一种用于处理生物样品以鉴定其中蛋白质的方法与流程

本公开属于空间蛋白质组学领域，具体涉及一种用于处理生物样品以鉴定其中蛋白质的装置、含有其的试剂盒及应用该装置处理生物样品以鉴定其中蛋白质的方法。

背景技术：

1、空间蛋白质组学可以研究导致疾病表型的细胞或组织中蛋白质的亚细胞定位。空间信息对于理解这些蛋白质与其亚细胞环境之间的复杂相互作用非常重要，可以指导潜在药物靶点的识别并开发更有效的疗法。虽然肿瘤蛋白质组的患者间变异性已被广泛研究，但肿瘤内异质性的程度仍然很大程度上未知。一些研究利用基于质谱的蛋白质组学来定量不同人体组织的肿瘤间和肿瘤内的异质性。这些研究表明，即使没有明显的形态差异或遗传改变，肿瘤内蛋白质丰度的变化也会影响临床表型。这说明在生物标志物的鉴定和利用中应考虑空间蛋白质组的差异，从而有助于癌症研究和临床应用。

2、但由于不同区域的组织分离和微量采样以及微量的样品制备和分析的局限性，空间蛋白质组学研究仍然具有挑战性。目前有几种方法不断的发展以解决这些未满足的需求，如成像质谱流式(imc)和基质辅助激光解吸/电离质谱成像(maldi-msi)。它们需要通过组织解离并依赖计算映射，其共同缺点是，与光学成像相比，分辨率通常会受到影响，以适应来自小区域的低丰度蛋白的质谱仪器的灵敏度，此类方法后续主要基于质谱检测。此外，还有一类为基于激光显微切割技术(lcm)和液相色谱串联质谱(lc-ms/ms)结合的方法，这类方法可以在一定程度上修正上述方法的不足。对于lcm，它是一种从组织载玻片中分离感兴趣区域的成熟方法，国际蛋白质组学领域领军人物matthias mann团队可以从空间切取80-100个细胞，并鉴定到3,653个蛋白质。然而，lcm仪器成本高，高度依赖专业知识，对样品制备具有高耗材的要求以及会牺牲样品质量和数量的风险。针对这些问题，目前还有一种方法在保持组织样本的完整性的基础上进行的基于水凝胶的组织膨胀空间蛋白质组学技术，即将组织嵌入可膨胀的水凝胶中，使样品保持原形态的基础上进行放大，之后进行微量样本切取收集和基于胶内酶解的样本制备。这一技术目前可以从最少0.37nl的组织中鉴定到约1000个蛋白质，同时组织膨胀技术无需高配置设备(如lcm)即可实现较高的空间分辨率。

3、然而，现有的基于组织膨胀技术的胶内酶解方法(样本处理，蛋白酶解和肽段收集)仍有一些缺陷。这包括样本处理步骤较多导致的工作量大且繁琐，使得其较难与自动化装置联用从而实现样本处理的自动化；样本处理过程会引入较多的盐，后续需要商品化除盐柱处理从而提高了样本处理的成本并增加了样本的丢失率；样本处理过程中需要不断的进行多种耗材间的转移从而有如非特异性吸附等样本损耗的风险，并且降低检测的重复性；样本处理的大小有下限，即约0.37nl，但是目前还做不到针对亚纳升体积的样本处理，这会降低该技术对样本空间异质性的解析能力；同时，胶内酶解处理的样本鉴定到的肽段和蛋白质数量还有较大的提升空间。

4、公开内容

5、本公开主要解决了基于组织膨胀的空间蛋白质组学技术中胶内酶解所面临的一个或多个问题，包括通量低、样本处理分辨率不高、过程繁琐、重复性低以及肽段/蛋白质鉴定量不足等问题。

