一种高效测定血浆中布洛芬的浓度的方法与流程

本发明涉及医学检验，具体为一种高效测定血浆中布洛芬的浓度的方法。

背景技术：

1、布洛芬是解热镇痛药物，非甾体抗炎药，其化学名称2-甲基-4-(2-甲基丙基)苯乙酸，分子式：c13h18o2，分子量：206.29，用于普通感冒或流行性感冒引起的发热即其通过下丘脑体温调节中枢，达到解热的作用，可以通过抑制环氧化酶，减少前列腺素的合成，达到镇痛和抗炎作用，同时也可用于风湿，类风湿性关节炎，值得特别说明是是布洛芬是世界卫生组织、美国fda唯一共同推荐的儿童退烧药，是公认的儿童首选抗炎药，因此布洛芬的使用特别广泛，因此对布洛芬的研究具有重要意义，而在对血液进行检测时需要对血浆中布洛芬浓度数据的测定。经检索，发现现有技术中的血浆中布洛芬浓度的检测方法典型的如公开号cn112433018a一种血浆中布洛芬含量的检测方法，包括溶液配制、预处理、浓度测定和、定量分析四个步骤，在定量分析中，设置流动相a为含2mmol/l甲酸铵水溶液，并匹配相应的色谱梯度为：0.01到0.2s，流动相b由25％到95％，0.20到2.00s，流动相b为95％，2.00到2.10s，流动相b由95％到25％，2.10到2.80s，平衡流动相并停止。本发明通过四个步骤，可使布洛芬的液质信号的出峰时间适中，峰型良好，响应强，从而更准确地确定血浆中布洛芬的浓度；还可以排出基质效应对实验数据造成的干扰；同时本发明的预处理过程简单，可批量处理血浆样品。其主要特点是操作简便。

2、例如公开号为cn111157639a一种高效液相质谱法测定大鼠血浆中布洛芬的浓度的方法，包括以下步骤：制备校正标示样、质控样品、空白样品、qc0样品、uloq without is样品、reagent样品、基质效应样品和回收率样品。利用所述校正标示样和所述质控样品制得标准曲线，将待测样品根据所述标准曲线得到待测样品中的布洛芬浓度。利用所述空白样品、所述qc0样品、所述uloq without is样品和reagent样品用来相互校正，减少干扰性。利用所述基质效应样品和所述回收率样品来评价该方法的基质效应和回收率。应用hplc-ms/ms(高效液相质谱)法同时测量大鼠血浆中布洛芬的浓度，该测试方法具有干扰性小，回收率高的优点。

3、综上所述，现有的血浆中布洛芬浓度的检测方法时直接选取血液样本进行洛芬浓度检测，从而使得检测数据容易受到血浆中其它物质的影响而导致检测数据偏差，针对上述问题，需要对现有设备进行改进。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种高效测定血浆中布洛芬的浓度的方法，以解决上述背景技术中提出的现有的血浆中布洛芬浓度的检测方法时直接选取血液样本进行洛芬浓度检测，从而使得检测数据容易受到血浆中其它物质的影响而导致检测数据偏差的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种高效测定血浆中布洛芬的浓度的方法，包括

3、s1溶液配制阶段：

4、s11内标物配制：称取吲哚美辛,用乙腈溶解并定容，配制成1mg/m1的储备液，精取该溶液用乙腈稀释得20μg/m1的内标物；

5、s12标准溶液的配制:精密称取布洛芬，用20μg/m的内标物溶解并定容，配制成1280μg/ml的含内标储备液；

6、s2血浆处理阶段：

7、取血浆样品加入内标物搅拌混匀,加入乙腈300μ1,涡旋、振荡和离心，然后取上清液进样5μ1；

8、s3色谱图制取阶段：

9、s31取空白血浆100μ1，按s2操作，得空白血浆色谱图即内部不含布洛芬的血浆；

10、s32将含内标的标准溶液进样,得标准液及内标的色谱图；

11、s33将空白血浆加入含内标的布洛芬标准液，按s2操作，得空白血浆加入布洛芬及内标的色谱图；

12、s4曲线绘制阶段：

13、采用加权(1/c2)最小二乘法进行回归运算计算出布洛芬的浓度。

14、优选的，所述s12标准溶液的配制包括用20μg/m的内标物为稀释剂分别得含布洛芬为不同μg/m1的样本,内标为0.4μg/ml的血浆样本。

15、优选的，所述s2血浆处理阶段的涡旋振荡时间为15min,离心时间为15min每min12000转，同时s2血浆处理阶段中的乙腈可无差别替换成甲醇。

16、优选的，所述s3色谱图制取阶段的色谱条件是色谱条件为inertstain aq-c185.0μm(46mm×150mm，5mm)，且保护柱的zorbax sb-c18(46mm×125mm，5mm)，同时柱温为35℃，同时高效液相系统采用通用型的紫外检测器及高压泵，酸性流动相使用离子对试剂混合液对s2血浆处理阶段获取的离心上清液进行等度洗脱。

17、优选的，所述s31阶段内部用20μ1乙腈或者20μ1甲醇代替原有的内标溶液，其余步骤照旧。

18、优选的，所述s3色谱图制取阶段的进样流速为每min5 ml，且操作的单次进样量5μl。

19、优选的，所述s3色谱图制取阶段通过结合s31、s32和s33得到的空白血浆色谱图、标准液及内标的色谱图以及加入布洛芬及内标的色谱图将得出布洛芬和内标在血液内保留的时间。

20、优选的，所述s3色谱图制取阶段的紫外检测器对波长以及测峰面积进行记录，且紫外检测器可误差别替换为荧光检测器以及二极管阵列检测器，同时紫外检测器、荧光检测器以及二极管阵列检测器均用于对波长以及测峰面积进行记录和测算。

21、优选的，所述s4曲线绘制阶段的计算逻辑为采用加权(1/c2)最小二乘法进运算，运算采用的线性回归方程为：

22、y＝bx+a

23、其中以布洛芬浓度(c)为横坐标，布洛芬与内标峰面积比y为纵坐标。

24、优选的，所述质谱测定条件为电喷雾离子源(esi),电晕放电电流4μa,雾化气压力30psig,干燥气流速130l/min,干燥气温度350℃，毛细管电压35kv,碎片电压75v,峰宽q10，负离子方式检测，在选择离子监测sm模式下检测质荷比(m/z)为205.2布洛芬和3561内标吲哚美辛的准分子离子，用于定量分析的离子反应分别为m/z205.1→m/z160.9，其为布洛芬，和m/z208.1→m/z164.0，其为布洛芬-d3。

25、与现有技术相比，本发明的有益效果是：该高效测定血浆中布洛芬的浓度的方法，

26、利用s3色谱图制取阶段获取的空白血浆色谱图以及标准液及内标的色谱图作为含有布洛芬的血浆色谱图即待检测的血液样本提供对比依据，并通过线性回归方程即加权(1/c2)最小二乘法公式y＝bx+a计算出其存在的相同的干扰浓度数据的物质，将其剔除和规避，从而可避免血浆中的其他物质影响血浆中布洛芬的真实浓度，进而便于保证检测数据的准确性，同时空白血浆色谱图的获取以及以及标准液及内标的色谱图的获取与待检测的血液样本的血浆色谱图获取过程一致，即其可同时进行获取，从而便于提高测定的效率，同时与操作多种不同的检测方式相较，本发明更为简单。