一种基于双金属纳米簇自组装体复合物检测食品中多菌灵的方法

本发明属于光学传感器领域，具体涉及到一种基于双金属纳米簇自组装体复合物检测食品中多菌灵的方法。

背景技术：

1、多菌灵(cbz)，作为一种杀菌剂，可以有效地防治由真菌引起的作物、果蔬等的病害。且具有杀菌范围广、成本低廉、抑菌效果好等诸多优势,但其化学稳定性良好能够在土壤中长期存在。人或动物通过食品摄入残留的cbz，可产生多种健康风险。因此，开发快速、便携的多菌灵残留的传感方法具有重要的意义。

2、目前，针对食品中的多菌灵残留，已经建立了许多检测方法。例如，高效液相色谱(hplc)、表面增强拉曼散射、毛细管电泳、电化学方法、免疫分析法等，但这些方法大多存在仪器昂贵、样品处理耗时、生物试剂难以制备、或对操作人员要求高等缺陷。

3、基于荧光共振能量转移(fret)的传感方法具有灵敏度高、抗干扰能力强、可视化等优点，因此基于金属纳米簇结合fret的传感方法获得许多研究者的关注。基于超分子识别和客体竞争原理的指示取代分析，研究者们开发了许多对农药的荧光检测方法，但其单一的信号输出模式容易受到干扰。

技术实现思路

1、本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本技术的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

2、鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本发明。

3、因此，本发明的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种基于双金属纳米簇自组装体复合物检测食品中多菌灵的方法。

4、为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种基于双金属纳米簇自组装体复合物检测食品中多菌灵的方法，包括，

5、制备att-auncs纳米簇溶液；

6、制备arg-auncs纳米簇溶液；

7、制备auagncs纳米簇：将arg-agncs纳米簇溶液混合至att-auncs纳米簇溶液中，在30～37℃下反应12～24h后，将合成的auagncs用异丙醇沉淀，离心处理，离心产物重新分散在去离子水中，制得auagncs纳米簇溶液；

8、制备auagncs-cd纳米簇：取auagncs纳米簇溶液，加入cm-β-cd溶液，在40～50℃下孵育2～3h后，用超滤管过滤除去过量的反应物，获得auagncs-cd纳米簇溶液；

9、检测食品中多菌灵：将食品经过处理后，通过甲醇溶解，制得多菌灵溶液；

10、依次将罗丹明b溶液与多菌灵溶液加入到auagncs-cd纳米簇溶液中，同时在410nm激发下，记录溶液530nm及580nm双波长处的荧光发射光谱，根据荧光强度的比值，构建对多菌灵浓度标准曲线，实现测定食品中多菌灵含量。

11、作为本发明所述方法的一种优选方案，其中：所述制备att-auncs纳米簇溶液，包括，

12、以0.2mol/l的naoh溶液溶解6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶att，形成80mmol/l的att溶液，并与10mg/ml的haucl4溶液混合；

13、在避光条件下连续搅拌1～2h，将所得的att-auncs用异丙醇沉淀清洗两次，溶解在去离子水中形成储备溶液，在4℃下避光保存，即得att-auncs纳米簇；其中，

14、naoh溶液与haucl4溶液的比例为3ml：3ml；

15、连续搅拌的转速为800r/min，搅拌温度为25℃；

16、储备溶液的浓度为15mg/ml。

17、作为本发明所述方法的一种优选方案，其中：所述制备arg-auncs纳米簇溶液，包括，

18、将0.5m的arg溶液逐滴加入至agno3溶液中，用1m的naoh调节溶液ph＝10后，将其置于37℃下孵育6h；

19、通过超滤纯化以提取arg-agncs，在4℃下避光保存，即得arg-auncs纳米簇溶液；其中，

20、arg溶液与agno3溶液的比例为1ml：1ml，agno3溶液的浓度为10mmol/l。

21、作为本发明所述方法的一种优选方案，其中：所述制备auagncs纳米簇，其中，arg-agncs纳米簇溶液与att-auncs纳米簇溶液的比例为6ml：18ml，arg-agncs纳米簇溶液的ph为10，离心转速为10000rpm，离心时间为5min。

22、作为本发明所述方法的一种优选方案，其中：所述食品经过处理，包括，

23、将食品晾干后切块，用高速剪切机破碎；

24、取5g样品加入10ml二氯甲烷，超声处理5min，8000r/min离心除去不溶性沉淀；

25、在50℃下水浴10min，加入2ml甲醇并用超纯水稀释至20ml，将所得到的样品溶液；

26、其中，所述食品包括苹果。

27、作为本发明所述方法的一种优选方案，其中：所述根据荧光强度的比值，构建对多菌灵浓度标准曲线，包括，

28、根据溶液中不同波长处荧光强度的比值，分别以f580/f530对罗丹明b浓度、f530/f580对多菌灵浓度构建标准曲线，实现测定食品中多菌灵含量；其中，

29、f530和f580分别为cd-auagncs和罗丹明b特征发射峰处荧光强度的最高值。

30、作为本发明所述方法的一种优选方案，其中：还包括，

31、制备多菌灵测定的荧光侧流层析试纸rflfs，其中，所述荧光侧流层析试纸rflfs由样品垫、硝化纤维素膜nc膜、吸水垫和pvc板和t线；

32、通过荧光读数仪测定t线上的荧光值，以多菌灵浓度对荧光变化率f510/f610作图，构建了纸基上的多菌灵标准曲线，实现多菌灵的检测。

33、作为本发明所述方法的一种优选方案，其中：多菌灵检测的线性范围为0.2μmol/l～1.4μmol/l，采用3σ/s公式计算得到检测限为60nmol/l。

34、作为本发明所述方法的一种优选方案，其中：所述荧光侧流层析试纸rflfs的制备方法包括，

35、将样品垫用ph 7.4的0.01mol/l磷酸缓冲液浸泡30min，在37℃下干燥8h，其中，磷酸缓冲液中包括0.01mol/lna2hpo4、0.01mol/lnah2po4；

36、使用三维喷点仪将30μl的鱼精蛋白喷在nc膜上作为t线并干燥2h，t线和吸水垫之间的距离为24mm；然后，将30μl的cd-auagncs-rhb喷在同一位置并固定，37℃下干燥2h；

37、将所有组件粘贴在pvc板上，样品垫和吸水垫置于nc膜上分别与之重叠2mm；

38、将组装好的pvc板切成长为4mm、宽为1mm的条状，避光密封保存。

39、作为本发明所述方法的一种优选方案，其中：所述cd-auagncs的稀释倍数为200，鱼精蛋白浓度为1.25mg/ml。

40、本发明有益效果：

41、本发明以6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶(att)和精氨酸(arg)为模板，分别制备了金纳米簇和银纳米簇，通过一步法自组装纳米复合物，获得了荧光增强同时修饰了羧甲基-β-环糊精(cm-β-cd)的金银纳米簇(auagncs-cd)，该auagncs-cd与rhb间可发生fret，多菌灵通过主客体识别和与rhb的竞争，可完成指示取代分析，此时伴随着anti-fret效应的发生，基于上述作用，构建了多菌灵的比率荧光传感方法；同时，基于上述工作进一步开发了一种比率荧光侧流层析试纸(rflfs)，此rflfs试纸体现出高灵敏、快速、以及出色的选择性和抗干扰能力，因此具有很高的应用于多菌灵检测的潜力。