6、针对以上问题，本公开的第一方面提供了一种用于处理生物样品以鉴定其中蛋白质的装置，包括：

7、管体，所述管体包括反应区以及位于反应区下方的导流区，反应区与导流区之间液体连通，和固相萃取吸附填料，位于反应区的底部或导流区上部，并且其被配置为当反应区和导流区的气压相同时能够截留反应区中的液体，当反应区的气压大于导流区的气压时能够使反应区中的液体流出，

8、其中所述固相萃取吸附填料的厚度与直径的比值小于1。

9、在某些实施方案中，本公开所述固相萃取吸附填料的厚度与直径的比值小于或等于0.8。

10、在某些实施方案中，本公开所述固相萃取吸附填料的厚度与直径的比值小于或等于0.7。

11、在某些实施方案中，本公开所述固相萃取吸附填料的厚度与直径的比值小于或等于0.6。

12、在某些实施方案中，本公开所述固相萃取吸附填料的厚度与直径的比值小于或等于0.5。

13、在某些实施方案中，本公开所述导流区的最大内径小于所述反应区的内径。

14、在某些实施方案中，本公开所述反应区的内径为2～4mm。

15、在某些实施方案中，本公开所述反应区的内径为2～3mm。

16、在某些实施方案中，本公开所述导流区的最大内径为1～1.5mm。

17、在某些实施方案中，本公开所述固相萃取吸附填料的厚度小于或等于1mm。

18、在某些实施方案中，本公开所述固相萃取吸附填料的厚度为约0.9mm、约0.8mm、约0.7mm、约0.6mm、约0.5mm、约0.4mm、约0.3mm、约0.2mm或约0.1mm。

