区分片姜黄及其近似品的色谱鉴别方法与流程

本发明属于中药鉴别领域，具体涉及一种区分片姜黄及其近似品的色谱鉴别方法。

背景技术：

1、片姜黄为姜科植物温郁金curcuma wenyujin y.h.chen et c.ling的干燥根茎，为冷背药，始载于《仁斋直指方论》。味辛、苦，性温，归脾、肝经。具有破血行气，通经止痛的功效。

2、现代研究表明，片姜黄中主要有挥发油、生物碱类、多糖类和无机元素等，其中主要药效成分为倍半萜类成分，是构成挥发油的主要成分。片姜黄在抗肿瘤、抗炎镇痛、抗血栓凝血、增强机体免疫等方面有显著作用，在临床上主要用于治疗妇科疾病、风湿痹症、风寒肩臂疼痛及腰部作痛等。

3、温郁金同一植株地下部分可产3种药材，且均被2020年《中国药典》收载，其加工、用途都不尽相同。块根煮熟晒干是著名药材“温郁金”，味微苦、辛，性微温，能疏肝解郁，行气祛瘀，利胆退黄；侧根茎鲜切厚片晒干称“片姜黄”，味辛、苦，性温，能破血行气，通经止痛；主根茎煮熟晒干称“温莪术”，味苦、辛，性温，能破血散气，消症积，止痛。

4、中国药典2020年版中，片姜黄项下仅收载了温郁金curcuma wenyujin y.h.chenet c.ling的干燥根茎一种为片姜黄的法定基原，姜黄项下仅收载了姜科植物姜黄curcumalonga l.的干燥根茎一种为姜黄的法定基原；莪术项下收载了蓬莪术curcumaphaeocaulis val.广西莪术curcuma kwangsiensis s.g.lee et c.f.liang或温郁金curcuma wenyujin y.h.chen et c.ling的干燥根茎三种为莪术的法定基原；郁金项下收载了温郁金curcuma xvenyujin y.h.chen et c.ling、姜黄curcuma longa l、广西莪术curcuma k-wangsiensis s.g.lee et c.f.liang或蓬莪术curcuma phaeocaulis vai.的干燥块根四种为郁金的法定基原。

5、中药主要来源于自然界的动植物，其中一些具有多种基原，这些中药往往存在基原混乱、真伪难辨等现象，由此导致质量很不稳定，极大的限制了其临床的应用效果。目前对于片姜黄及其近似品对比研究的方法较多，针对混淆品的研究主要集中在性状和色谱方面的研究。张新华等就姜黄与片姜黄的来源、性状、显微、理化等方面的鉴别、成分与功能主治等方面进行了比较(张新华,韩立杰.姜黄与片姜黄临床应用的甄别[j].光明中医,2011,26(9).)。李德勋就姜黄与片姜黄的薄层色谱鉴别进行了研究(李德勋,姜黄与片姜黄的薄层色谱鉴别[j].医药卫生科技,2001(03).)。方洪壮等对姜黄与片姜黄挥发油色谱指纹图谱进行了比较，结果表明：至少有10种化学成分在姜黄挥发油的色谱指纹图谱中存在而在片姜黄图谱中未被检出，至少有9种化学成分在片姜黄中存在而在姜黄中未见，姜黄与片姜黄挥发油指纹图谱中共有的化学成分有9种(方洪壮,任淑清.姜黄与片姜黄挥发油色谱指纹图谱的比较[j].中药材,2006,(11).)。上述研究中从药材的性状比较不适用于药材的标准汤剂和配方颗粒等，而采用气相色谱法建立的特征图谱主要分析的是挥发油中的倍半萜类成分，样品制备繁琐，且不适用于标准汤剂。

6、因此，有必要建立一种全面、准确、快速的片姜黄及其近似品的色谱鉴别方法，该方法能够区分鉴别片姜黄标准汤剂或配方颗粒等与其近似品制剂，对片姜黄与包括姜黄、不同基原的莪术、不同基原的郁金等在内的近似品的质量检测至关重要。

