一种同时检测玛巴洛沙韦原料及其制剂中3个异构体杂质的方法及应用与流程

本发明属于药物分析检测。更具体地，涉及一种同时检测玛巴洛沙韦原料及其制剂中3个异构体杂质的方法及应用。

背景技术：

1、玛巴洛沙韦(baloxavir marboxil)，化学名为[[(r)-12-[(s)-7,8-二氟-6,11-二氢二苯并[b,e]-硫杂-11-基]-6,8-二氧-3,4,6,8,12,12a-六氢-1h-[1,4]嗪并[3,4-c]吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]氧基]甲基碳酸甲酯，是一种近20年来首创的具有全新作用机制的抗流感病毒新药，由日本盐野义(shionogi)制药株式会社和瑞士罗氏(roche)公司合作开发，于2018年2月在日本上市，同年10月在美国上市，用于单剂量治疗症状不超过48小时的急性、无高危因素的成人和12岁或以上的青少年甲型和乙型流感患者。玛巴洛沙韦酯为其前体药物，经肠道上皮、肝脏和血液中的酯酶水解，迅速转化为活性形式玛巴洛沙韦。

2、玛巴洛沙韦结构中含有2个手性中心，主要含有4个异构体，其中有药理作用的是(r，s)型玛巴洛沙韦，其他3个异构体均为杂质，玛巴洛沙韦原料生产过程可能引入这3个异构体杂质：

3、

4、

5、一般而言，含有手性中心的药物，不同构型间药效差异较大，且影响目标构型药物合成的收率等，目标产物的异构体杂质均需进行质量研究与控制。同时，中国药典杂质研究指导原则上也明确规定单一对映异构体药品中，可能共存的其他对映异构体和非对映异构体应作为杂质检查。在玛巴洛沙韦原料及制剂的生产、贮存等环节中均可能导致手性构型的转换，为确保玛巴洛沙韦的手性纯度及其制剂的质量和安全，需建立相应的异构体杂质控制方法。

6、在对玛巴洛沙韦进行检测时发现，玛巴洛沙韦异构体2杂质在常规反相hplc条件下常与玛巴洛沙韦共出峰，另外2个玛巴洛沙韦异构体2和3杂质亦共出峰，无法准确定量单个杂质的含量。

7、目前对于玛巴洛沙韦类手性药物分离以色谱法为主，如周立昕等人(周立昕,彭嘉娟,贾中天,朱雪焱,张鹏.新型抗流感病毒药物玛巴洛沙韦的合成工艺优化[j].中国医药工业杂志,2021,52(02):190-197.doi:10.16522/j.cnki.cjph.2021.02.005.)公开了一种测定玛巴洛沙韦及其异构体的方法，该方法采用waters sunfire c18柱(4.6mm×250mm，5μm)为色谱柱，0.1％三氟乙酸溶液为流动相a，乙腈为流动相b，进行色谱测定玛巴洛沙韦及异构体1；另外再采用chiralpak ie柱(4.6mm×250mm，5μm)为色谱柱，正己烷∶乙醇(30∶70)为流动相，检测波长为254nm，流速为0.5ml/min，柱温为30℃的检测条件测定玛巴洛沙韦的异构体2、3，并且只有一个峰。可见该方法需要设置正、反相两种体系的检测条件才能分步检测玛巴洛沙韦各异构体，无法利用同一个检测条件同时分离检测玛巴洛沙韦及其各异构体。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是克服现有技术无法通过同一个hplc检测条件同时测定玛巴洛沙韦原料及其制剂中3个异构体杂质的缺陷和不足，提供一种同时检测玛巴洛沙韦原料及其制剂中3个异构体杂质的方法。

2、本发明的目的是提供所述方法在玛巴洛沙韦质量监控中的应用。

3、本发明上述目的通过以下技术方案实现：

4、本发明保护一种同时检测玛巴洛沙韦原料及其制剂中3个异构体杂质的方法，采用高效液相色谱法进行检测，所述高效液相色谱法的条件为：

5、采用chiralpak ad-h色谱柱，以正己烷、乙醇、二乙胺按照体积比(68～72)：(28～32)：(0.1)的比例混合的混合溶液为流动相，等度洗脱后，进行检测。

6、根据流动相和固定相的极性不同，hplc可以分为正相色谱和反相色谱，其中反相高效液相色谱的固定相由非极性化合物组成，如十八烷基硅烷、c18、c8等有机化合物，而流动相是极性的。因此，极性高的化合物最先被洗脱，低极性或无极性的化合物最后洗脱。hplc大都是对药物、食品、生化分子等物质进行分析，而它们在自然界中都是非极性物质。因此，常常使用反相高效液相色谱对这些物质进行测定。

7、手性hplc法是通过将手性药物引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异而进行分离的，可分为手性试剂衍生化法(chiralreagent derivatization，cdr)、手性流动相法(chiralmobilephase，cmp)及手性固定相法(chiralstationaryphase，csp)进行分离：手性试剂衍生化法是对映体混合物用手性试剂作柱前衍生，形成一对非对映体，然后以常规固定相分离，手性流动相法是将手性试剂添加到流动相中，与手性药物生成非对映异构体复合物从而实现分离；手性固定相法是将手性试剂键合到固定相上，与药物对映异构体反应形成非对映异构体实现分离。但是现有技术都无法在在同一个检测条件下同时实现玛巴洛沙韦及其异构体杂质的检测。

8、发明人经过前期大量的研究，创造性发现根据药物特性结合手性hplc法对手性柱、流动相等关键检测条件进行针对性研究，总结得到可以快速、准确地同时检测玛巴洛沙韦原料及其制剂中3个异构体杂质的方法。进一步地，对手性固定相(手性柱)、流动相以及其他检测参数的整体影响进行不断的研究，总结出更加快速、准确地同时检测玛巴洛沙韦原料及其制剂中3个异构体杂质的优化条件和方法，应用于巴洛沙韦原料及制剂的检测和质量控制。

9、其中，所述3个异构体的结构式如下所示，异构体1～3分别为(r，s)型、(s，s)型和(s，r)型杂质：

10、

11、优选地，所述玛巴洛沙韦测定时，供试品溶液用乙醇配制。

12、更优选地，所述chiralpak ad-h色谱柱的规格为4.6mm×250mm，5μm。

13、优选地，高效液相色谱条件中，所述检测的波长为250～260nm。

14、优选地，高效液相色谱条件中，所述柱温为20～30℃。

15、优选地，高效液相色谱条件中，进样量为10～30μl。

16、优选地，高效液相色谱条件中，流动相的流速为0.9～1.1ml/min。

17、进一步地，所述3个异构体的定量限均为0.02％。

18、进一步地，所述3个异构体的检测限均为0.01％。

19、本发明还保护所述方法在玛巴洛沙韦质量监控中的应用。

20、本发明具有以下有益效果：

21、本发明的检测方法可以在一个色谱条件下同时检测玛巴洛沙韦原料及其制剂中3个异构体杂质，各色谱峰的分离度均较好，检测限、定量限也均符合药物的定性和定量分析要求，灵敏度高，且具有较高的精密度和稳定性，重现性好、准确性高，可用于玛巴洛沙韦生产过程中对杂质的监控，有利于控制、提高玛巴洛沙韦的质量；同时操作简单，检测时间短，非常适用于大规模产业化生产中对原料药的质量监控。