19、在某些实施方案中，本公开所述反应区的内腔为上下内径相等的柱状中空结构，所述导流区的内腔为横截面上宽下窄的锥状中空结构。

20、在某些实施方案中，本公开所述导流区的长度小于或等于10mm。

21、在某些实施方案中，本公开所述导流区的长度小于或等于5mm。

22、在某些实施方案中，本公开所述导流区的长度约4.5mm、约4mm、约3.5mm、约3mm、约2.5mm、约2mm或约1.5mm。

23、在某些实施方案中，本公开所述导流区通过位于反应区底部的通孔与反应区液体连通。

24、在某些实施方案中，本公开所述固相萃取吸附填料位于所述通孔处。

25、在某些实施方案中，本公开所述反应区与导流区的连接处内部为圆滑导角结构。

26、在某些实施方案中，本公开所述反应区上设有可见的体积刻度标识。

27、在某些实施方案中，本公开所述管体还有一个突出于管体外表面的凸起部件，被配置为使所述固相萃取装置能够悬挂在放置架上。

28、在某些实施方案中，本公开所述凸起部件设置在所述管体的上部。

29、在某些实施方案中，本公开所述放置架为不同规格的深孔板。

30、在某些实施方案中，本公开所述反应区的容积为2-250μl。

31、在某些实施方案中，本公开所述反应区的容积为2-100μl。

32、在某些实施方案中，本公开所述反应区的容积为10-100μl。

33、在某些实施方案中，本公开所述反应区的容积为20-100μl。

34、在某些实施方案中，本公开所述反应区的容积为20-50μl。

35、在某些实施方案中，本公开所述管体还包括与其配合的管盖。

36、在某些实施方案中，本公开所述固相萃取吸附填料由不同链长的烷基修饰的多孔硅胶或多孔陶瓷颗粒、离子交换树脂或化学键合离子交换剂制成。

37、在某些实施方案中，本公开所述固相萃取吸附填料的孔径为1-12μm。

38、在某些实施方案中，本公开所述固相萃取吸附填料的孔径为1-5μm。

39、在某些实施方案中，本公开所述固相萃取吸附填料为c8或c18固相萃取吸附填料、强阳离子交换填料或强阴离子交换填料。

40、在某些实施方案中，本公开所述固相萃取吸附填料为c8或c18固相萃取膜片、强阳离子交换膜片或强阴离子交换膜片，所述膜片与导流区的内表面抵接。

41、在某些实施方案中，本公开所述固相萃取吸附填料为c18固相萃取膜片，所述c18固相萃取膜片与导流区的内表面抵接。

42、在某些实施方案中，本公开所述管体为移液器吸头。

43、在某些实施方案中，本公开所述管体为经剪裁后符合上述规格的移液器吸头。

44、在某些实施方案中，本公开所述生物样品以样品-凝胶复合体的形式存在。

45、在某些实施方案中，本公开所述样品-凝胶复合体中的凝胶为水凝胶。

46、在某些实施方案中，本公开所述水凝胶为聚丙烯酰胺凝胶。

47、在某些实施方案中，本公开所述生物样品以膨胀的样品-凝胶复合体的形式存在。

48、本公开的第二方面提供了一种用于处理生物样品以鉴定其中蛋白质的试剂盒，包括：本公开的装置，其中所述生物样品的处理在所述装置中进行。

49、在某些实施方案中，本公开的试剂盒，还包括：用于活化固相萃取吸附填料的固定相活化剂，脱色剂，脱水剂，消化剂，终止消化剂，和肽段洗脱剂。

50、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述固定相活化剂为醇类或乙腈。

51、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述固定相活化剂为乙腈。

52、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述固定相活化剂在使用时将乙腈配制为70～90％的乙腈水溶液。

53、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述固定相活化剂在使用时将乙腈配制为80％乙腈水溶液。

54、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述脱色剂为有机溶剂和无机盐的混合溶液。

55、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述脱色剂中所述有机溶剂为乙腈，所述无机盐为碳酸氢铵水溶液。

56、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述脱色剂为乙腈和碳酸氢铵的组合。

57、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述脱色剂以溶液形式存在。

58、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述以溶液形式存在的脱色剂含有40～60v/v％的乙腈，40～60mm碳酸氢铵和余量的水。

59、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述以溶液形式存在的脱色剂含有50v/v％的乙腈，50mm碳酸氢铵和余量的水。

60、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述脱水剂为醇类或乙腈。

61、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述脱水剂为乙腈。

62、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述消化剂包括胰蛋白酶。

63、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述消化剂为胰蛋白酶、乙酸、乙腈和碳酸氢铵的组合。

64、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述消化剂以溶液形式存在。

65、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述消化剂中含有10-25ng/μl的胰蛋白酶，ph为8-9。

66、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述消化剂中含有10-25ng/μl的胰蛋白酶，0.002-0.005v/v％乙酸，40～60mm碳酸氢铵溶液和10v/v％乙腈。

67、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述消化剂中含有10-25ng/μl的胰蛋白酶，0.002-0.005v/v％乙酸，45mm碳酸氢铵溶液和10v/v％乙腈。

68、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述终止消化剂为有机溶剂和酸的混合溶液。

69、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述终止消化剂为乙腈和三氟乙酸的组合。

70、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述终止消化剂含有1～3v/v％乙腈、0.05～0.2v/v％三氟乙酸的水溶液。

71、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述终止消化剂含有2v/v％乙腈、0.1v/v％三氟乙酸的水溶液。

72、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述肽段洗脱剂为有机溶剂和酸的混合溶液。

73、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述肽段洗脱剂为乙腈或乙醇与三氟乙酸的组合。

74、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述肽段洗脱剂为乙腈与三氟乙酸的组合。

75、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述肽段洗脱剂为含有60～80v/v％乙腈、0.05～0.2v/v％三氟乙酸的水溶液。

76、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述肽段洗脱剂为含有70v/v％乙腈、0.1v/v％三氟乙酸的水溶液。

77、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，还包括：乙腈或乙醇，碳酸氢铵，胰蛋白酶，乙酸，以及三氟乙酸。

78、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，还包括以干粉或液体形式存在pbs缓冲液。

79、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，还包括：低吸附离心管和/或深孔板和/或质谱缓冲液。