技术实现思路

1、发明要解决的问题

2、为了解决现有技术的上述问题，本发明的目的在于提供一种区分片姜黄样品及其近似品的色谱鉴别方法，该方法适用于片姜黄及其近似品的标准汤剂或配方颗粒，可以鉴别片姜黄与包括姜黄、莪术、郁金等在内的近似品，为片姜黄、姜黄、莪术和郁金等的标准汤剂等的内在质量控制提供了新的分析手段，以达到同时鉴别片姜黄及其近似品的基原、真伪的目的。

3、用于解决问题的方案

4、[1].本发明提供一种区分片姜黄样品及其近似品的色谱鉴别方法，其中，所述方法包括以下步骤：

5、(1)样品溶液制备：用提取溶剂分别对片姜黄样品、近似品样品进行提取，收集提取液，制备片姜黄样品溶液和近似品样品溶液；

6、所述片姜黄样品选自片姜黄标准汤剂或片姜黄配方颗粒；所述近似品样品选自近似品标准汤剂或近似品配方颗粒；所述近似品为姜黄、莪术、郁金中的一种或多种；

7、(2)对照品溶液制备：包括分别取姜黄素、莪术二醇、莪术奥酮二醇、莪术双环烯酮中的一种或多种对照品制备对照品溶液的步骤；

8、(3)特征图谱的建立：采用超高效液相色谱法对步骤(1)中所述片姜黄样品溶液、所述近似品样品溶液和步骤(2)中所述对照品溶液进行检测，相应获得检测图谱和对照图谱，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析建立片姜黄样品特征图谱和近似品样品特征图谱；

9、(4)鉴别标准的制定：将步骤(3)中所述片姜黄样品特征图谱、所述近似品样品特征图谱和所述对照图谱进行比对，制定鉴别标准；

10、(5)供试品的处理：取待测样品，按照步骤(1)中的方法得到供试品溶液，再按照步骤(3)中的方法，生成供试品特征图谱；

11、(6)供试品的鉴别：根据步骤(4)中制定的鉴别标准，将步骤(5)中生成的供试品特征图谱进行比对，确定供试品为片姜黄或所述近似品中的任意一种。

12、[2].根据[1]所述的色谱鉴别方法，其中，步骤(1)中，所述莪术的药材基原包括温郁金、广西莪术、蓬莪术中的一种或多种；所述郁金的药材基原包括温郁金、广西莪术中的一种或多种；

13、所述提取溶剂为甲醇、甲醇的水溶液，优选体积浓度为30％～70％的甲醇水溶液；所述提取的方式为超声处理、振摇提取或加热回流提取中的任一种；优选地，所述提取的方式为超声提取，功率为200w～300w，频率为35khz～45khz，提取的时间为5min～60min。

14、[3].根据[1]或[2]所述的色谱鉴别方法，其中，步骤(2)中所述制备对照品溶液包括用甲醇体积百分比不低于50％的甲醇水溶液或甲醇分别溶解对照品，制成浓度为10～40μg/ml的姜黄素对照品溶液、莪术二醇对照品溶液、莪术奥酮二醇对照品溶液、莪术双环烯酮对照品溶液中的一种或多种。

15、[4].根据[1]～[3]任一技术方案所述的色谱鉴别方法，其中，步骤(3)中所述超高效液相色谱法的色谱条件包括：

16、固定相：以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，

17、流动相：以乙腈为流动相a，以磷酸的水溶液为流动相b；优选地，以体积分数为0.05％～0.20％的磷酸溶液为流动相b；

18、还包括梯度洗脱程序，所述梯度洗脱程序为：

19、 时间/分钟) 流动相a/％ 流动相b/％ 0～4 20 80 4～8 20→30 80→70 8～12 30→32 70→68 12～20 32→43 68→57 20～25 43→75 57→25 25～30 75 25

