白蛋白、d-dimer待测物形态的维持。

23、优选的，所述表面非离子活性剂为吐温-20、吐温-60、吐温-80中的一种或多种混合。

24、通过采用上述技术方案，选用合适的表面非离子活性剂有利于降低抗体与抗原的非特异性结合。

25、优选的，所述表面非离子活性剂为吐温-20。

26、尤其是进一步限定表面非离子活性剂为吐温-20时，吐温-20在三羟基氨基甲烷与氨基磺酸营造的缓冲体系中，可以进一步提高与牛血清白蛋白之间的配合效果，有效降低非特异性结合之间蛋白的结合牢固程度，从而降低抗体与抗原的非特异性结合，使检测数据更加准确。

27、优选的，所述血浆样本稀释液还包括2-5g/l的琥珀酸酯磺酸盐。

28、优选的，所述表面非离子活性剂与琥珀酸酯磺酸盐的比例为（35-38）ml/l：（2-5）g/l。

29、发明人发现，在吐温-20与琥珀酸酯磺酸盐特定比例的配合下，既不破坏d-dimer待测物的结构，又可以提高对非特异性结合蛋白的清洗效果，使非特异性结合或结合不牢固的蛋白脱落，大幅度降低了对待测物检测的干扰，从而提高检测精确度。

30、并且两者的配合可以降低表面活性剂在血浆样本稀释液中的使用量，有利于降低成本。

31、优选的，所述抗原稳定剂为蔗糖、葡萄糖中的一种。

32、优选的，所述抗原稳定剂为蔗糖。

33、经过筛选和优化后，发明人发现选用蔗糖为抗原稳定剂时，整个体系的活性最为稳定，不容易受影响，有利于保护抗原避免失活。

34、第二方面，本技术提供一种用于d-二聚体磁微粒酶促化学发光试剂盒的血浆样本稀释液的制备方法，采用如下的技术方案：

35、一种用于d-二聚体磁微粒酶促化学发光试剂盒的血浆样本稀释液的制备方法，包括以下步骤：

36、将三羟基氨基甲烷、氨基磺酸、牛血清白蛋白、抗原稳定剂、防腐剂、表面非离子活性剂、无机盐加入到水中，混匀，得到血浆样本稀释液。

37、通过采用上述技术方案，将各种原料混合加水配置，均匀后便得到血浆样品稀释液，制备过程简单便捷，条件要求低，适合在本领域推广使用。

38、优选的，将所述三羟基氨基甲烷、氨基磺酸先溶于水中，混匀后，使其ph保持在6.8-7.3之间；然后再依次加入无机盐、牛血清白蛋白、抗原稳定剂、防腐剂和表面非离子活性剂混匀。

39、通过采用上述技术方案，提前将三羟基氨基甲烷、氨基磺酸预混，旨在建立基础缓冲体系。然后再依次加入各种原料来调整整个体系，使各种原料充分配合、发挥效果。

40、优选的，所述琥珀酸酯磺酸盐与表面非离子活性剂共同加入到水中混匀。

41、综上所述，本技术具有以下有益效果：

42、1、在三羟基氨基甲烷与氨基磺酸的共同配合下，可以长效稳定维持ph7.0-7.8的一个缓冲环境，在该环境下，有利于使d-dimer待测物保持天然的状态，不凝集或裂解成片段。

43、 2、本技术方案作为血浆样本稀释液，为d-dimer待测物提供了一个蛋白电荷、渗透压等环境条件都更适宜的保存条件，有利于维持d-dimer待测物的形态及稳定性。同时，血浆样品稀释液为待检样本提供了较佳的抗原抗体反应所需胶体渗透压环境(250~380m0sm/kg)，从而更好地提高了稀释后样本检测准确度和精密度。

44、 3、在吐温-20与琥珀酸酯磺酸盐在特定比例的配合下，既不破坏d-dimer待测物的结构，又可以提高对非特异性结合蛋白的清洗效果，大幅度降低了对待测物检测的干扰。并且可以促进吐温-20与牛血清白蛋白之间的配合效果。