80、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述质谱缓冲液为乙腈和甲酸的组合。

81、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述质谱缓冲液为含有1～3v/v％乙腈和0.05～0.2v/v％甲酸的水溶液。

82、在某些实施方案中，本公开的试剂盒中，所述质谱缓冲液为含有2％乙腈和0.1％甲酸的水溶液。

83、本发明的第三方面提供了本公开的装置或本公开的试剂盒用于处理生物样品以鉴定其中蛋白质的用途。

84、本发明的第四方面提供了一种处理生物样品以鉴定其中蛋白质的方法，其包括：使用本公开的装置或本公开的试剂盒对生物样品进行处理。

85、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述生物样品的处理在本公开所述的装置中进行。

86、在某些实施方案中，本公开的方法，包括：

87、(1)活化所述装置中的固相萃取吸附填料；

88、(2)将待处理的生物样品置于经步骤(1)处理后的所述装置中，对其进行脱色、脱水；

89、(3)对经步骤(2)处理后的生物样品进行酶解；

90、(4)回收经步骤(3)得到的肽段。

91、在某些实施方案中，本公开所述步骤(1)包括：

92、1.1向所述装置中加入20-100μl 70～90％的乙腈水溶液，

93、1.2在50g-200g下离心进行活化；

94、1.3离心至剩余液体排出装置。

95、在某些实施方案中，本公开步骤1.2所述离心在80g-150g下进行。

96、在某些实施方案中，本公开步骤1.2所述离心在100g下进行。

97、在某些实施方案中，本公开所述步骤(2)包括：

98、2.1将待处理的生物样品置于经步骤(1)处理后的所述装置中，

99、2.2加入含有40～60v/v％的乙腈，40～60mm碳酸氢铵和余量的水的脱色剂，孵育至样品澄清，离心除去溶剂，

100、2.3加入20-100μl乙腈，孵育至样品脱水，离心除去溶剂。

101、在某些实施方案中，本公开步骤2.2所述孵育为在室温孵育。

102、在某些实施方案中，本公开步骤2.3所述孵育为在室温孵育。

103、在某些实施方案中，本公开所述步骤(3)包括：

104、3.1向所述装置中加入消化剂，孵育；

105、3.2加入消化缓冲液，继续孵育。

106、在某些实施方案中，本公开步骤3.1所述消化剂体积为1～3μl。

107、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述消化剂体积为2μl。

108、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述消化剂中含有10-25ng/μl的胰蛋白酶，ph为8-9。

109、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述消化剂中含有10-25ng/μl的胰蛋白酶，0.002-0.005v/v％乙酸，40～60mm碳酸氢铵溶液和10v/v％乙腈。

110、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述消化剂中含有10-25ng/μl的胰蛋白酶，0.002-0.005v/v％乙酸，45mm碳酸氢铵溶液和10v/v％乙腈。

111、在某些实施方案中，本公开步骤3.1所述孵育为在37℃下孵育3～5小时。

112、在某些实施方案中，本公开步骤3.1所述孵育为在37℃下孵育4小时。

113、在某些实施方案中，本公开步骤3.2所述消化缓冲液体积为2～15μl。

114、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述消化缓冲液体积为4μl或10μl。

115、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述消化缓冲液为碱性无机盐缓冲液。

116、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述消化缓冲液为碳酸氢铵水溶液。

117、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述消化缓冲液为8～12mm的碳酸氢铵水溶液。

118、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述消化缓冲液为10mm的碳酸氢铵水溶液。

119、在某些实施方案中，本公开步骤3.2所述孵育为在室温下孵育7～12小时。

120、在某些实施方案中，本公开步骤3.2所述孵育为在室温下孵育8小时。

121、在某些实施方案中，本公开所述步骤(3)还包括：

122、3.3加入终止消化剂终止消化。

123、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述终止消化剂为有机溶剂和酸的混合溶液。

124、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述终止消化剂为乙腈和三氟乙酸的组合。

125、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述终止消化剂为含有1～3v/v％乙腈、0.05～0.2v/v％三氟乙酸的水溶液。