20、；优选地还包括：柱温为20～30℃，和/或，流速为0.28～0.32ml/min，和/或，检测波长为220～270nm。

21、[5].根据[1]～[4]任一技术方案所述的色谱鉴别方法，其中，步骤(3)中所述片姜黄样品特征图谱包括9个特征峰，其中，峰1为莪术奥酮二醇峰，峰3为莪术二醇峰，峰9为莪术双环烯酮峰。

22、[6].根据[1]～[5]任一技术方案所述的色谱鉴别方法，其中，步骤(4)中所述鉴别标准的制定还包括：

23、分别从所述片姜黄样品特征图谱、所述近似品样品特征图谱中确定特征峰，采用液质联用技术对所述片姜黄样品特征图谱中的特征峰进行归属，并对区别成分进行指认，比较各特征图谱中所述特征峰的差异，将所述差异进行记录，得到鉴别标准。

24、[7].根据[6]所述的色谱鉴别方法，其中，所述差异包括：姜黄素峰可区分出姜黄，莪术奥酮二醇峰与莪术二醇峰的相对峰面积可区分莪术和片姜黄，莪术双环烯酮峰与莪术二醇峰的相对峰面积可区分郁金和片姜黄。

25、[8].根据[1]～[7]任一技术方案所述的色谱鉴别方法，其中，步骤(6)中所述将步骤(5)中生成的供试品特征图谱进行比对包括：

26、若供试品特征图谱在与姜黄素对照品相应的保留时间存在色谱峰，则供试品为姜黄；

27、若供试品特征图谱在与莪术奥酮二醇、莪术二醇、莪术双环烯酮对照品相应的保留时间存在色谱峰，且莪术奥酮二醇峰与莪术二醇峰的相对峰面积低于2.4，则供试品为莪术；

28、若供试品特征图谱在与莪术奥酮二醇、莪术二醇、莪术双环烯酮对照品相应的保留时间存在色谱峰，且莪术双环烯酮峰与莪术二醇峰相对峰面积高于6.2，则供试品为郁金；

29、若供试品特征图谱在与莪术奥酮二醇、莪术二醇、莪术双环烯酮对照品相应的保留时间存在色谱峰，且莪术奥酮二醇峰与莪术二醇峰的相对峰面积高于2.4；莪术双环烯酮峰与莪术二醇峰相对峰面积低于6.2，则供试品为片姜黄。

30、[9].根据[1]～[8]任一技术方案所述的方法在鉴别片姜黄、姜黄、莪术和/或郁金当中的两种或多种的应用。

31、[10].根据[1]～[8]任一技术方案所述的方法在片姜黄及其近似品的质量检测中的应用。

32、发明的效果

33、本发明通过液质联用技术，建立片姜黄及其不同基原近似品的特征图谱，提供了一种区分片姜黄及其近似品的色谱鉴别方法。采用超高效液相色谱法对色谱条件进行合理控制，确定了片姜黄样品的9个特征峰，构成了片姜黄药材及其制剂的特征图谱的全貌，同时也对片姜黄的近似品，姜黄、莪术和郁金等制剂进行对比研究，能够比较全面地反应片姜黄标准汤剂及其近似品(莪术、郁金、姜黄)的特征，并达到鉴别片姜黄与莪术、郁金、姜黄标准汤剂或配方颗粒的目的。

34、本发明对整个片姜黄药材的内在品质进行把控，比较全面地反映了片姜黄药材及其不同基原的近似品的特征，达到同时鉴别片姜黄及其近似品的目的，并且为片姜黄标准汤剂或配方颗粒等制剂的内在质量控制提供了新的分析手段。

35、本发明方法简单，准确可靠，便于操作，时间较短，溶剂消耗量少，对环境污染小。同时具有专属性强，稳定性高，重现性好等优点，尤其适合规模化生产的检测与监控。

36、需要说明的是，上述的记载并不是公开了本发明的全部实施方式和本发明的全部优点。