126、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述终止消化剂为含有2v/v％乙腈、0.1v/v％三氟乙酸的水溶液。

127、在某些实施方案中，本公开所述步骤(4)包括：

128、4.1对步骤(3)的产物离心，收集离心液；

129、4.2向所述装置中加入有机溶剂与酸的混合溶液，孵育，离心，收集离心液；

130、4.3重复步骤4.2 1-2次。

131、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述有机溶剂与酸的混合溶液为乙腈或乙醇与三氟乙酸的组合。

132、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述有机溶剂与酸的混合溶液为乙腈与三氟乙酸的组合。

133、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述有机溶剂与酸的混合溶液为含有60～80v/v％乙腈、0.05～0.2v/v％三氟乙酸的水溶液。

134、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述有机溶剂与酸的混合溶液为含有70v/v％乙腈、0.1v/v％三氟乙酸的水溶液。

135、在某些实施方案中，本公开步骤4.2所述混合溶液的体积为20-40μl。

136、在某些实施方案中，本公开步骤4.2所述孵育时间为10-20分钟。

137、在某些实施方案中，本公开步骤4.2所述孵育时间为15分钟。

138、在某些实施方案中，本公开所述步骤(4)还包括：

139、4.4加入乙腈使生物样品脱水，离心，收集离心液；

140、4.5合并上述离心液，可选地，对其进行干燥，得到肽段。

141、本发明的第五方面提供了一种鉴定生物样品中蛋白质的方法，包括：

142、1)使用本公开的装置或本公开的试剂盒对生物样品进行处理，获得肽段；

143、2)使用lc-ms/ms对肽段进行检测。

144、在某些实施方案中，本公开所述步骤2)包括：

145、用质谱缓冲液重悬肽段；

146、离心重悬的肽段，取上清液进行lc-ms/ms检测。

147、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述质谱缓冲液为有机溶剂和酸的混合溶液。

148、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述质谱缓冲液为乙腈和甲酸的组合。

149、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述质谱缓冲液为含有1～3v/v％乙腈、0.05～0.2v/v％甲酸的水溶液。

150、在某些实施方案中，本公开的方法中，所述质谱缓冲液为含有2v/v％乙腈、0.1v/v％甲酸的水溶液。

151、术语定义

152、在本发明中，除非另有说明，否则本公开中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。

153、本公开中，“固相萃取吸附填料”可以由不同链长的烷基修饰的多孔硅胶或多孔陶瓷颗粒、离子交换树脂或化学键合离子交换剂制成，其被广泛应用于有机化合物的分离、纯化和分析，通常作为色谱柱填料。所述固相萃取吸附填料的平均孔径为1-12μm，优选为1-5μm。在某些实施方案中，所述固相萃取吸附填料可以是c8或c18固相萃取吸附填料。在某些实施方案中，所述固相萃取吸附填料由碳链长度为8或18的链烷基修饰的硅胶制成。例如c18固相萃取吸附填料可以是常用的十八烷基硅烷键合硅胶(octadecyl silane chemicallybonded to porous silica)。在某些实施方案中，所述固相萃取吸附填料可以是强阳离子交换(strong cation exchange,scx)或强阴离子交换(strong anion exchange,sax)填料。所述固相萃取吸附填料可以商购获得，也可以应用公知方法制备获得。固相萃取吸附填料可以是商购获得的c18固相萃取膜片，例如3m emporetmc18 47mm extraction disks，瑞思泰康resprep-c18 spe固相萃取膜片、岛津sglc c18固相萃取薄膜片等，也可以是商购获得的c8固相萃取膜片、强阳离子交换膜片或强阴离子交换膜片，例如“emporetmspe disk,c8”、“emporetmspe disk,strong anion exchange”、“emporetmspe disk,strong cationexchange”。

154、本公开中，“样品-凝胶复合体”指组织和凝胶同时存在，组织可以与凝胶有任意组合形式，例如样品部分位于凝胶表面或完全位于凝胶内部等，优选完全位于凝胶内部。所述样品是生物样品，包括细胞、标本、活组织检查样品、器官或其部分、或整个生物体。所述样品可以是活的、固定或保存的，例如是固定的组织切片、新鲜冷冻组织或包埋在石蜡中的组织切片。所述样品-凝胶复合体中的凝胶可以为水凝胶，所述水凝胶也可以为聚丙烯酰胺凝胶。所述样品-凝胶复合体能够在水或水性缓冲液中膨胀，得到线性膨胀1-25倍(例如1-20倍、1-10倍、2-8倍、2-7倍)左右的可视化组织样品。取样时，根据需要用打孔器(例如在直径毫米尺度)可取到原始直径10-500微米左右的微小组织样品用于蛋白质组学鉴定。所述样品-凝胶复合体制备方法是公知的，例如，可以参照cn115372527a公开的方法制备，也可以参考文献nature communications,(2022)13:7242公开的方法制备，也可以参照本公开实施例1的方法制备。

155、本公开中，“水凝胶”是指亲水性的且用极性溶剂溶胀或能够用极性溶剂溶胀的聚合材料，例如在水中可以迅速溶胀的聚合材料。水凝胶可以通过水溶性或亲水性高分子以一定的化学交联或物理交联形成。这些高分子包括多糖类(例如淀粉、纤维素、海藻酸、透明质酸、壳聚糖等)、多肽类(例如胶原、聚l-赖氨酸、聚l-谷胺酸等)、醇、丙烯酸及其衍生物类(例如聚丙烯酸，聚甲基丙烯酸，聚丙烯酰胺，聚n-聚代丙烯酰胺等)。合适的水凝胶包括交联水凝胶、溶胀水凝胶和干燥或部分干燥的水凝胶。

156、本公开中，“50％乙腈/50％100mm碳酸氢铵溶液”表示溶液中乙腈的比例为50％，100mm碳酸氢铵溶液的比例为50％，例如将5ml乙腈与5ml 100mm碳酸氢铵溶液混合可得50％乙腈/50％100mm碳酸氢铵溶液；类似的，“2％乙腈/0.1％三氟乙酸”表示溶液中乙腈的比例为2％，三氟乙酸的比例为0.1％；其余类似定义可参照前述内容进行理解。

157、在本公开中，“上部”、“下部”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本公开和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明保护范围的限制。

158、本公开中，术语“约”可理解为在所述值的+/-10％、+/-9％、+/-8％、+/-7％、+/-6％、+/-5％、+/-4％、+/-3％、+/-2％、+/-1％、+/-0.5％、+/-0.4％、+/-0.3％、+/-0.2％、+/-0.1％以内。除非另外根据上下文显而易见，否则本文提供的所有数值都由术语“约”修饰。

159、有益效果

160、本公开提供了一种用于处理生物样品以鉴定其中蛋白质的装置及试剂盒，其可用于生物样品的处理，本公开还提供了利用该装置处理生物样品以鉴定其中蛋白质的方法。该装置或试剂盒或方法具有以下一个或多个方面的优点：

161、1)可以依据样本大小和实验需求选择样本处理装置，从而减少样本损耗、降低样本处理成本并提高针对复杂样本的处理能力。

162、2)可以与自动化装置兼容，将多个样品置于96孔板中同时处理，提高检测通量与检测效率。

163、3)无需除盐，从而降低样品在除盐过程中的肽段丢失率，并降低样本处理成本、简化操作。

164、4)漏切率减少，无丢样问题。

165、5)检测重现性好。

166、6)肽段和蛋白质鉴定量提高。

167、7)可以处理极微小生物样品，例如亚纳升体积的样品，最小样品体积低至约0.042nl，在所提供实施例和对照例取样方式下，为常规胶内酶解的最低处理量的八分之一。

技术实现思路